Sensibilità e specificità di QuantiFeron -TB Gold Test (QFT-G) in pazienti con psoriasi

I pazienti con psoriasi e artrite psoriasica sono candidati a ricevere terapie anti-TNF alfa che richiedono uno screening preventivo per la tubercolosi latente (LTB). Attualmente, lo screening per LTB si basa sul test cutaneo alla tubercolina (TST), radiografie del torace e un questionario sui fattori predisponenti per la tubercolosi. I principali svantaggi del TST sono la mancanza di specificità dovuta alla reattività crociata con Bacille Calmette-Guerin (BCG) e altri micobatteri non tubercolari e il rischio di anergia nei pazienti immunosoppressi. Inoltre, è stato suggerito che la pelle dei pazienti psoriasici possa essere più sensibile con conseguente aumento del TST che non necessariamente riflette lo stato di LTB.

Recentemente è stato sviluppato un nuovo test per LTBI, che valuta il rilascio di interferone (IFN) -γ da parte di cellule T effettrici della memoria stimolate in vitro con specifici antigeni micobatterici, ESAT-6 (early secretory antigen target-6) e CFP-10 ( proteina filtrata in coltura-10) [9-10]. Il test QuantiFeron -TB Gold (QFT-G) utilizza l'ELISA per misurare le concentrazioni di IFN-γ nei surnatanti in formato piastra e in formato "In tube" (QFT-GIT), mentre l'immunospot legato all'enzima (ELISPOT) rileva la produzione individuale di IFN-γ Cellule T (TS-TB, Oxford Immunotech, Abingdon, Regno Unito).

I test IFN-γ su sangue intero sono stati approvati dai Centers for Disease Control come strategia di screening alternativa al TST in soggetti immunocompetenti [11], ma la sua utilità clinica come singolo test per il rilevamento di LTBI in pazienti immunocompromessi è controversa. Inoltre, la sua utilità nei pazienti con psoriasi e artrite psoriasica non è stato ancora stabilito Un centinaio di pazienti con psoriasi e artrite psoriasica e 50 controlli sani parteciperanno a questo studio.

Ai soggetti iscritti verrà richiesto di completare un dettagliato questionario sociodemografico e di screening della tubercolosi che includa sesso, età, luogo di nascita e lavoro, precedente vaccinazione BCG, stretto contatto con pazienti affetti da tubercolosi o profilassi della tubercolosi in passato. Il lavoro di screening includerà la valutazione dell'attività clinica della malattia utilizzando il punteggio di attività della malattia 28 (DAS-28) e l'indice di gravità dell'area della psoriasi (PASI), la documentazione del trattamento passato o attuale con corticosteroidi sistemici e farmaci immunosoppressori e l'imaging (radiografia del torace) .

Tutti i soggetti saranno sottoposti a test TST e QFT-G Una dose di 2 TU di PPD sarà somministrata da un tecnico certificato utilizzando il metodo Mantoux e l'indurimento misurato dopo 72 h. Il TST sarà considerato positivo se superiore o pari a 5 mm per i pazienti affetti da AR e 10 mm per i controlli L'assenza di indurimento <2 mm di diametro sarà registrata come anergica e i risultati negativi del TST sono stati definiti come aventi più di 2 ma meno di 5 mm reazioni per pazienti affetti da AR.

Test QFT-G Il dosaggio dell'IFN su sangue intero QuantiFeron® (QIFN) di seconda generazione (Cellestis) sarà eseguito e interpretato secondo le istruzioni del produttore.

In breve, il test consisteva in un controllo negativo (pozzetto nullo, cioè sangue intero senza antigeni o mitogeni), un controllo positivo (pozzetto mitogeno, cioè sangue intero stimolato con il mitogeno fitoemoagglutinina [PHA]) e due pozzetti campione, cioè, sangue intero stimolato con uno degli antigeni specifici di M. tuberculosis, Early Secretory Antigen Target 6 (ESAT-6) o Culture Filtrate Protein 10 (CFP-10).

Cinque ml di sangue intero eparinizzato verranno prelevati per QFT-G prima del test PPD. I campioni di sangue saranno incubati per 16-20 h (overnight) a 37°C in atmosfera umidificata. I livelli di IFN-γ nel pozzetto nil saranno considerati di fondo e saranno sottratti dai risultati del pozzetto del mitogeno e dei pozzetti stimolati dall'antigene. I risultati saranno considerati positivi se la concentrazione di IFN-γ nel pozzetto campione dopo stimolazione con ESAT-6 e/o CFP-10 sarà maggiore o uguale a 0,35 IU/ml (dopo aver sottratto il valore del pozzetto nil ), indipendentemente dai risultati del controllo positivo (pozzetto mitogeno). I risultati saranno considerati negativi se la risposta agli antigeni specifici (dopo aver sottratto il valore del pozzetto nil) è inferiore a 0,35 IU/ml e se i livelli di IFN-γ del controllo positivo (dopo aver sottratto il valore del pozzetto nil ) è maggiore o uguale a 0,5 UI/ml. I risultati saranno considerati indeterminati se entrambi i pozzetti del campione stimolato dall'antigene sono negativi (cioè, <0,35 IU/ml dopo aver sottratto il valore del pozzetto Nil) e se il valore del pozzetto del controllo positivo è inferiore a 0,5 IU/ml dopo la sottrazione il valore del pozzo zero

il nulla bene.

Test QFT-G Il dosaggio dell'IFN su sangue intero QuantiFeron® (QIFN) di seconda generazione (Cellestis) è stato eseguito e interpretato secondo le istruzioni del produttore.

In breve, il test consisteva in un controllo negativo (pozzetto nullo, cioè sangue intero senza antigeni o mitogeni), un controllo positivo (pozzetto mitogeno, cioè sangue intero stimolato con il mitogeno fitoemoagglutinina [PHA]) e due pozzetti campione, cioè, sangue intero stimolato con uno degli antigeni specifici di M. tuberculosis, Early Secretory Antigen Target 6 (ESAT-6) o Culture Filtrate Protein 10 (CFP-10).

Cinque ml di sangue intero eparinizzato sono stati prelevati per QFT-G prima del test PPD. I campioni di sangue sono stati incubati per 16-20 ore (durante la notte) a 37°C in atmosfera umidificata. I livelli di IFN-γ nel pozzetto nullo sono stati considerati di fondo e sono stati sottratti dai risultati del pozzetto del mitogeno e dei pozzetti stimolati dall'antigene. I risultati sono stati considerati positivi se la concentrazione di. L'IFN-γ nel pozzetto del campione dopo la stimolazione con ESAT-6 e/o CFP-10 era maggiore o uguale a 0,35 UI/ml (dopo aver sottratto il valore del pozzetto zero), indipendentemente dai risultati del controllo positivo (mitogeno BENE). I risultati sono stati considerati negativi se la risposta agli antigeni specifici (dopo aver sottratto il valore del pozzetto nil) era inferiore a 0,35 IU/ml e se i livelli di IFN-γ del controllo positivo (dopo aver sottratto il valore del pozzetto nil) erano maggiori o uguali a 0,5 UI/ml. I risultati sono stati considerati indeterminati se entrambi i pozzetti del campione stimolato dall'antigene erano negativi (cioè, <0,35 IU/ml dopo aver sottratto il valore del pozzetto Nil) e se il valore del pozzetto del controllo positivo era inferiore a 0,5 IU/ml dopo aver sottratto il valore di

il nulla bene.