O efeito da redução do LDL sérico na resistência à aspirina

Os pacientes serão tratados com dose de ataque de aspirina de 500mg e depois 100mg/dia por mais 4 dias. Para os pacientes que serão inseridos no horário normal de trabalho, o teste de agregação plaquetária e o conteúdo de colesterol nas membranas plaquetárias serão feitos na linha de base.

Exames de sangue para lipídios, fígado (ALT,AST,GGT, fosfatase alcalina e bilirrubina) e testes de função renal (nitrogênio ureico no sangue e creatinina), hemograma completo, teste geral de urina e homocisteína sérica serão feitos no segundo dia.

No quinto dia será feito teste de agregação plaquetária óptica, teor de colesterol nas membranas plaquetárias, função plaquetária no sistema PFA-100 e p-selectina solúvel no plasma Se o paciente tiver resistência à aspirina (agregação plaquetária 20% com epinefrina ou 70% com ADP), o LDL será reduzido no plasma de 20 pacientes por drogas hipolipidêmicas (estatina sozinha ou combinada com ezetimiba). Outros 20 pacientes continuarão a ser tratados apenas com aspirina.

Um mês depois, exames de sangue para lipídios, fígado (ALT,AST,GGT, fosfatase alcalina e bilirrubina) e testes de função renal (nitrogênio ureico e creatinina no sangue), hemograma completo, teste geral de urina e homocisteína sérica serão feitos para o segundo mês o tempo e a atividade plaquetária serão testados novamente para todos os pacientes.

Separação de plaquetas:

Para estudo de plaquetas, sangue venoso (30 ml) será coletado por meio de seringas siliconizadas em solução de ácido citrato dextrose (1,4% ácido cítrico, 2,5% citrato de sódio e 2% dextrose) na proporção de 9:1 (v:v) para preparação de plaquetas lavadas (WP).WP será preparado por centrifugação a 240g por 20 min. As plaquetas serão lavadas duas vezes em 5 mmol de tampão Hepes, pH 7,4 (140 mmol de NaCl, 2 mmol de KCL, 1 mmol de MgCl2, 5 mmol de Hepes, 12 mmol de NaHCO3 e 5,5 mmol de glicose). Para a preparação da suspensão de WP, 15 uL de ácido acético (1mmol) serão adicionados a 1 ml de suspensão de plaquetas ao longo da preparação de WP, a fim de garantir as condições ácidas necessárias para a ressuspensão plaquetária. Este procedimento reduzirá o pH do meio para 6,5 ​​e não influenciará a resposta de agregação do WP.

Agregação de plaquetas:

Colágeno (Nycomed, alemanha) será utilizado como agente agregador na concentração de 4 ug/ml (essa concentração pode causar até 60% de amplitude de agregação em WP). A agregação plaquetária será realizada a 37ºC em agregômetro utilizando hepes como sistema de referência. Os resultados serão expressos como a extensão da agregação máxima (% da amplitude máxima) e também como a inclinação da curva de agregação (cm/min).

Teor de colesterol nas membranas plaquetárias:

As plaquetas serão lavadas três vezes com tampão Hepes e, em seguida, sonicadas duas vezes por 20 segundos a 80 watts. Os lipídeos plaquetários serão extraídos com hexano:isopropanolol (3:2, v:v). O teor de colesterol será medido na fase hexânica seca pelo método de Chiamori et al (12). A proteína plaquetária será determinada pelo método de Lowry (13).