Wpływ obniżenia poziomu LDL w surowicy na oporność na aspirynę

Pacjenci będą leczeni nasycającą dawką aspiryny 500 mg, a następnie 100 mg/dobę przez kolejne 4 dni. W przypadku pacjentów, którzy będą przyjmowani w normalnych godzinach pracy, na początku badania zostanie wykonany test agregacji płytek krwi i zawartość cholesterolu w błonach płytek krwi.

Badania krwi lipidów, wątroby (ALT, AST, GGT, fosfataza alkaliczna i bilirubina) oraz badania czynności nerek (azot mocznikowy i kreatynina), morfologia krwi, badanie ogólne moczu i homocysteina w surowicy zostaną wykonane drugiego dnia.

Piątego dnia zostanie wykonany optyczny test agregacji płytek krwi, zawartość cholesterolu w błonach płytek krwi, czynność płytek krwi w układzie PFA-100 oraz rozpuszczalna p-selektyna w osoczu. z ADP), LDL zostanie obniżony w osoczu 20 pacjentów przez leki hipolipidemiczne (sama statyna lub w połączeniu z ezetimibem). Pozostałych 20 pacjentów będzie nadal leczonych samą aspiryną.

Miesiąc później badania krwi lipidów, wątroby (ALT, AST, GGT, fosfataza zasadowa i bilirubina) oraz badania czynności nerek (azot mocznikowy i kreatynina we krwi), morfologia krwi, ogólne badanie moczu i homocysteina w surowicy zostaną wykonane po raz drugi czas i aktywność płytek krwi zostaną ponownie zbadane u wszystkich pacjentów.

Separacja płytek krwi:

W przypadku badań płytek krew żylną (30 ml) należy pobrać za pomocą silikonowanych strzykawek do kwaśnego roztworu cytrynianu dekstrozy (1,4% kwas cytrynowy, 2,5% cytrynian sodu i 2% dekstroza) w stosunku 9:1 (obj.:obj.) preparat przemytych płytek krwi (WP). WP zostanie przygotowany przez wirowanie przy 240 g przez 20 min. Płytka przemywa się dwukrotnie 5 mmolami buforu Hepes, pH 7,4 (140 mmol NaCl, 2 mmol KCL, 1 mmol MgCl2, 5 mmol Hepes, 12 mmol NaHCO3 i 5,5 mmol glukozy). W celu przygotowania zawiesiny WP, do 1 ml zawiesiny płytek krwi dodaje się 15 µl kwasu octowego (1 mmol) przez cały czas przygotowywania WP w celu zapewnienia warunków kwaśnych wymaganych do ponownego zawieszenia płytek krwi. Ta procedura obniży pH pożywki do 6,5 i nie wpłynie na reakcję agregacji WP.

Agregacja płytek krwi:

Kolagen (Nycomed, Niemcy) będzie stosowany jako czynnik agregujący w stężeniu 4 μg/ml (to stężenie może powodować do 60% amplitudy agregacji w WP). Agregacja płytek krwi zostanie przeprowadzona w temperaturze 37°C w agregometrze z użyciem hepes jako układu odniesienia. Wyniki zostaną wyrażone jako zakres maksymalnej agregacji (% maksymalnej amplitudy) oraz jako nachylenie krzywej agregacji (cm/min).

Zawartość cholesterolu w błonach płytek krwi:

Płytki krwi przemywa się trzykrotnie buforem Hepes, a następnie dwukrotnie poddaje działaniu ultradźwięków przez 20 sekund przy mocy 80 watów. Lipidy płytkowe będą ekstrahowane heksanem:izopropanololem (3:2, v:v). Zawartość cholesterolu będzie mierzona w wysuszonej fazie heksanu metodą Chiamori i in. (12). Białko płytkowe będzie oznaczane metodą Lowry'ego (13).