Eficácia da azitromicina como adjuvante ao tratamento periodontal não cirúrgico

Definição da amostra: Pacientes maiores de 18 anos internados na Unidade de Diagnóstico da Faculdade de Odontologia (DUFD), campus Viña del Mar da Universidade Nacional Andrés Bello (UNAB) durante o ano de 2016, com diagnóstico de periodontite grave, atendendo tanto critérios de inclusão e exclusão e concordar voluntariamente em participar do presente trabalho de pesquisa, assinando o termo de consentimento livre e esclarecido. Os participantes escolhidos foram informados sobre a natureza da pesquisa, riscos potenciais e remuneração pela participação no estudo, obtendo-se o consentimento informado de todos os pacientes.

Cálculo do Tamanho da Amostra: Para calcular o tamanho amostral mínimo necessário para a constituição dos grupos controle e intervenção, as variâncias da diferença de profundidade de sondagem foram consideradas como valores fixos, que foram baseados nos resultados descritos acima. Considerando o acima e usando um nível de significância de 5%, um poder estatístico de 80% e um erro de estimativa de 1 mm, pelo menos 7 pacientes foram obtidos para cada grupo, dando um total de 14 sujeitos mínimos para estudo.

Protocolo e exame clínico: De um total de 32 pacientes selecionados, 20 dos que atenderam aos critérios de inclusão foram alocados aleatoriamente pelo coordenador do estudo a um dos dois grupos por meio de uma sequência de geração aleatória por meio de um software. Dois sujeitos se recusaram a participar da pesquisa, portanto o estudo contou com 9 participantes em cada grupo. Dessa forma, dois grupos foram formados para investigar: um grupo de intervenção que recebeu NSPT mais 500 mg de azitromicina uma vez ao dia durante três dias imediatamente após o NSPT e um grupo controle que recebeu NSPT mais placebo nas mesmas condições do grupo de intervenção .

Randomização: Apenas o investigador principal, que fez a randomização utilizando o programa Epidat 4.0, tinha conhecimento sobre o conteúdo dos recipientes e o grupo a que cada paciente pertencia no estudo, portanto, foi responsável pela rotulagem dos recipientes, conseguindo em desta forma que os colaboradores e participantes da investigação não conheceram seu conteúdo até o final do estudo.

Padronização e calibração: Os dados foram coletados com instrumentos e insumos das mesmas marcas comerciais, em uma única cadeira, sob a mesma iluminação e por um único examinador no caso de dados clínicos e outro examinador para variáveis ​​microbiológicas.

Para padronização, as medidas foram realizadas nas mesmas condições e usando o mesmo tipo de instrumento, a fim de reduzir o viés associado. Os instrumentos utilizados para coleta de dados foram todos iguais em design e marca: Basic Examination Kit: espelho, sonda de cárie, pinça (Hu-Friedy® Manufacturing Inc., Chicago, IL, EUA), sonda periodontal manual (North Carolina Probe. Hu-Friedy® Manufacturing Inc., Chicago, IL, EUA), comprimidos localizadores de placa (Curaprox © CURADEN AG, Suíça) e cones de papel estéril número 40 (Johnson & Johnson, Tóquio, Japão). Como havia apenas um examinador (KL ) envolvidos no estudo, foi realizada a avaliação da confiabilidade intraexaminador. Este examinador (coeficiente de correlação intraclasse de 0,96 e 0,95 para PPD e CAL), registrou todas as variáveis ​​estipuladas, em ficha clínica especialmente elaborada para o estudo. A coleta microbiológica e o NSPT foram realizados por um único clínico (PO). O processo completo de PCR foi realizado por um bioquímico pertencente ao laboratório de microbiologia campus Santiago da UNAB.

Periodontopatógenos: A presença de periodontopatógenos foi considerada ao expor o gel de agarose da eletroforese à luz ultravioleta, uma banda no local dos 197 pares de bases (pb) foi observada na faixa que possui amostra da bioflora subgengival do paciente de Pg, 316 pares de bases para Td, 745 para Tf e 167 para Fn.

Coleta de dados e instrumento: Antes da coleta de dados, foi solicitada a todos os sujeitos do estudo uma radiografia panorâmica para fins de diagnóstico. Posteriormente, foi realizado o exame periodontal registrando as variáveis ​​clínicas descritas acima em uma ficha clínica.

Obtenção de amostras microbiológicas: O exame microbiológico foi realizado antes do NSPT em ambos os grupos. A coleta de amostras microbiológicas foi baseada em um protocolo que é usado na Universidade do Chile. Usando cones de papel estéreis número 40, uma amostra da bioflora subgengival foi retirada do local com maior CAL, dentro daqueles com PD ≥ 5mm, e uma instrução de higiene oral foi realizada. Antes da coleta da bioflora subgengival, a área foi limpa com gaze estéril para eliminar o biofilme supragengival. Em seguida, com uma pinça, foi retirado um cone de papel, e sua ponta foi colocada no sulco do local de estudo por 20 segundos, para garantir a absorção do fluido crevicular e da bioflora subgengival. Cada amostra biológica obtida foi suspensa em um tubo Eppendorf com 1 ml de água destilada e transportada em geladeira a uma temperatura de aproximadamente 4°C, em um tempo não superior a 3 horas, para então ser armazenada temporariamente a -80°C, até sua transferência e posterior extração do ácido desoxirribonucléico (DNA) e processamento da técnica de PCR. O tempo entre a coleta e a extração do DNA não ultrapassou 48 horas, para evitar a deterioração do material biológico.

