Czułość i swoistość testu QuantiFeron-TB Gold (QFT-G) u pacjentów z łuszczycą

Pacjenci z łuszczycą i łuszczycowym zapaleniem stawów są kandydatami do terapii anty-TNF alfa, która wymaga wcześniejszego badania przesiewowego w kierunku utajonej gruźlicy (LTB). Obecnie badania przesiewowe w kierunku LTB opierają się na skórnym teście tuberkulinowym (TST), prześwietleniach klatki piersiowej i kwestionariuszu dotyczącym czynników predysponujących do gruźlicy. Głównymi wadami TST są brak swoistości ze względu na reaktywność krzyżową z Bacille Calmette-Guerin (BCG) i innymi prątkami niegruźliczymi oraz ryzyko anergii u pacjentów z obniżoną odpornością. Ponadto zasugerowano, że skóra chorych na łuszczycę może być bardziej wrażliwa, co skutkuje zwiększonym TST, co niekoniecznie odzwierciedla stan LTB.

Niedawno opracowano nowy test LTBI, który ocenia uwalnianie interferonu (IFN)-γ przez efektorowe komórki T pamięci stymulowane in vitro specyficznymi antygenami mykobakteryjnymi, ESAT-6 (ang. białko przesączu hodowlanego-10) [9-10]. Test QuantiFeron -TB Gold (QFT-G) wykorzystuje test ELISA do pomiaru stężeń IFN-γ w supernatantach w formacie płytki i w formacie „w probówce” (QFT-GIT), podczas gdy immunospot związany z enzymem (ELISPOT) wykrywa indywidualne wytwarzanie IFN-γ Komórki T (TS-TB, Oxford Immunotech, Abingdon, Wielka Brytania).

Testy IFN-γ we krwi pełnej zostały zatwierdzone przez The Centers for Disease Control jako alternatywna strategia przesiewowa dla TST u osób z prawidłową odpornością [11], ale ich przydatność kliniczna jako pojedynczego testu do wykrywania LTBI u pacjentów z obniżoną odpornością jest kontrowersyjna. Co więcej, jego użyteczność u pacjentów z łuszczycą i łuszczycowym zapaleniem stawów nie zostało jeszcze ustalone W badaniu weźmie udział stu pacjentów z łuszczycą i łuszczycowym zapaleniem stawów oraz 50 zdrowych osób z grupy kontrolnej.

Osoby zakwalifikowane zostaną poproszone o wypełnienie szczegółowego kwestionariusza socjodemograficznego i przesiewowego w kierunku gruźlicy, uwzględniającego płeć, wiek, miejsce urodzenia i pracy, wcześniejsze szczepienia BCG, bliski kontakt z chorymi na gruźlicę czy profilaktykę gruźlicy w przeszłości. Badania przesiewowe będą obejmować ocenę klinicznej aktywności choroby przy użyciu skali aktywności choroby 28 (DAS-28) i wskaźnika ciężkości obszaru łuszczycy (PASI), dokumentację przeszłego lub obecnego leczenia ogólnoustrojowymi kortykosteroidami i lekami immunosupresyjnymi oraz obrazowanie (RTG klatki piersiowej) .

Wszyscy badani zostaną poddani testowi TST i QFT-G. Dawka 2 TU PPD zostanie podana przez certyfikowanego technika metodą Mantoux i zmierzona stwardnienie po 72 godzinach. TST zostanie uznany za dodatni, jeśli będzie równy lub równy 5 mm u pacjentów z RZS i 10 mm u pacjentów z grupy kontrolnej Brak stwardnienia o średnicy <2 mm zostanie odnotowany jako anergiczny, a ujemne wyniki TST zdefiniowano jako mające więcej niż 2, ale mniej niż 5 mm reakcje dla pacjentów z RZS.

Test QFT-G Test IFN drugiej generacji QuantiFeron® (QIFN) pełnej krwi (Cellestis) zostanie przeprowadzony i zinterpretowany zgodnie z instrukcjami producenta.

