Preditores da Série de Estudos CIN 5.0: Estudo de Estabilidade em Auto-amostras Vaginais (Predictors50)

Antecedentes O câncer cervical é causado por infecção persistente com tipos de papilomavírus humano de alto risco (Hr-HPV), mas pode ser prevenido se detectado em estágio inicial. A prevenção através da triagem cervical de rotina é tradicionalmente feita com amostragem de citologia em base líquida, onde as células coletadas pelos médicos são examinadas para identificar características anormais. Outro método é o teste de HPV realizado nas mesmas amostras de base líquida que para a citologia. O teste de DNA do HPV é mais sensível, mas menos específico, do que a citologia para triagem cervical e ambos os testes são amplamente aceitos pelas mulheres (Forrest, McCaffery et al. 2004; Waller, McCaffery et al. 2006; Szarewski, Cadman et al. 2009). Embora amostras coletadas por médicos sejam o padrão-ouro, a auto-amostragem pode ser uma alternativa útil. O teste de DNA do HPV usando amostras coletadas pelo próprio (SC) demonstrou ter sensibilidade e especificidade aceitáveis ​​para o teste de HPV em comparação com amostras coletadas por médicos (Petignat, Faltin et al. 2007; Szarewski, Cadman et al. 2007; Arbyn, Verdoodt et al. al. 2014). Um alto nível de concordância entre a própria amostra e a do médico para detecção de DNA de HPV de 0,87 (intervalos de confiança (IC) de 95%, 0,82-0,91) foi demonstrado na revisão sistemática e metanálise de Petignat (Petignat, Faltin et al. 2007). O teste de DNA do HPV está bem estabelecido, mas novas tecnologias de teste do HPV estão disponíveis e surgindo.

O teste de DNA do HPV tem sido mais comumente realizado em amostras cervicais coletadas em um meio líquido (geralmente meio de transporte de amostras (STM) ou PreservCyt). No entanto, isso não é ideal para amostras domésticas de SC porque muitas vezes há restrições na postagem de amostras biológicas em líquido, riscos (embora baixos) relacionados ao próprio meio de transporte e questões relacionadas à refrigeração do líquido. A eliminação da necessidade de um meio de transporte líquido (e especialmente qualquer refrigeração subsequente) melhoraria muito a acessibilidade da amostragem SC e reduziria os custos. Isso também aumentaria o potencial para triagem cervical naquelas áreas onde pode haver dificuldades logísticas, como falta de coletas postais frequentes e regulares ou instalações de armazenamento refrigerado.

Houve vários estudos que investigaram a coleta de amostras secas para detecção de DNA de HPV (Shah, Daniel et al. 2001; Krech, Castriciano et al. 2009; Feng, Cherne et al. 2010; Cerigo, Coutlee et al. 2012; Darlin, Borgfeldt et al. 2013; Eperon, Vassilakos et al. 2013). No entanto, as diferentes metodologias e requisitos para refrigeração restringiram a generalização dos resultados. Eles também não abordaram a questão de quanto tempo a amostra no dispositivo de coleta a seco permaneceria viável, especialmente sob temperaturas mais altas.

Justificativa e riscos/benefícios As evidências sugerem cada vez mais que, pelo menos em climas temperados, o teste de DNA do HPV de uma amostra SC usando um cotonete seco fornece sensibilidade semelhante a um cotonete úmido (onde a amostra SC é colocada em meio líquido de transporte de amostras) (Wolfrum, Koutsky et al. 2012). O transporte seco pode tornar o teste de DNA de HPV de amostras SC mais acessível e amplamente disponível. No Reino Unido, por exemplo, a embalagem postal é simplificada quando não há líquido envolvido. A triagem primária de HPV está sendo explorada em ensaios clínicos e até mesmo sendo introduzida em alguns programas de triagem. Na Holanda, por exemplo, o teste SC HPV DNA dentro do programa de triagem primária está planejado para introdução para não participantes em 2016 (Rijksinstituut voor Volksgezondheid en Milieu 2014).

A lógica deste estudo de estabilidade é verificar se as amostras SC mantidas em condições secas ainda serão úteis se deixadas por um período de tempo em condições quentes. Isso seria particularmente útil em muitos países de baixa e média renda, onde a incidência e a mortalidade por câncer do colo do útero são mais altas. Esses países freqüentemente encontraram muita dificuldade em estabelecer programas nacionais de triagem cervical devido à falta de infraestrutura, acesso a refrigeração eficiente e serviço postal.

O Bart's Health National Health Service (NHS) Trust atende a uma população diversificada de diversas origens socioeconômicas e étnicas no centro de Londres. A clínica de colposcopia (que estava no Bart's Hospital, mas se mudou para o Royal London Hospital na primavera de 2015) tem aproximadamente 1.050 novas mulheres atendidas e 1.900 mulheres atendidas para acompanhamento por ano. A participação neste projeto não terá implicações para o cuidado contínuo de qualquer mulher que concorde em participar. Em estudos anteriores e em outros programas de triagem baseados no Reino Unido (Reino Unido), como para Chlamydia trachomatis, o uso de zaragatoas pelas próprias mulheres demonstrou ser viável e seguro.