Tratamento Periodontal: Uma vez concluída a coleta preliminar de todas as variáveis, foi realizado o tratamento periodontal não cirúrgico (NSPT), começando com a descontaminação supra e subgengival de toda a boca, usando um piezo elétrico (DTE®, Guilin Woodpecker Medical Instrument Co. , Ltd., Guilin, Guangxi , República Popular da China), seguido de alisamento radicular em locais com DP ≥ 5mm e CAL≥ 4mm, utilizando curetas Gracey (Hu-Friedy® Manufacturing Inc., Chicago, Illinois (IL), EUA) . Esta terapia foi realizada em todos os pacientes, tanto no grupo intervenção quanto no grupo controle, sob protocolo de tratamento de boca cheia, em 1 ou 2 sessões de trabalho, com duração de 1 a 2 horas, alcançando o tratamento em 24 horas.

Administração de azitromicina ou placebo: No final da última sessão de tratamento, foi administrado o antibiótico azitromicina (Azitromicina, Laboratory Chile) ou um placebo (Lactose, Galenic Pharmacy), dependendo do grupo, intervenção ou controle, respectivamente, ao qual o paciente pertencia . Para ambas as terapias, o esquema de administração foi de 1 comprimido de 500 mg VO por dia, por 3 dias consecutivos. Para manter o duplo-cego, os recipientes utilizados para azitromicina e placebo apresentaram as mesmas características quanto ao tamanho e cor. Sobre os comprimidos de azitromicina e placebo, estes eram visualmente idênticos.

Posteriormente, no primeiro, terceiro e sexto mês após o término do tratamento não cirúrgico, foi realizada nova coleta de todas as variáveis ​​clínicas mensuradas no início do estudo, enquanto as variáveis ​​microbiológicas foram mensuradas novamente no terceiro e sexto meses após o tratamento, no mesmo local utilizado na primeira amostragem.

Análise Estatística: A análise dos dados foi realizada de acordo com os objetivos específicos da pesquisa, utilizando o programa de computador Statistical Package for the Social Sciences (SPSS). Foi realizada uma análise descritiva em que as variáveis ​​qualitativas foram estudadas por frequência, enquanto as quantitativas foram analisadas por meio da média. Os resultados obtidos em ambos os casos foram expressos em tabelas de frequência. Para cada variável, o teste de normalidade dos dados foi realizado de acordo com o teste de Shapiro-Wilk. Em seguida, foi realizada análise inferencial para as variáveis ​​quantitativas. O nível de significância estatística foi estabelecido de acordo com o teste t de Student e qui-quadrado, enquanto para as variáveis ​​qualitativas foi realizado o teste não paramétrico de McNemar. Foram considerados p-valores significativos <0,05, visando apresentar um nível de confiança de 95%.

Implicações éticas, biossegurança e outras Cada paciente foi informado detalhadamente sobre tudo o que envolve a realização do trabalho de pesquisa, de acordo com o nível de compreensão de cada sujeito e recebeu um consentimento informado, no qual o objetivo do estudo é especificado por escrito junto com os procedimentos a serem realizados tanto para o grupo controle quanto para o grupo intervenção, além dos custos e benefícios da participação. O projeto, juntamente com o protocolo do presente estudo, foi baseado na Declaração de Helsinque e foi aprovado pelo Comitê de Ética Científica da Faculdade de Odontologia, campus Viña del Mar da UNAB. Por outro lado, para o desenvolvimento correto da investigação, foram realizados exames clínicos pertinentes seguindo as normas de biossegurança vigentes naquele estabelecimento. A amostra retirada da bioflora subgengival do paciente consiste em uma técnica totalmente inócua, rápida e simples, que foi obtida apenas de um sítio periodontal. Concluída a investigação, todo o material extraído foi destruído, conseguindo-se sua eliminação mediante as normas internacionais de manejo de amostras biológicas. Todos os participantes receberam gratuitamente os elementos necessários para uma correta higiene oral, ensinando-lhes a forma correta de higienizar a boca. Além disso, foram informados sobre o diagnóstico, plano de tratamento e resultados obtidos. Em relação aos pacientes examinados que não atenderam aos critérios de inclusão e/ou exclusão do estudo, os mesmos foram encaminhados para a disciplina de Periodontia Clínica do quarto ano, como auxiliar docente ou Pós-Graduação em Periodontia da UNAB, conforme o caso, a fim de ser tratado periodontalmente. Em relação ao uso de antibióticos sistêmicos como tratamento adjuvante, este tem se mostrado clinicamente mais eficaz do que o tratamento periodontal associado ao placebo. A azitromicina, por outro lado, tem um espectro de ação que envolve bactérias Gram negativas aeróbias e anaeróbias, entre as quais os periodontopatogênicos, possui excelente absorção gastrointestinal, meia-vida longa e efeitos adversos limitados. Pelas suas propriedades, poderia se tornar uma alternativa viável em periodontia ao atual regime antibiótico adjuvante de amoxicilina com metronidazol. Quanto ao uso do placebo (lactose), caracteriza-se por ser do tipo puro ou inativo, ou seja, o que corresponde a uma substância inerte que não tem ação farmacológica no paciente, razão pela qual costuma ser o tipo de placebo de escolha em estudos de ensaios clínicos. A lactose é um dissacarídeo resultante da ligação da glicose e da galactose, e esses placebos correspondem a cápsulas com pó cristalino, branco, inodoro e de sabor levemente adocicado, cujos efeitos colaterais ao seu uso ocorrem com pouca frequência, principalmente em pacientes que ingeriram quantidades de lactose e/ou têm intolerância a ela, gerando sintomas como dor abdominal, flatulência, diarreia, distensão abdominal, náuseas e vômitos. alertaram sobre os possíveis efeitos, indicando que diante de qualquer desconforto atribuível ao consumo dos comprimidos iriam aos pesquisadores para interromper a administração destes e serem eliminados do estudo.