Responsividade do hormônio liberador de corticotropina (CRH) em crianças com dispepsia funcional

O objetivo principal deste estudo é avaliar se existem diferenças na responsividade do CRH (hormônio liberador de corticotropina) em crianças e adolescentes com DF (dispepsia funcional) em comparação com controles. Além disso, pretendemos explorar as relações entre a capacidade de resposta do CRH, citocinas inflamatórias, estado e traço de ansiedade e sintomas auto-relatados.

Os objetivos específicos do estudo são:

1. Determinar se as alterações nos perfis de citocinas séricas, variabilidade da frequência cardíaca, parâmetros do perfil de estresse, estado e traço de ansiedade e sintomas autorrelatados diferem entre pacientes com DF e controles após a infusão de CRH.
2. Determinar se as alterações no soro ACTH (hormônio adrenocorticotrópico) ou cortisol após a infusão de CRH diferem entre pacientes com DF e controles ou em função da magnitude do estado ou traço de ansiedade entre os pacientes com DF.

Este estudo é um estudo piloto de um único local.

A resposta bioquímica à estimulação do CRH será explorada para cada uma das citocinas, mediadores e hormônios detalhados aqui, calculando sua taxa de formação, concentração máxima (Cmax), tempo para concentração máxima (Tmax), exposição total do corpo (AUC) e taxa de recuperação (conforme relevante). As análises farmacocinéticas serão aplicadas aos dados onde houver fases ascendentes e descendentes claras no perfil de concentração versus tempo. Os dados de concentração versus tempo serão ajustados à curva usando um algoritmo de peeling para gerar estimativas de parâmetros poliexponenciais iniciais. As estimativas finais da taxa aparente de recuperação serão determinadas a partir de um algoritmo de regressão de mínimos quadrados ponderado iterativo e não linear. A avaliação da qualidade do ajuste para o modelo farmacocinético será feita usando critérios padrão (por exemplo, Critérios de Informação de Akaike e Schwartz, função objetiva e os coeficientes de variação para parâmetros estimados), a distribuição de estimativas residuais ponderadas e a associação entre o observado e o previsto concentrações. Os parâmetros farmacocinéticos independentes do modelo serão calculados usando técnicas padrão (ou seja, teoria do momento estatístico). Cmax e Tmax individuais serão estimados pela inspeção da concentração plasmática observada versus dados de tempo. A área sob a curva de concentração plasmática versus tempo será determinada usando a regra trapezoidal log-linear mista (não será realizada extrapolação da AUC para o infinito). Essas análises serão realizadas no Kinetica v5.0 (ThermoElectron, Philadelphia, PA). As diferenças entre casos e controles em variáveis ​​de resposta contínua serão comparadas usando testes t de amostra independente bilateral. As relações entre as variáveis ​​de resposta contínua serão avaliadas por análise de variância univariada, técnicas de regressão linear e não linear. Os fatores categóricos do paciente e as variáveis ​​de resposta serão comparados com o teste exato de Fisher em uma tabulação cruzada 2 x 2. Todas as análises estatísticas serão realizadas usando o pacote de software SSPS (versão 15.0, SPSS Inc., Chicago, IL).

Tamanho da amostra

Um tamanho de amostra de 12 para cada grupo (controles e pacientes com DF) foi escolhido. Doze pacientes por grupo fornece 99% de poder para detectar uma secreção de ACTH 1,5 vezes maior em pacientes com DF em comparação com os controles com o desvio padrão assumido como 20% com base em 2 estudos anteriores com adultos (ambos os quais detectaram aproximadamente um aumento de 2 vezes ). O poder pode ser menor para análise secundária, no entanto, isso é considerado aceitável devido à natureza piloto deste estudo.

Haverá dois grupos compostos por indivíduos que foram atendidos na Clínica de Dor Abdominal por dor abdominal de pelo menos 8 semanas de duração e preenchendo critérios baseados em sintomas para DF e agendados para endoscopia e controles, que não têm histórico recente de dor abdominal .

Ambos os grupos serão submetidos aos mesmos testes/procedimentos.

