Fluido Pulmonar e Receptor de Superfície de Neutrófilos IL-5 do Sangue Periférico em Crianças com Asma (NAIL-5)
O padrão de inflamação das vias aéreas inferiores na asma é heterogêneo, mas em muitos pacientes, o neutrófilo polimorfonuclear (PMN) é o granulócito predominante infiltrando os espaços aéreos. Embora seja conhecido por ter importante função na defesa imune inata, o papel do PMN na asma não está bem elucidado. Em um trabalho em andamento, os pesquisadores identificaram o receptor para IL-5 na superfície dos PMNs da lavagem broncoalveolar (BAL) em um subconjunto de crianças com asma grave resistente ao tratamento, uma característica que não é encontrada nos neutrófilos do sangue periférico. Embora a função desse receptor de IL-5 ainda não tenha sido determinada, evidências preliminares apóiam fortemente um mecanismo que liga a inflamação neutrofílica com tipo 2 nas vias aéreas inferiores de crianças com asma, uma descoberta que tem potencial para modificar o tratamento da asma.
O objetivo principal deste estudo transversal observacional é testar a hipótese geral de que a intervenção terapêutica direcionada contra o IL-5R nos PMNs pulmonares diminuirá a inflamação e melhorará os resultados clínicos em pacientes com asma mal controlada. O objetivo do estudo secundário é demonstrar que a expressão de IL-5R em PMNs infiltrantes pulmonares é funcional, ativará vias de sinalização induzidas por IL-5R conhecidas e levará a uma atividade pró-inflamatória aumentada de PMN, incluindo aumento do recrutamento de PMN, sobrevivência prolongada, degranulação e liberação de espécies reativas de oxigênio.
Visão geral do estudo
Tipo de estudo
Inscrição (Real)
Contactos e Locais
Locais de estudo
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Virginia
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Charlottesville, Virginia, Estados Unidos, 22908
- University of Virginia Health System
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Método de amostragem
População do estudo
Descrição
Critério de inclusão:
- Idade 0-17
- Sintomas respiratórios refratários e resistentes ao tratamento
- Agendado para uma broncoscopia diagnóstica clínica
Critério de exclusão:
- Infecção conhecida do trato respiratório inferior dentro de 60 dias após a broncoscopia programada
- Distúrbios sistêmicos envolvendo os sistemas cardíaco, respiratório, SNC, renal e endócrino
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
Coortes e Intervenções
Grupo / Coorte |
Intervenção / Tratamento |
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Asmáticos
0-5 anos de idade: Tosse intermitente, pieira, sintomas torácicos E um ou mais dos seguintes: Eczema Eosinofilia IgE total elevado História familiar positiva 6-17 anos de idade: Diagnóstico médico Tratamento atual com um ou mais medicamentos para asma Episódios recorrentes de tosse, chiado, desconforto torácico, dor |
Uma broncoscopia diagnóstica será realizada para indicações clínicas em crianças encaminhadas ao Hospital Infantil da Universidade da Virgínia para avaliação de sintomas respiratórios
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Controles não asmáticos semelhantes à idade
Controles com idades semelhantes serão submetidos a broncoscopia diagnóstica para indicações clínicas na ausência de asma conhecida, incluindo pneumonia recorrente, anomalias pulmonares congênitas, tosse prolongada, suspeita de anormalidades laríngeas e suspeita de síndromes de aspiração.
Inclusão no conjunto final a ser determinado após o procedimento com base nos perfis de granulócitos do LBA.
Para serem incluídos como controle, os participantes devem ter contagens pauci-granulares de LBA (menos de 2% de eosinófilos e menos de 4% de PMN), nenhuma sensibilização positiva a alérgenos e nenhum estudo viral ou bacteriano positivo da análise do fluido BAL.
