Odpowiedź immunologiczna szyjki macicy i pochwy na 3 domięśniowe (im.) mięsień naramienny lub udo TicoVac (CRC306)

W badaniu zostanie zbadane, czy kierowanie antygenów szczepionkowych do węzłów chłonnych (biodrowych wewnętrznych), które drenują zarówno kończynę dolną, jak i szyjkę macicy/pochwę, zmienia późniejszą odpowiedź przeciwciał wykrytą w szyjce macicy/pochwie, w porównaniu z kierowaniem antygenów szczepionkowych do niepowiązanych węzłów chłonnych, takich jak te w pachach, które drenują prawy mięsień naramienny ramienia.

Prawa ręka została specjalnie dobrana, ponieważ naczynia limfatyczne w prawej górnej części ciała odprowadzane są bezpośrednio do krwioobiegu przez prawy przewód limfatyczny bez wspólnych połączeń limfatycznych z resztą ciała. W przeciwieństwie do tego limfa z reszty ciała ostatecznie spływa do przewodu piersiowego (patrz rysunek poniżej). Uodparniając prawą rękę, badacze mogą być pewni, że antygeny szczepionkowe i komórki prezentujące antygen oraz aktywowane limfocyty nie przedostaną się przez żadne wspólne węzły chłonne z szyjką macicy lub pochwą. W przeciwieństwie do tego, wstrzykując w przednio-boczną część uda (prawa strona wybrana pod kątem jednorodności), badacze mogą być pewni, że antygeny szczepionkowe przejdą przez zewnętrzne pachwinowe węzły chłonne, które również otrzymają antygeny i limfocyty reagujące na infekcję lub zapalenie pochwy lub szyjki macicy. Wybór prawej nogi ma na celu tylko ujednolicenie.

Badacze postawili więc hipotezę, że w wyniku prezentacji antygenu i stymulacji w specyficznym „środowisku dróg rodnych” limfocyty T&B opuszczające w wyniku immunizacji zewnętrzne węzły biodrowe do uda zostaną uformowane w taki sposób, że bardziej prawdopodobnie powraca do szyjki macicy i pochwy z powodu wspólnego drenażu szyjki macicy, pochwy i uda (ryc. 1) do węzłów chłonnych biodrowych zewnętrznych i aorty bocznej. W przeciwieństwie do tego, komórki opuszczające pachowe węzły chłonne po immunizacji prawego ramienia dostaną się do krwi bezpośrednio przez prawy przewód limfatyczny, a zatem nie przejdą przez żadne wspólne węzły chłonne z szyjką macicy i pochwą.

Badacze wykryją efekt ukierunkowanej immunizacji na wiele sposobów:

1. Poprzez wykrywanie zwiększonego poziomu przeciwciał specyficznych dla szczepionki w wydzielinie szyjkowo-pochwowej w wyniku większej ilości aktywowanych limfocytów B (plazmablastów) powracających do dróg rodnych. Z krwi może dojść do przesiąkania przeciwciał IgG, ale może również dojść do wytworzenia miejscowej błony śluzowej IgG. W przeciwieństwie do tego, śluzówkowa IgA jest najprawdopodobniej wytwarzana lokalnie i dlatego celowana immunizacja może na nią preferencyjnie wpływać. Jednakże, ponieważ poszczególne poziomy przeciwciał śluzówkowych różnią się znacznie między osobnikami, zwłaszcza w przypadku IgA, badacze ustalą pierwszorzędowe punkty końcowe na podstawie krotności wzrostu poziomów przeciwciał w stosunku do wartości wyjściowych, a nie stężenia. Ponieważ odpowiedzi śluzówkowe IgG są na ogół bardziej wiarygodne i mają większą skalę, badacze wyznaczyli główny cel jako swoiste dla szczepionki IgG śluzówkowe po wszystkich trzech immunizacjach. Drugim celem są swoiste dla szczepionki odpowiedzi śluzówkowe IgA po wszystkich trzech immunizacjach. Badanie zostało przeprowadzone na podstawie ograniczonego doświadczenia badaczy z podobnymi szczepionkami, aby wykryć podwojenie odsetka osób reagujących na IgG i IgA. Badacze oparli krotność wzrostu swoistych dla szczepionki IgG i IgA na błonie śluzowej na ograniczonym doświadczeniu badaczy z podobną szczepionką wstrzykiwaną w ramię(7).