Os participantes farão um jejum mínimo de 8 horas antes da avaliação, que terá início entre 8 e 10 horas. Participantes do sexo feminino com mais de 10 anos de idade receberão um UCG como prática padrão antes de receber qualquer medicamento ou droga. O pai e o filho preencherão o BASC-2 e as versões de estado e traço do STICSA-C. Um perfil de estresse de biofeedback será realizado. Em seguida, um cateter IV será colocado e o participante poderá relaxar por 30 minutos antes da próxima parte do estudo. O participante então passará por 30 minutos de monitoramento basal da frequência cardíaca antes do teste de estimulação do CRH. Após o período de linha de base de 30 minutos, uma amostra de sangue será obtida para citocinas séricas, ACTH, cortisol e CBG. O participante avaliará a gravidade da dor abdominal, náusea e inchaço, respectivamente, em escalas de 10 pontos.

Para o teste de estimulação do CRH, a corticorelina (um análogo do CRH humano) será administrada na dose de 1 mcg por kg de peso corporal (até um máximo de 100 mcg) administrada em 1 minuto. Amostras de sangue serão obtidas em intervalos de 15 minutos por 60 minutos para determinação das concentrações de ACTH, cortisol e CBG. O seguinte será obtido ou registrado em 15, 30 e 60 minutos: amostras de sangue para concentrações de citocinas, classificações (em uma escala de 10 pontos) de dor abdominal, náusea e inchaço, parâmetros de perfil de estresse e estado de ansiedade auto-relatado (ou seja STICSA-C Seu humor neste momento). O monitoramento da frequência cardíaca será conduzido durante o período de 60 minutos.

O teste de estimulação do CRH é um teste diagnóstico rotineiramente utilizado em Endócrino. Não é, no entanto, rotina para nenhum dos dois grupos de participantes deste estudo.

Medidas

1. Variabilidade da frequência cardíaca (VFC)

   O eletrocardiograma será registrado e a VFC avaliada utilizando um I-330 C2 Physiograph (J & J Engineering, Poulsbo, WA) e o software Window USE Physiolab. Cabos de eletrodos MC-5SGW serão usados ​​para conectar a 2 eletrodos de pulso (+ à esquerda) e um aterramento EDR que será colocado em um dedo.

   O sinal HRV será derivado dos dados de ECG. A análise espectral de potência global será aplicada ao sinal de VFC para extrair os parâmetros simpatovagais: potência em baixa frequência (LF) e potência em alta frequência (HF). LF é definido como a área sob a curva na faixa de frequência de 0,04-0,15 Hz e HF são definidos como a área sob a curva na faixa de frequência de 0,15-0,50 Hz. A potência na banda LF (0,04-0,15 Hz) representa principalmente atividade simpática e a potência na banda HF (0,15-0,5 Hz) do espectro de potência HRV representa atividade puramente parassimpática ou vagal. A relação LF-para-HF também será calculada como uma medida do equilíbrio simpatovagal.

2. Perfil de Estresse

   As leituras do perfil de estresse de biofeedback serão registradas com um único Fisiógrafo I-330 C2 (J & J Engineering, Poulsbo, WA), utilizando o software Windows USE 3 Physiolab.

   As seguintes modalidades serão monitoradas em todos os pacientes:

   1. Eletromiografia de superfície (sEMG) - as leituras serão medidas em microvolts (mcv) usando a colocação de banda larga no frontalis; após a preparação padrão da pele, os sensores pré-gelificados de prata/cloreto de prata Red Dot serão colocados na largura de um dedo acima de cada sobrancelha e conectados a um cabo MV-1L sEMG por meio de clipes crocodilo CL 50. Sensores de sEMG também serão colocados nos pontos de pulso em ambos os pulsos para monitorar e avaliar os batimentos cardíacos.
   2. Temperatura da pele periférica (TEMP) - será medida em graus Fahrenheit (F.) por meio de um termistor (sensor RV-5 TEMP/EDR) conectado à ponta do dedo médio do participante (ou terceiro dígito substituto) na mão dominante.
   3. Resposta eletrodérmica (EDR) - a atividade de condutância da pele (SCA) será medida em microohms (µohm) por um (sensor RV-5 TEMP/EDR) conectado ao dedo indicador dominante por um disco de prata/cloreto de prata SE 35 EDG de 8 mm embutido em um fecho de velcro com gel à base de soro fisiológico no disco, para garantir o contato com a pele.