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Uma broncoscopia diagnóstica será realizada para indicações clínicas em crianças encaminhadas ao Hospital Infantil da Universidade da Virgínia para avaliação de sintomas respiratórios
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Porcentagem de neutrófilos com marcadores de superfície para o receptor de IL-5
Prazo: 6+ meses após a broncoscopia
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A porcentagem de neutrófilos portadores de marcadores de superfície para o IL5-R no líquido pulmonar e no sangue periférico será comparada em crianças com diferentes fenótipos de asma
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6+ meses após a broncoscopia
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Análise in vitro da função do receptor de IL-5 (IL-5 R): sinalização via IL-5 R exibida em neutrófilos do BAL (e, se necessário, sangue periférico) após a ligação do ligante (IL-5)
Prazo: 48-72 horas após a broncoscopia
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Esta medida avaliará a fosforilação de STAT 5 e simultaneamente a fosforilação de AKT (como um substituto para a ativação de PI 3 quinase) após o tratamento de neutrófilos com IL-5 (ou seja,
engajamento IL-5 R).
A ligação do receptor GM-CSF aos neutrófilos pelo seu ligando servirá como um controlo para a capacidade dos neutrófilos sofrerem transdução de sinal em resposta aos ligandos.
O controle adicional será a ativação (fosforilação) de STAT 5 em eosinófilos que respondem a IL-5 (ou seja, envolvimento de IL-5 R).
Esta análise será realizada por citometria de fluxo para avaliar a fosforilação dos intermediários de sinalização indicados.
Esta análise estabelecerá se o IL-5 R nos neutrófilos BAL é funcional (ou seja,
capaz de transduzir um sinal após a ligação do ligante).
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48-72 horas após a broncoscopia
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Medição da degranulação de neutrófilos e produção de mediadores inflamatórios após a ligação de IL-5 ao seu receptor em neutrófilos isolados do LBA
Prazo: 48-72 horas após a broncoscopia
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A ativação de neutrófilos avaliará a produção de citocinas específicas (por exemplo,
TNFa) e quimiocinas (por exemplo
CXCL 10), bem como a liberação do conteúdo do grânulo (por exemplo,
lisozima e proteases) após o envolvimento de IL-5 R.
Essas funções serão avaliadas por ELISA.
A análise deste parâmetro elucidará se a sinalização através do IL-5 R resulta na ativação clássica de neutrófilos IL-5 R positivos, cujo resultado é o aumento da lesão e inflamação.
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48-72 horas após a broncoscopia
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Produção de espécies reativas de oxigênio após o engajamento de IL-5 R
Prazo: 48-72 horas após a broncoscopia
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Espécies reativas de oxigênio avaliarão a geração de ROS por neutrófilos após o envolvimento de IL-5 R em neutrófilos BAL (e, se apropriado, neutrófilos isolados do sangue periférico).
Esta análise será realizada por meio de análise colorimétrica de mudança de cor em neutrófilos expostos ao corante sensível a ROS.
Esta análise determinará se a exposição à IL-5 resulta na produção de ROS pelos neutrófilos e, como consequência, o potencial para aumento do dano tecidual nos pulmões.
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48-72 horas após a broncoscopia
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Medição da sobrevivência de neutrófilos em cultura após envolvimento de IL-5 R in vitro
Prazo: 48-72 horas após a broncoscopia
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A sobrevivência de neutrófilos analisará a sobrevivência em cultura de neutrófilos isolados do LBA após exposição à IL-5 in vitro.
A apoptose dos neutrófilos ao longo do tempo em cultura será avaliada por citometria de fluxo.
Esta análise determinará se a exposição dos neutrófilos pulmonares à IL-5 aumentará sua sobrevivência e, portanto, o potencial dos neutrófilos ativados em resposta à IL-5 para promover inflamação e lesão aumentadas.
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48-72 horas após a broncoscopia
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: William G Teague, MD, University of Virginia
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo
Conclusão Primária (Real)
Conclusão do estudo (Real)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Estimativa)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- NAIL-5
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