Os resultados de histologia e citologia de até três meses antes da visita e até seis meses após a visita serão coletados. Pode haver diferença nos resultados dependendo do grau da doença e isso será confirmado ou excluído com esta informação.

Desenho do ensaio Este estudo é um pequeno projeto preparatório com o objetivo de inscrever 60 mulheres de um serviço de colposcopia e comparar suas amostras SC coletadas com dois swabs flocados secos e o dispositivo HerSwabTM com marcação CE (Eve Medical, Toronto, Canadá). Cada mulher coletará todas as três amostras. Os swabs serão imediatamente refrigerados e então congelados imediatamente a -20ºC (SR0) para preservar a amostra ou incubados a 25ºC por uma (SA1) ou duas semanas (SA2). As amostras HerSwab serão incluídas na parte de incubação do estudo (HA1 e HA2). A ordem da amostragem será aleatória para remover qualquer viés associado à ordem do teste e números aproximadamente iguais do primeiro, segundo e terceiro esfregaços serão alocados para cada regime de gerenciamento de esfregaço. O estudo precederá e informará um estudo multifásico com o objetivo geral de comparar o teste de HPV SC usando diferentes dispositivos, sob diferentes condições e usando diferentes ensaios de teste de HPV.

Viabilidade No período de 1 de janeiro de 2013 a 31 de dezembro de 2013, 1.052 novos pacientes compareceram à unidade de colposcopia do Bart. No mesmo período, 1.930 compareceram para colposcopia ou tratamento de acompanhamento. Isso significaria que, durante um período de 12 meses, 2.982 mulheres compareceram à colposcopia. Portanto, há um número suficiente de mulheres que podem potencialmente ser recrutadas para o estudo. O serviço ainda receberá esses encaminhamentos quando for transferido para o Royal London Hospital.

Procedimentos de randomização As randomizações serão realizadas usando um aplicativo de computador interno. O Centro de Prevenção do Câncer gerará uma lista aleatória ligando os números de participantes (PNOs) com um número de embalagem e um código identificando a ordem de amostragem. A ordem será randomizada 1:1:1 para swab flocado seco (para congelamento na chegada ao laboratório) (SR0), swab flocado seco (para incubação a 25ºC por uma (SA1) ou duas semanas (SA2) na chegada ao laboratório) ou HerSwab (para incubação a 25ºC por uma (HA1) ou duas semanas (HA2) na chegada ao laboratório) (consulte o Diagrama do Esquema do Estudo). Os PNOs serão atribuídos a embalagens numeradas contendo três kits de auto-amostra, rotulados para mostrar a ordem em que as amostras devem ser coletadas. As 60 mulheres que consentirem em participar receberão o próximo pacote em ordem sequencial, tanto quanto possível, conforme comparecerem à clínica e consentirem no estudo. Todas as amostras serão imediatamente refrigeradas a 2-8ºC na clínica até a transferência para o laboratório.

Cronograma de intervenção para cada visita Avaliação Visita 1 Três auto-amostras coletadas x

Dispositivos do estudo As mulheres serão solicitadas a coletar três amostras vaginais usando dois swabs flocados secos e o dispositivo marcado com CE HerSwabTM (Eve Medical, Toronto, Canadá). O HerSwab utiliza um swab flocado contido em um aplicador de plástico, com a intenção de facilitar a auto-amostragem para as mulheres.

Procedimento para Coleta de Dados Os dados de citologia e histologia cervicais ou vaginais serão coletados a partir do resultado da citologia de encaminhamento, que motivou o comparecimento ao serviço de colposcopia, até seis meses após a data da consulta. Toda a entrada e gerenciamento de dados do estudo será realizada no Centro de Prevenção do Câncer.

Todos os resultados de HPV, citologia e histologia serão inseridos ou importados para o banco de dados ORACLE do estudo pela equipe de estudo do Centro de Prevenção do Câncer (CCP). Todos os bancos de dados são protegidos e acessíveis apenas a funcionários nomeados.

Os formulários de consentimento serão armazenados de forma segura no CCP.

Avaliações laboratoriais Extração e detecção de DNA humano por meio de um ensaio quantitativo de reação em cadeia da polimerase (qPCR) de todas as amostras.

Extração e detecção de DNA de HPV (principalmente HPV 16) por um ensaio qPCR de todas as amostras.

Teste de HPV validado de todas as amostras produzindo valores CT ou RLU.

Definição do fim do estudo O fim do estudo seria definido como quando os dados finais de histologia e citologia fossem coletados para o último participante recrutado. Isso seria aproximadamente oito meses após a data da visita do último recruta. Oito meses dariam tempo para que os dados fossem inseridos no banco de dados do hospital.