Sensibilidade e especificidade do teste QuantiFeron-TB Gold (QFT-G) em pacientes com psoríase

Pacientes com psoríase e artrite psoriática são candidatos a receber terapias anti-TNF alfa que requerem triagem prévia para tuberculose latente (LTB). Atualmente, a triagem para LTB é baseada no teste tuberculínico (TST) , radiografia de tórax e um questionário sobre fatores predisponentes para TB. As principais desvantagens do TST são a falta de especificidade devido à reatividade cruzada com o bacilo Calmette-Guerin (BCG) e outras micobactérias não tuberculosas e o risco de anergia em pacientes imunossuprimidos. Além disso, foi sugerido que a pele de pacientes com psoríase pode ser mais sensível, resultando em aumento de TST, o que não reflete obrigatoriamente o estado de LTB.

Recentemente, foi desenvolvido um novo ensaio para ILTB que avalia a liberação de interferon (IFN) -γ por células T efetoras de memória estimuladas in vitro com antígenos micobacterianos específicos, ESAT-6 (early secretory antigen target-6) e CFP-10 ( proteína filtrada de cultura-10) [9-10]. O teste QuantiFeron -TB Gold (QFT-G) usa ELISA para medir as concentrações de IFN-γ em sobrenadantes em formato de placa e formato "In tube" (QFT-GIT), enquanto o imunospot ligado a enzima (ELISPOT) detecta IFN-γ individual produzindo Células T (TS-TB, Oxford Immunotech, Abingdon, Reino Unido).

Os ensaios de IFN-γ no sangue total foram aprovados pelos Centros de Controle de Doenças como uma estratégia de triagem alternativa ao TST em indivíduos imunocompetentes [11], mas sua utilidade clínica como teste único para detecção de ILTB em pacientes imunocomprometidos é controversa. Além disso, sua utilidade em pacientes com psoríase e artrite psoriática ainda não foi estabelecido Cem pacientes com psoríase e artrite psoriática e 50 controles saudáveis ​​participarão deste estudo.

Os indivíduos inscritos serão solicitados a preencher um questionário sociodemográfico e de triagem de TB detalhado, incluindo sexo, idade, local de nascimento e trabalho, vacinação BCG anterior, contato próximo com pacientes com TB ou profilaxia de TB no passado. A triagem incluirá a avaliação da atividade clínica da doença usando o Índice de atividade da doença 28 (DAS-28) e o Índice de gravidade da área de psoríase (PASI), documentação do tratamento passado ou atual com corticosteroides sistêmicos e drogas imunossupressoras e exames de imagem (raio-X do tórax) .

Todos os sujeitos serão submetidos a um teste TST e QFT-G. Uma dose de 2 TU de PPD será administrada por um técnico certificado usando o método de Mantoux e a induração medida após 72 h. TST será considerado positivo se for maior ou igual a 5 mm para pacientes com AR e 10 mm para controles A ausência de enduração de <2 mm de diâmetro será registrada como resultados anérgicos e negativos de TST foram definidos como tendo mais de 2, mas menos de 5 mm para pacientes com AR.

Teste QFT-G O ensaio de IFN de sangue total QuantiFeron® (QIFN) de segunda geração (Cellestis) será realizado e interpretado de acordo com as instruções do fabricante.

Resumidamente, o teste consistiu em um controle negativo (poço nulo, ou seja, sangue total sem antígenos ou mitógeno), um controle positivo (poço mitogênico, ou seja, sangue total estimulado com o mitógeno fitohemaglutinina [PHA]) e dois poços de amostra, ou seja, sangue total estimulado com um dos antígenos específicos de M. tuberculosis, Early Secretory Antigen Target 6 (ESAT-6) ou Culture Filtrate Protein 10 (CFP-10).

Cinco ml de sangue total heparinizado serão coletados para QFT-G antes do teste de PPD. As amostras de sangue serão incubadas por 16-20 h (durante a noite) a 37°C em atmosfera umidificada. Os níveis de IFN-γ no poço nulo serão considerados de fundo e serão subtraídos dos resultados do poço mitogênico e dos poços estimulados com antígeno. Os resultados serão considerados positivos se a concentração de.IFN-γ no poço da amostra após estimulação com ESAT-6 e/ou CFP-10 for maior ou igual a 0,35 UI/ml (após subtração do valor do poço nulo ), independentemente dos resultados do controle positivo (mitogen well). Os resultados serão considerados negativos se a resposta aos antígenos específicos (após subtração do valor do poço nulo) for inferior a 0,35 UI/ml e se os níveis de IFN-γ do controle positivo (após subtração do valor do poço nulo ) é maior ou igual a 0,5 UI/ml. Os resultados serão considerados indeterminados se ambos os poços de amostra estimulados com antígeno forem negativos (ou seja, <0,35 UI/ml após subtrair o valor do poço Nil) e se o valor do poço de controle positivo for inferior a 0,5 UI/ml após subtrair o valor do zero bem

o nada bem.

Teste QFT-G O ensaio de IFN de sangue total QuantiFeron® (QIFN) de segunda geração (Cellestis) foi realizado e interpretado de acordo com as instruções do fabricante.

Resumidamente, o teste consistia em um controle negativo (poço nulo, ou seja, sangue total sem antígenos ou mitógeno), um controle positivo (poço mitogênico, ou seja, sangue total estimulado com o mitógeno fitohemaglutinina [PHA]) e dois poços de amostra, ou seja, sangue total estimulado com um dos antígenos específicos de M. tuberculosis, Early Secretory Antigen Target 6 (ESAT-6) ou Culture Filtrate Protein 10 (CFP-10).

Cinco ml de sangue total heparinizado foram colhidos para QFT-G antes para teste de PPD. As amostras de sangue foram incubadas por 16-20 h (durante a noite) a 37°C em atmosfera umidificada. Os níveis de IFN-γ no poço nulo foram considerados de fundo e foram subtraídos dos resultados do poço mitogênico e dos poços estimulados com antígeno. Os resultados foram considerados positivos se a concentração de. O IFN-γ no poço da amostra após estimulação com ESAT-6 e/ou CFP-10 foi maior ou igual a 0,35 UI/ml (após subtração do valor do poço nulo), independentemente dos resultados do controle positivo (mitógeno bem). Os resultados foram considerados negativos se a resposta aos antígenos específicos (após subtração do valor do poço nulo) fosse inferior a 0,35 UI/ml e se os níveis de IFN-γ do controle positivo (após subtração do valor do poço nulo) foram maiores ou iguais a 0,5 UI/ml. Os resultados foram considerados indeterminados se ambos os poços de amostra estimulados com antígeno fossem negativos (isto é, <0,35 UI/ml após subtrair o valor do poço Nil) e se o valor do poço de controle positivo fosse inferior a 0,5 UI/ml após subtrair o valor de

o nada bem.