Effekten av serum-LDL-sänkning på aspirinresistens

Patienterna kommer att behandlas med acetylsalicylsyra på 500 mg och sedan 100 mg/dag under övriga fyra dagar. För patienter som kommer att vara inskrivna i den ordinarie arbetstiden kommer blodplättsaggregationstest och kolesterolhalt i trombocytmembran att göras vid baslinjen.

Blodprov för lipider, lever (ALT, AST, GGT, alkaliskt fosfatas och bilirubin) och njurfunktionstest (blodureakväve och kreatinin), fullständigt blodvärde, allmänt urinprov och serumhomocystein kommer att göras den andra dagen.

På den femte dagen kommer optiskt blodplättsaggregationstest, kolesterolhalt i trombocytmembran, trombocytfunktion i PFA-100-systemet och lösligt p-selektin i plasma att göras. Om patienten har aspirinresistens (trombocytaggregation 20 % med epinefrin eller 70 % med ADP), kommer LDL att sänkas i plasma hos 20 patienter med hypolipidemiska läkemedel (enbart statin eller i kombination med ezetimib). Andra 20 patienter kommer att fortsätta att behandlas med enbart aspirin.

En månad senare kommer blodprover för lipider, lever (ALT, AST, GGT, alkaliskt fosfatas och bilirubin) och njurfunktionstest (blodureakväve och kreatinin), fullständigt blodvärde, allmänt urinprov och serumhomocystein att göras för den andra tid och blodplättsaktivitet kommer att testas igen för alla patienter.

Trombocytseparation:

För blodplättsstudier kommer venöst blod (30 ml) att samlas upp genom silikoniserade sprutor i sur citrat dextroslösning (1,4 % citronsyra, 2,5 % natriumcitrat och 2 % dextros) i ett förhållande av 9:1 (v:v) för beredning av tvättade blodplättar (WP). WP kommer att beredas genom centrifugering vid 240 g under 20 min. Blodplättarna tvättas två gånger i 5 mmol Hepes-buffert, pH 7,4 (140 mmol NaCl, 2 mmol KCL, 1 mmol MgCl2, 5 mmol Hepes, 12 mmol NaHCO3 och 5,5 mmol glukos). För beredning av WP-suspension tillsätts 15 uL ättiksyra (1 mmol) till 1 ml trombocytsuspension under hela WP-beredningen för att säkerställa sura förhållanden som krävs för återsuspension av trombocyter. Denna procedur kommer att reducera mediets pH till 6,5 och det påverkar inte WP:s aggregeringssvar.

Trombocytaggregation:

Kollagen (Nycomed, Tyskland) kommer att användas som aggregeringsmedlet vid en koncentration av 4 ug/ml (denna koncentration kan orsaka upp till 60 % aggregeringsamplitud i WP). Trombocytaggregation kommer att utföras vid 37ºC i aggregometer med hjälp av hepes som referenssystem. Resultaten kommer att uttryckas som omfattningen av maximal aggregation (% av maximal amplitud) och även som lutningen av aggregationskurvan (cm/min).

Kolesterolhalt i trombocytmembran:

Blodplättar tvättas tre gånger med Hepes-buffert och sonikeras sedan två gånger i 20 sekunder vid 80 watt. Blodplättslipider kommer att extraheras med hexan:isopropanolol (3:2, v:v). Kolesterolhalten kommer att mätas i den torkade hexanfasen med metoden enligt Chiamori et al (12). Blodplättsprotein kommer att bestämmas med metoden enligt Lowry (13).