Genotipagem de aloantígenos plaquetários humanos: diagnóstico pré-natal não invasivo

A isoimunização materno-fetal da trombocitopenia neonatal está relacionada à imunização materna contra antígenos plaquetários fetais de origem paterna não presentes na mãe. É considerada o equivalente à doença hemolítica do recém-nascido. A incidência desta doença é de cerca de 1 em 800-1000 nascimentos. As formas mais graves associadas a petéquias, púrpura ou cefalematoma ao nascimento com grande risco de hemorragias cerebrais (20% a 25% dos casos) podem causar a morte da criança (15%) ou graves problemas neurológicos (15-30%). o diagnóstico requer a detecção de anticorpos antiplaquetários com determinação materna dos fenótipos plaquetários e dos genótipos dos dois pais. Quando diagnosticado, é necessário o aconselhamento genético do casal para uma futura gravidez, pois o risco de recorrência é importante e a gravidade aumenta com o número de gestações. O risco depende da natureza dos antígenos paternos, homozigotos ou heterozigotos. Em caso de heterozigose, o diagnóstico pré-natal é baseado na genotipagem de plaquetas fetais por procedimento invasivo (amniocentese ou biópsia de vilosidades coriônicas) associado a risco de perda fetal. Os aloanticorpos responsáveis ​​pelos danos fetais são dirigidos contra os aloantígenos plaquetários: trata-se do sistema HPA (human platelet aloantígeno). Foram descritos 24 aloantígenos e 12 deles apresentam polimorfismo bialélico (a: o alelo mais frequente e b o alelo raro) divididos em 6 grupos (HPA-1, 2, 3, 4, 5 e 15). As correlações genótipo-fenótipo foram realizadas para 22 dos 24 aloantígenos e mostram que o polimorfismo antigênico resulta da presença de um SNP (single nucleotide polymorphism-).

Em 1997, Lo et al mostraram a presença de 3-6% de DNA fetal no sangue materno. Esta descoberta levou ao desenvolvimento de métodos de diagnóstico pré-natal não invasivos: 1/ determinação do Rhesus fetal 2/ sexo fetal por PCR quantitativo em tempo real.

O objetivo deste trabalho é desenvolver ferramentas moleculares específicas para a genotipagem de plaquetas fetais a partir do sangue materno. Estamos particularmente interessados ​​nos antígenos HPA-1, HPA-5, HPA-3 e HPA-4. Avaliamos a sensibilidade e a especificidade desse teste comparando esses resultados com os obtidos a partir de uma amostragem invasiva de líquido amniótico.

Este é um estudo prospectivo para avaliar o desempenho técnico e diagnóstico de um novo método molecular de diagnóstico pré-natal não invasivo de genotipagem de plaquetas.