A szérum LDL-csökkentésének hatása az aszpirinrezisztenciára

A betegeket 500 mg aszpirin telítő adaggal, majd további 4 napon keresztül 100 mg/nap aszpirinnel kezelik. Azon betegek esetében, akiket a szokásos munkaidőbe írnak be, a vérlemezke-aggregációs tesztet és a vérlemezkemembrán koleszterintartalmát a kiinduláskor elvégzik.

A második napon vérvizsgálatot végeznek a lipidekre, a májra (ALT, AST, GGT, alkalikus foszfatáz és bilirubin) és vesefunkcióra (vér karbamid-nitrogén és kreatinin), teljes vérkép, általános vizeletvizsgálat és szérum homocisztein.

Az ötödik napi optikai thrombocyta aggregációs teszten a vérlemezke membrán koleszterintartalmát, a PFA-100 rendszerben a vérlemezke funkciót és a plazmában oldható p-szelektint kell elvégezni. Ha a beteg aszpirinrezisztens (thrombocytaaggregáció 20% epinefrinnel vagy 70% ADP-vel), 20 beteg plazmájában csökkentik az LDL-t hipolipidémiás gyógyszerek (a sztatin önmagában vagy ezetimibbel kombinálva). További 20 beteget továbbra is kizárólag aszpirinnel kezelnek.

Egy hónappal később vérvizsgálatot végeznek a lipidekre, a májra (ALT, AST, GGT, alkalikus foszfatáz és bilirubin) és a vesefunkcióra (vér karbamid nitrogén és kreatinin), teljes vérkép, általános vizeletvizsgálat és szérum homocisztein. Az idő és a thrombocyta aktivitás ismételt vizsgálatra kerül minden betegnél.

A vérlemezkék szétválasztása:

A vérlemezkék vizsgálatához a vénás vért (30 ml) szilikonozott fecskendőn keresztül 9:1 (v:v) arányban savas citrát-dextróz oldatba (1,4% citromsav, 2,5% nátrium-citrát és 2% dextróz) gyűjtik. mosott vérlemezkék (WP) előkészítése. A WP-t 240 g-vel 20 percig végzett centrifugálással állítják elő. A vérlemezke golyócskát kétszer mossuk 5 mmol Hepes pufferben (pH 7,4) (140 mmol NaCl, 2 mmol KCL, 1 mmol MgCl2, 5 mmol Hepes, 12 mmol NaHC03 és 5,5 mmol glükóz). A WP szuszpenzió elkészítéséhez 15 ul ecetsavat (1 mmol) adunk 1 ml vérlemezke-szuszpenzióhoz a WP elkészítése során, hogy biztosítsuk a vérlemezkék reszuszpenziójához szükséges savas körülményeket. Ez az eljárás a tápközeg pH-ját 6,5-re csökkenti, és nem befolyásolja a WP aggregációs reakcióját.

Thrombocyta aggregáció:

Aggregálószerként kollagént (Nycomed, Németország) használnak 4 ug/ml koncentrációban (ez a koncentráció akár 60%-os aggregációs amplitúdót is okozhat a WP-ben). A vérlemezke-aggregációt 37 ºC-on aggregométerben hajtják végre, referenciarendszerként a hepes-t használva. Az eredményeket a maximális aggregáció mértékeként (a maximális amplitúdó %-a), valamint az aggregációs görbe meredekségeként (cm/perc) fejezzük ki.

A vérlemezke membrán koleszterin tartalma:

A vérlemezkéket háromszor mossuk Hepes pufferrel, majd kétszer 20 másodpercig ultrahanggal kezeljük 80 watton. A vérlemezke lipideket hexán:izopropanolol (3:2, v:v) eleggyel extraháljuk. A koleszterintartalmat a szárított hexán fázisban Chiamori és munkatársai (12) módszerével mérjük. A vérlemezke fehérjét Lowry módszerével határozzuk meg (13).