Genotipizzazione degli alloantigeni piastrinici umani: diagnosi prenatale non invasiva

L'isoimmunizzazione materno-fetale della trombocitopenia neonatale è correlata all'immunizzazione materna contro antigeni piastrinici fetali di origine paterna non presenti nella madre. È considerato l'equivalente della malattia emolitica del neonato. L'incidenza di questa malattia è di circa 1 su 800-1000 nati. Le forme più gravi associate a petecchie, porpora o cefaloematoma alla nascita con maggior rischio di emorragie cerebrali (dal 20% al 25% dei casi) possono causare la morte del bambino (15%) o gravi disturbi neurologici (15-30%) la diagnosi richiede la rilevazione degli anticorpi antipiastrinici con determinazione materna dei fenotipi piastrinici e dei genotipi dei due genitori. Quando viene diagnosticata, è necessaria la consulenza genetica alla coppia per una futura gravidanza perché il rischio di recidiva è importante e la gravità aumenta con il numero delle gravidanze. Il rischio dipende dalla natura degli antigeni paterni, omozigoti o eterozigoti. In caso di eterozigosi, la diagnosi prenatale si basa sulla genotipizzazione delle piastrine fetali mediante una procedura invasiva (amniocentesi o prelievo dei villi coriali) associata a un rischio di perdita del feto. Gli alloanticorpi responsabili del danno fetale sono diretti contro gli alloantigeni piastrinici: questo è il sistema HPA (alloantigene piastrinico umano). Sono stati descritti 24 alloantigeni e 12 di essi hanno un polimorfismo biallelico (a: l'allele più frequente eb l'allele raro) divisi in 6 gruppi (HPA-1, 2, 3, 4, 5 e 15). Le correlazioni genotipo-fenotipo sono state eseguite per 22 dei 24 alloantigeni e mostrano che il polimorfismo antigenico deriva dalla presenza di un SNP (single nucleotide polymorphism-).

Nel 1997, Lo et al hanno mostrato la presenza del 3-6% di DNA fetale nel sangue materno. Questa scoperta ha portato allo sviluppo di metodi di diagnosi prenatale non invasiva: 1/ determinazione del Rhesus fetale 2/ sesso fetale mediante PCR quantitativa in tempo reale.

L'obiettivo di questo lavoro è sviluppare strumenti molecolari specifici per la genotipizzazione delle piastrine fetali dal sangue materno. Siamo particolarmente interessati agli antigeni HPA-1, HPA-5, HPA-3 e HPA-4. Valutiamo la sensibilità e la specificità di questo test confrontando questi risultati con quelli ottenuti da un prelievo invasivo di liquido amniotico.

Questo è uno studio prospettico per valutare le prestazioni tecniche e diagnostiche di un nuovo metodo molecolare per la diagnosi prenatale non invasiva della genotipizzazione piastrinica.