El efecto de la reducción del LDL sérico en la resistencia a la aspirina

Los pacientes serán tratados con una dosis de carga de aspirina de 500 mg y luego 100 mg/día durante otros 4 días. Para los pacientes que se inscribirán en el horario laboral habitual, se realizarán pruebas de agregación plaquetaria y contenido de colesterol en las membranas plaquetarias al inicio del estudio.

El segundo día se realizarán análisis de sangre para lípidos, hígado (ALT, AST, GGT, Fosfatasa alcalina y bilirrubina) y función renal (nitrógeno ureico en sangre y creatinina), hemograma completo, examen general de orina y homocisteína sérica.

Al quinto día se realizará prueba óptica de agregación plaquetaria, contenido de colesterol en membranas plaquetarias, función plaquetaria en el sistema PFA-100 y p-selectina soluble en plasma. Si el paciente tiene resistencia a la aspirina (agregación plaquetaria 20% con epinefrina o 70% con ADP), el LDL se reducirá en el plasma de 20 pacientes con fármacos hipolipidemiantes (estatinas solas o combinadas con ezetimiba). Otros 20 pacientes seguirán siendo tratados solo con aspirina.

Un mes después se realizarán análisis de sangre para lípidos, hígado (ALT, AST, GGT, Fosfatasa alcalina y bilirrubina) y pruebas de función renal (nitrógeno ureico en sangre y creatinina), hemograma completo, examen general de orina y homocisteína sérica por segunda vez. el tiempo y la actividad plaquetaria se evaluarán nuevamente para todos los pacientes.

Separación de plaquetas:

Para los estudios de plaquetas, se recolectará sangre venosa (30 ml) a través de jeringas siliconadas en una solución de citrato dextrosa ácida (1,4 % de ácido cítrico, 2,5 % de citrato de sodio y 2 % de dextrosa) en una proporción de 9:1 (v:v) para Preparación de plaquetas lavadas (WP). La WP se preparará mediante centrifugación a 240 g durante 20 min. Las plaquetas se lavarán dos veces en tampón Hepes 5 mmol, pH 7,4 (NaCl 140 mmol, KCL 2 mmol, MgCl2 1 mmol, Hepes 5 mmol, NaHCO3 12 mmol y glucosa 5,5 mmol). Para la preparación de la suspensión de WP, se agregarán 15 uL de ácido acético (1mmol) a 1 ml de suspensión de plaquetas durante toda la preparación de WP para garantizar las condiciones ácidas que se requieren para la resuspensión de plaquetas. Este procedimiento reducirá el pH del medio a 6,5 ​​y no influye en la respuesta de agregación de la WP.

La agregación plaquetaria:

Se utilizará colágeno (Nycomed, alemania) como agente agregante a una concentración de 4 ug/ml (esta concentración puede causar hasta un 60 % de amplitud de agregación en WP). La agregación plaquetaria se realizará a 37ºC en agregómetro utilizando hepes como sistema de referencia. Los resultados se expresarán como la extensión de la agregación máxima (% de la amplitud máxima) y también como la pendiente de la curva de agregación (cm/min).

Contenido de colesterol en las membranas plaquetarias:

Las plaquetas se lavarán tres veces con tampón Hepes y luego se sonicarán dos veces durante 20 segundos a 80 vatios. Los lípidos plaquetarios se extraerán con hexano:isopropanolol (3:2, v:v). El contenido de colesterol se medirá en la fase de hexano seco por el método de Chiamori et al (12). La proteína plaquetaria se determinará utilizando el método de Lowry (13).