3. Proteínas Plasmáticas (citocinas/mediadores/hormônios)

   Aproximadamente 39 mL de sangue serão coletados através do cateter IV para determinações de proteínas plasmáticas, incluindo TNF-α, IL-4, IL-5, IL-8, eotaxina-3, MCP-1, MMP-9, ECP, MBP, cortisol , ACTH e CBG. As proteínas plasmáticas serão medidas por kits de imunoensaio disponíveis comercialmente. A Tabela 1 apresenta a divisão da quantidade de sangue que será coletada em cada ponto de tempo. A Tabela 2 apresenta os requisitos de amostra e laboratório de testes.

4. Cortisol Plasmático Livre

   O cortisol plasmático livre será calculado usando a seguinte fórmula:

   U = √ Z2 + 0,0122 C - Z(média)M Onde U = concentração molar de cortisol não ligado, C = concentração molar de cortisol total, T= concentração molar de CBG e Z = 0,0167 + 0,182 (T-C)(média) M

   (0,0167 e 0,182 são constantes para a afinidade do CBG pelo cortisol a 37 graus C e a proporção de cortisol ligado à albumina para não ligado, respectivamente).

5. Perfil BASC-2 As versões para pais e filhos da Escala de Avaliação Comportamental para Crianças - Segunda Edição (BASC-2) serão preenchidas pelo participante e um dos pais, respectivamente. O BASC-2 é um sistema de classificação objetiva do funcionamento psicológico na juventude que fornece descrições padronizadas de problemas e competências. Existem diferentes versões para crianças (de 8 a 11 anos), adolescentes (de 12 a 18 anos) e pais (versão diferente para crianças de 6 a 11 anos e de 12 a 18 anos). (36) Os escores brutos são padronizados como escores T (M=50, SD=10) com base em uma amostra normativa de 3.483 crianças de 4 a 18 anos estratificada de acordo com os dados do Censo dos EUA. As subescalas individuais apresentam boa confiabilidade (consistência interna), com exceção da subescala Atipicidade do BASC-PRS e das subescalas Somatização e Autoconfiança do BASC-SRS (r< 0,70). O BASC também demonstrou validade de critério e construto. Os escores T para as subescalas de ansiedade (pais e autorrelato) serão usados ​​como uma medida de traço de ansiedade para análise.

6. STICSA-C

   O State-Trait Inventory for Cognitive and Somatic Anxiety, Child Version (STICSA-C) foi adaptado da versão adulta da medida, o STICSA. (37) O STICSA-C é composto por duas escalas de autorrelato separadas, cada uma com 21 itens, para medir dois conceitos distintos de ansiedade: ansiedade-estado e ansiedade-traço. Este último pede às crianças que respondam aos itens indicando como se sentem, em geral; o primeiro pede às crianças que respondam sobre como se sentem agora, neste exato momento. Exclusivos do STICSA-C, os itens de cada escala avaliam de forma distinta e estável as manifestações cognitivas e somáticas da ansiedade. As crianças são solicitadas a fornecer suas respostas usando uma escala de 4 pontos (isto é, de "Nunca" a "Quase sempre" no formulário de Característica, e de "Nem um pouco" a Muito" no formulário de Estado). As subescalas somática e cognitiva da escala de traço STICSA-C serão utilizadas como medida de ansiedade traço, enquanto essas subescalas da escala de estado serão utilizadas como medida de ansiedade estado, na análise estatística.

7. Gravidade dos sintomas gastrointestinais

   A gravidade dos sintomas será determinada para dor, náusea e inchaço, respectivamente, em escalas de 10 pontos com 0 = nenhum e 10 = mais grave com a Escala de Resposta Global.

8. Histologia

Para aqueles que se submetem à endoscopia, as biópsias de rotina obtidas como parte dos cuidados habituais serão avaliadas de forma cega para a densidade de eosinófilos. A avaliação imuno-histoquímica dos tecidos será realizada utilizando anti-triptase e anti-CD4. Densidades celulares para eosinófilos, células triptase-positivas e células CD4-positivas, respectivamente, serão determinadas para espécimes do antro gástrico e do bulbo duodenal, respectivamente. Um mínimo de cinco campos de alta potência serão avaliados com a determinação das contagens média e máxima de células, respectivamente. Os diagnósticos patológicos serão determinados pela avaliação do patologista como parte dos cuidados de rotina.