Predictors of CIN Study Series 5.0: Badanie stabilności w próbkach własnych pochwy (Predictors50)

Wstęp Rak szyjki macicy jest spowodowany uporczywą infekcją wirusem brodawczaka ludzkiego wysokiego ryzyka (Hr-HPV), ale można mu zapobiec, jeśli zostanie wykryty we wczesnym stadium. Profilaktyka poprzez rutynowe badania przesiewowe szyjki macicy jest tradycyjnie wykonywana za pomocą płynnych próbek cytologicznych, w których komórki zebrane przez klinicystów są badane w celu wykrycia nieprawidłowych cech. Inną metodą jest badanie HPV wykonywane na tych samych próbkach płynnych, co w przypadku cytologii. Testy HPV DNA są bardziej czułe, ale mniej specyficzne niż cytologia w badaniach przesiewowych szyjki macicy, a oba testy są powszechnie akceptowane przez kobiety (Forrest, McCaffery i in. 2004; Waller, McCaffery i in. 2006; Szarewski, Cadman i in. 2009). Chociaż próbki pobrane przez lekarza są złotym standardem, samopobieranie próbek może być użyteczną alternatywą. Wykazano, że badanie DNA HPV przy użyciu próbek pobranych samodzielnie (SC) ma akceptowalną czułość i swoistość w przypadku badania HPV w porównaniu z próbkami pobranymi przez klinicystów (Petignat, Faltin i in. 2007; Szarewski, Cadman i in. 2007; Arbyn, Verdoodt i in. al.2014). Wysoki poziom zgodności między próbką własną a próbką klinicysty w celu wykrycia DNA HPV wynoszący 0,87 (95% przedziały ufności (CI), 0,82-0,91) wykazano w przeglądzie systematycznym i metaanalizie Petignata (Petignat, Faltin i in. 2007). Testy DNA HPV są dobrze ugruntowane, ale dostępne i pojawiają się nowsze technologie testowania HPV.

Test DNA HPV był najczęściej wykonywany na próbkach szyjki macicy pobranych w płynnym podłożu (ogólnie Specimen Transport Medium (STM) lub PreservCyt). Nie jest to jednak idealne rozwiązanie w przypadku domowych próbek SC, ponieważ często istnieją ograniczenia dotyczące wysyłki próbek biologicznych w płynie, ryzyko (choć niskie) związane z samym środkiem transportu oraz kwestie związane z chłodzeniem cieczy. Usunięcie konieczności płynnego medium transportowego (a zwłaszcza późniejszego chłodzenia) znacznie poprawiłoby dostępność pobierania próbek SC i obniżyło koszty. Zwiększyłoby to również potencjał badań przesiewowych szyjki macicy w obszarach, w których mogą wystąpić trudności logistyczne, takie jak brak regularnych, częstych odbiorów pocztowych lub chłodni.

Przeprowadzono kilka badań, w których zbadano pobieranie suchych próbek w celu wykrycia DNA HPV (Shah, Daniel i in. 2001; Krech, Castriciano i in. 2009; Feng, Cherne i in. 2010; Cerigo, Coutlee i in. 2012; Darlin, Borgfeldt i wsp. 2013; Eperon, Vassilakos i wsp. 2013). Jednak różne metodologie i wymagania dotyczące chłodnictwa ograniczają możliwość uogólnienia wyników. Nie odnieśli się również do pytania, jak długo próbka na suchym urządzeniu do zbierania pozostanie żywotna, zwłaszcza w wyższych temperaturach.

Uzasadnienie i ryzyko/korzyści Dowody coraz częściej sugerują, że przynajmniej w klimacie umiarkowanym badanie DNA HPV z próbki SC przy użyciu suchej wymazówki zapewnia podobną czułość jak mokra wymazówka (gdzie próbka SC jest umieszczana w płynnym podłożu do transportu próbek) (Wolfrum, Koutsky i wsp. 2012). Transport suchy może sprawić, że testy DNA HPV z próbek SC będą bardziej dostępne i powszechnie dostępne. Na przykład w Wielkiej Brytanii opakowania pocztowe są uproszczone, gdy nie zawierają płynu. Podstawowe badania przesiewowe HPV są badane w badaniach klinicznych, a nawet wprowadzane do niektórych programów badań przesiewowych. Na przykład w Holandii w 2016 r. planowane jest wprowadzenie testów SC HPV DNA w ramach podstawowego programu badań przesiewowych dla osób nieuczestniczących (Rijksinstituut voor Volksgezondheid en Milieu 2014).

Celem tego badania stabilności jest ustalenie, czy próbki SC przechowywane w suchych warunkach będą nadal przydatne, jeśli zostaną pozostawione na pewien czas w ciepłych warunkach. Byłoby to szczególnie przydatne w wielu krajach o niskich i średnich dochodach, w których zachorowalność i śmiertelność na raka szyjki macicy są najwyższe. Kraje te często miały trudności z ustanowieniem krajowych programów badań przesiewowych szyjki macicy z powodu braku infrastruktury, dostępu do wydajnego chłodzenia i usług pocztowych.

Bart's Health National Health Service (NHS) Trust obsługuje zróżnicowaną populację z różnych środowisk społeczno-ekonomicznych i etnicznych w centrum Londynu. Klinika kolposkopii (która znajdowała się w Bart's Hospital, ale wiosną 2015 r. została przeniesiona do Royal London Hospital) przyjmuje rocznie około 1050 nowych kobiet i 1900 kobiet w celu obserwacji. Uczestnictwo w tym projekcie nie będzie miało żadnego wpływu na ciągłą opiekę żadnej kobiety, która zgodzi się na udział. We wcześniejszych badaniach i innych programach badań przesiewowych prowadzonych w Zjednoczonym Królestwie (Wielka Brytania), takich jak Chlamydia trachomatis, wykazano, że stosowanie wymazów przez same kobiety jest osiągalne i bezpieczne.