   Ponadto badacze będą mierzyć zmiany w innych zmiennych, które mają charakter eksploracyjny, ponieważ testy i kwantyfikacja są mniej ugruntowane:

2. Wykrywając „śluzówkowy” wzór odpowiedzi limfocytów B we krwi ze zwiększoną liczbą swoistych dla szczepionki limfocytów B po szczepieniu ukierunkowanym na narządy płciowe.
3. Poprzez wykrywanie różnic w markerach fenotypowych powierzchni komórek na limfocytach swoistych dla szczepionki, wskazujących na pochodzenie śluzówkowe.

Będą dwie grupy zabiegowe:

• Grupa 1 otrzyma szczepionkę w prawy mięsień naramienny (ramię), który odprowadza krew do niepowiązanych węzłów chłonnych w pachach.
• Grupa 2 otrzyma szczepionkę w przednio-boczną górną część prawego uda, z której oczekuje się, że antygeny spłyną do pachwinowych węzłów chłonnych, które również drenują szyjkę macicy/pochwę.

Aby zapewnić całkowite odłączenie drenujących węzłów chłonnych, immunizowane jest zawsze PRAWE ramię lub PRAWA noga.

Przypuszcza się, że celowanie w wewnętrzne węzły biodrowe doprowadzi do zwiększonej odpowiedzi przeciwciał śluzówkowych w szyjce macicy/pochwie, co zostanie wykryte przez zwiększenie swoistej dla szczepionki IgA w wydzielinie szyjkowo-pochwowej zebranej do miękkiego kubeczka. Ponadto limfocyty (komórki B i T) z zewnętrznych biodrowych węzłów chłonnych mogą przenosić markery powierzchniowe związane z zasiedlaniem błony śluzowej i wydzielać inne kombinacje cytokin (Th17) niż te pochodzące z węzłów chłonnych pachowych, które będą wyrażać fenotyp układowy. Można to wykryć za pomocą cytometrii przepływowej, ELISPOT po oddzieleniu kulek przy użyciu markerów fenotypowych i innych testów immunologicznych.

Odczytami odpowiedzi immunologicznej będą przeciwciała IgG i IgA przeciwko antygenom TBEV w szczepionce, porównujące dwie grupy w punkcie czasowym, w którym spodziewana jest szczytowa odpowiedź (28 dni po trzeciej immunizacji).

Ponieważ badacze chcą zbadać zdolność szczepionki do swoistego primowania osobników w ukierunkowany sposób, uczestnicy muszą być naiwni w stosunku do antygenów szczepionkowych, a zatem nie mogą mieć wcześniej szczepionki ani zakażenia TBEV. Dlatego badacze użyją TicoVac – szczepionki przeciw TBEV zarejestrowanej w Wielkiej Brytanii, której dorośli w Wielkiej Brytanii na ogół nie otrzymywali, ponieważ zakażenie TBEV nie jest endemiczne w Wielkiej Brytanii. TicoVac jest szeroko stosowany w Europie Środkowej i Wschodniej, gdzie TBEV występuje endemicznie, ale niezwykle rzadko, i jest oferowany podróżnym z Wielkiej Brytanii do obszarów endemicznych, którzy mogą angażować się w aktywność wysokiego ryzyka (wędrówki, trekking).

Reakcje błony śluzowej przeciwko TBEV nie mają znaczenia, ponieważ TBEV jest przenoszona przez ukąszenia kleszczy. Odpowiedzi immunologiczne na TicoVac będą służyć jako model dla innych szczepionek, w przypadku których odpowiedź przeciwciał na błonę śluzową pochwy ma znaczenie dla zablokowania zakażenia (np. HIV, HPV, HSV) i w których celowana immunizacja może zwiększyć skuteczność.

Chociaż ściśle mówiąc, indukcja przeciwciał przeciwko TBEV w wydzielinie szyjkowo-pochwowej nie ma znaczenia dla skuteczności szczepionki TicoVac przeciwko wirusowi podanemu z krwią, badacze wyznaczyli je jako parametry skuteczności w tym modelu ukierunkowanej immunizacji.

Celem tego badania fizjologii immunologicznej człowieka jest wykorzystanie szczepionki TBEV jako modelowego neoantygenu do zbadania odczytów immunologicznych po ukierunkowaniu na antygen. Zbieranie danych dotyczących zdarzeń niepożądanych lub bezpieczeństwa nie jest zatem istotne dla celów badania i nie będzie systematycznego gromadzenia danych dotyczących bezpieczeństwa innych niż te wymagane dla CTIMP z oceną ryzyka „Typu A” (zgłaszanie SUSAR do MHRA/REC/Concerned Investigators , Roczna lista podejrzewanych poważnych działań niepożądanych jako część rocznego raportu o bezpieczeństwie/aktualizowanego raportu o bezpieczeństwie).