W skrócie, test składał się z kontroli negatywnej (dołek zerowy, tj. pełna krew bez antygenów lub mitogenu), kontroli pozytywnej (dołek z mitogenem, tj. pełna krew stymulowana mitogenem fitohemaglutyniną [PHA]) i dwóch dołków z próbkami, tj. pełna krew stymulowana jednym z antygenów specyficznych dla M. tuberculosis, Early Secretory Antigen Target 6 (ESAT-6) lub Culture Filtrate Protein 10 (CFP-10).

Pięć ml heparynizowanej krwi pełnej zostanie pobranych do testu QFT-G przed badaniem PPD. Próbki krwi będą inkubowane przez 16-20 godzin (przez noc) w temperaturze 37°C w wilgotnej atmosferze. Poziomy IFN-γ w studzience zerowej będą uważane za tło i będą odejmowane od wyników studzienki z mitogenem i studzienek stymulowanych antygenem. Wynik zostanie uznany za pozytywny, jeśli stężenie IFN-γ w dołku z próbką po stymulacji ESAT-6 i/lub CFP-10 będzie większe lub równe 0,35 IU/ml (po odjęciu wartości dołka zerowego) ), niezależnie od wyników kontroli pozytywnej (studzienka z mitogenem). Wyniki zostaną uznane za negatywne, jeśli odpowiedź na określone antygeny (po odjęciu wartości dołka zerowego) będzie mniejsza niż 0,35 IU/ml oraz jeśli poziomy IFN-γ kontroli pozytywnej (po odjęciu wartości dołka zerowego ) jest większe lub równe 0,5 j.m./ml. Wyniki zostaną uznane za nieokreślone, jeśli oba studzienki z próbkami stymulowanymi antygenem są ujemne (tj. <0,35 IU/ml po odjęciu wartości dołka zerowego) i jeśli wartość studzienki kontroli pozytywnej jest mniejsza niż 0,5 IU/ml po odjęciu wartość studni zerowej

zerowa studnia.

Test QFT-G Test drugiej generacji QuantiFeron® (QIFN) pełnej krwi IFN (Cellestis) przeprowadzono i zinterpretowano zgodnie z instrukcjami producenta.

W skrócie, test składał się z kontroli negatywnej (studzienka zerowa, tj. pełna krew bez antygenów lub mitogenu), kontroli pozytywnej (studzienka z mitogenem, tj. pełna krew stymulowana mitogenem fitohemaglutyniną [PHA]) i dwóch studzienek z próbkami, tj. pełna krew stymulowana jednym z antygenów specyficznych dla M. tuberculosis, Early Secretory Antigen Target 6 (ESAT-6) lub Culture Filtrate Protein 10 (CFP-10).

Przed badaniem PPD pobrano 5 ml heparynizowanej krwi pełnej do badania QFT-G. Próbki krwi inkubowano przez 16-20 h (przez noc) w temperaturze 37°C w wilgotnej atmosferze. Poziomy IFN-γ w studzience zerowej uznano za tło i odjęto od wyników studzienki z mitogenem i studzienek stymulowanych antygenem. Wyniki uznano za pozytywne, jeśli stężenie . IFN-γ w dołku próbki po stymulacji ESAT-6 i/lub CFP-10 był większy lub równy 0,35 IU/ml (po odjęciu wartości dołka zerowego), niezależnie od wyników kontroli pozytywnej (mitogen Dobrze). Wyniki uznano za negatywne, jeśli odpowiedź na określone antygeny (po odjęciu wartości dołka zerowego) była mniejsza niż 0,35 IU/ml oraz jeśli poziomy IFN-γ kontroli pozytywnej (po odjęciu wartości dołka zerowego) były większe lub równe 0,5 j.m./ml. Wyniki uznano za niejednoznaczne, jeśli oba studzienki z próbkami stymulowanymi antygenem były ujemne (tj. <0,35 IU/ml po odjęciu wartości studzienki zerowej) i jeśli wartość studzienki kontroli pozytywnej była mniejsza niż 0,5 IU/ml po odjęciu wartość

zerowa studnia.