L'effetto dell'abbassamento delle LDL sieriche sulla resistenza all'aspirina

I pazienti saranno trattati con una dose di carico di aspirina di 500 mg e poi 100 mg/die per altri 4 giorni. Per i pazienti che verranno inseriti nel normale orario di lavoro, il test di aggregazione piastrinica e il contenuto di colesterolo nelle membrane piastriniche verranno eseguiti al basale.

Il secondo giorno verranno eseguiti esami del sangue per lipidi, fegato (ALT, AST, GGT, fosfatasi alcalina e bilirubina) e test di funzionalità renale (azotemia e creatinina), emocromo completo, test generale delle urine e omocisteina sierica.

Il quinto giorno verrà eseguito il test ottico di aggregazione piastrinica, il contenuto di colesterolo nelle membrane piastriniche, la funzione piastrinica nel sistema PFA-100 e la p-selectina solubile nel plasma Se il paziente ha resistenza all'aspirina (aggregazione piastrinica 20% con epinefrina o 70% con ADP), l'LDL sarà abbassato nel plasma di 20 pazienti mediante farmaci ipolipemizzanti (statina da sola o in combinazione con ezetimibe). Altri 20 pazienti continueranno ad essere trattati con la sola aspirina.

Un mese dopo, per il secondo verranno eseguiti esami del sangue per lipidi, fegato (ALT, AST, GGT, fosfatasi alcalina e bilirubina) e test di funzionalità renale (azotemia e creatinina), emocromo completo, esame generale delle urine e omocisteina sierica il tempo e l'attività piastrinica saranno nuovamente testati per tutti i pazienti.

Separazione piastrinica:

Per gli studi piastrinici, il sangue venoso (30 ml) sarà raccolto attraverso siringhe siliconate in una soluzione di destrosio citrato acido (1,4% acido citrico, 2,5% citrato di sodio e 2% destrosio) in un rapporto di 9:1 (v:v) per Preparazione delle piastrine lavate (WP). Le WP saranno preparate mediante centrifugazione a 240g per 20 min. Le piastrine saranno lavate due volte in tampone Hepes 5 mmol, pH 7.4 (140 mmol NaCl, 2 mmol KCL, 1 mmol MgCl2, 5 mmol Hepes, 12 mmol NaHCO3 e 5.5 mmol di glucosio). Per la preparazione della sospensione di WP, 15 uL di acido acetico (1 mmol) verranno aggiunti a 1 ml di sospensione piastrinica durante la preparazione di WP per garantire le condizioni acide necessarie per la risospensione piastrinica. Questa procedura ridurrà il pH del mezzo a 6,5 ​​e non influenzerà la risposta di aggregazione del WP.

Aggregazione piastrinica:

Il collagene (Nycomed, germania) sarà utilizzato come agente aggregante ad una concentrazione di 4 ug/ml (questa concentrazione può causare un'ampiezza di aggregazione fino al 60% in WP). L'aggregazione piastrinica sarà eseguita a 37ºC in aggregometro utilizzando hepes come sistema di riferimento. I risultati saranno espressi come estensione dell'aggregazione massima (% dell'ampiezza massima) e anche come pendenza della curva di aggregazione (cm/min).

Contenuto di colesterolo nelle membrane piastriniche:

Le piastrine saranno lavate tre volte con tampone Hepes, e poi sonicate due volte per 20 secondi a 80 watt. I lipidi piastrinici saranno estratti con esano:isopropanololo (3:2, v:v). Il contenuto di colesterolo sarà misurato nella fase esanica essiccata con il metodo di Chiamori et al (12). Le proteine ​​piastriniche saranno determinate utilizzando il metodo di Lowry (13).