Wyniki histologii i cytologii zostaną zebrane w ciągu trzech miesięcy przed wizytą i do sześciu miesięcy po wizycie. Mogą występować różnice w wynikach w zależności od stopnia zaawansowania choroby, co zostanie potwierdzone lub wykluczone za pomocą tych informacji.

Projekt badania To badanie jest małym projektem przygotowawczym mającym na celu włączenie 60 kobiet z usługi kolposkopii i porównanie ich próbek SC pobranych z dwoma suchymi wymazówkami i urządzeniem z oznaczeniem CE HerSwabTM (Eve Medical, Toronto, Kanada). Każda kobieta pobierze wszystkie trzy próbki. Wszystkie wymazówki zostaną natychmiast schłodzone, a następnie natychmiast zamrożone w temperaturze -20ºC (SR0) w celu zakonserwowania próbki lub inkubowane w temperaturze 25ºC przez jeden (SA1) lub dwa tygodnie (SA2). Próbki HerSwab zostaną włączone do części badania dotyczącej inkubacji (HA1 i HA2). Kolejność pobierania próbek zostanie wybrana losowo w celu wyeliminowania wszelkich błędów związanych z kolejnością badania, a do każdego schematu postępowania z wymazami zostanie przydzielona mniej więcej taka sama liczba pierwszej, drugiej i trzeciej wymazówki. Badanie będzie poprzedzać wielofazowe badanie, którego ogólnym celem będzie porównanie testów SC HPV przy użyciu różnych urządzeń, w różnych warunkach i przy użyciu różnych testów HPV.

Możliwości realizacji W okresie od 1 stycznia 2013 do 31 grudnia 2013 roku na oddziale kolposkopii Barta przybyło 1052 nowych pacjentów. W tym samym okresie 1930 zgłosiło się na kontrolną kolposkopię lub leczenie. Oznaczałoby to, że w okresie 12 miesięcy 2982 kobiety zgłosiły się do kolposkopii. Istnieje zatem wystarczająca liczba kobiet, które potencjalnie mogą zostać zrekrutowane do badania. Służba nadal będzie otrzymywać te skierowania, gdy przeniesie się do Royal London Hospital.

Procedury randomizacji Randomizacje będą przeprowadzane przy użyciu wewnętrznej aplikacji komputerowej. Centrum Profilaktyki Nowotworów wygeneruje losową listę łączącą numery uczestników (PNO) z numerem paczki i kodem identyfikującym kolejność pobierania próbek. Kolejność zostanie losowo przydzielona w stosunku 1:1:1 do suchej wymazówki flokowanej (do zamrożenia po przybyciu do laboratorium) (SR0), suchej wymazówki flokowanej (do inkubacji w 25ºC przez jeden (SA1) lub dwa tygodnie (SA2) po przybyciu do laboratorium) lub HerSwab (do inkubacji w temperaturze 25ºC przez jeden (HA1) lub dwa tygodnie (HA2) po przybyciu do laboratorium) (patrz Diagram schematu badania). PNO zostaną przydzielone do ponumerowanych opakowań zawierających trzy zestawy do samodzielnego pobierania próbek, oznakowanych w celu wskazania kolejności pobierania próbek. 60 kobiet, które wyrażą zgodę na udział, otrzyma następne opakowanie w kolejności sekwencyjnej, o ile będzie to możliwe w klinice i wyrażą zgodę na badanie. Wszystkie próbki zostaną natychmiast schłodzone w klinice w temperaturze 2-8ºC do momentu przeniesienia do laboratorium.

Harmonogram interwencji dla każdej wizyty Wizyta oceniająca 1 Pobrane trzy samopróbki x

Urządzenia do badania Kobiety zostaną poproszone o samodzielne pobranie trzech próbek z pochwy przy użyciu dwóch suchych wymazówek i urządzenia z oznaczeniem CE HerSwabTM (Eve Medical, Toronto, Kanada). HerSwab wykorzystuje flokowany wacik umieszczony w plastikowym aplikatorze, aby ułatwić kobietom samodzielne pobieranie próbek.

Procedura zbierania danych Dane cytologiczne i histologiczne szyjki macicy lub pochwy zostaną zebrane na podstawie wyniku cytologii skierowania, który doprowadził do zgłoszenia się na usługę kolposkopii, do sześciu miesięcy po dacie wizyty. Wprowadzanie i zarządzanie wszystkimi danymi dotyczącymi badań będzie realizowane w Centrum Profilaktyki Nowotworów.

Wszystkie wyniki HPV, cytologii i histologii zostaną wprowadzone lub zaimportowane do bazy danych ORACLE badania przez zespół badawczy Centrum ds. Zapobiegania Rakowi (CCP). Wszystkie bazy danych są chronione i dostępne tylko dla określonych pracowników.

Formularze zgody będą bezpiecznie przechowywane w CCP.

Oceny laboratoryjne Ekstrakcja i wykrywanie ludzkiego DNA za pomocą ilościowej reakcji łańcuchowej polimerazy (qPCR) ze wszystkich próbek.

Ekstrakcja i wykrywanie DNA HPV (głównie HPV 16) za pomocą testu qPCR ze wszystkich próbek.

Zwalidowany test HPV ze wszystkich próbek dający wartości CT lub RLU.

Definicja zakończenia badania Za koniec badania uznaje się moment zebrania ostatecznych danych histologicznych i cytologicznych ostatniego zrekrutowanego uczestnika. Byłoby to około ośmiu miesięcy po dacie wizyty ostatniego rekruta. Osiem miesięcy dałoby czas na wprowadzenie danych do szpitalnej bazy danych.