Triagem de genes de suscetibilidade para lesão hepática induzida por medicamentos induzidos pela APAP na população chinesa: um estudo de controle de caso (PAIN)

I. Objeto de estudo

(i) Na estratégia do grupo: contínuo em grupo.

(ii) Estratégia de agrupamento:

1. Grupo de casos.

   Critérios de inclusão:

   • Uma clara história da ingestão de acetaminofeno (ou medicamentos contendo acetaminofeno).
   • O teste de plasma e/ou urina para componentes do acetaminofeno se a história da ingestão não estiver clara.
   • Monitoramento da alanina aminotransferase (ALT) ou aspartato aminotransferase (AST) ≥ 1000 UI/L a qualquer momento após a administração da APAP e a pontuação do método de avaliação de causalidade (RUCAM)> 6
   • Idade ≥ 14 anos.
   • O sujeito ou Guardian concorda em participar deste projeto e assina um formulário de consentimento informado.

   Critérios de exclusão: • O uso de medicamentos para os quais a frequência de reações adversas a danos no fígado é definida como "comum ou muito comum" (≥1%) nas instruções.

   • Uso simultâneo de ervas que são claramente suscetíveis a danos no fígado (consulte a lista de definições no anexo).
   • Ter uma causa definida conhecida de danos no fígado: hepatite viral ativa; doença hepática alcoólica; doença hepática auto -imune; Tumores hepáticos primários ou secundários; e outra doença hepática subjacente que afetou a função hepática.
   • Aqueles que não fornecem informações gerais completas e informações clínicas.
   • Assuntos ou Guardiões que não concordam em ver este projeto não assinam o formulário de consentimento informado.

2. Grupo de controle

   Critérios de inclusão:

   • Uma clara história da ingestão de acetaminofeno (ou medicamentos contendo acetaminofeno).
   • O teste de plasma e/ou urina para componentes do acetaminofeno se a história da ingestão de APAP não estiver clara.
   • Idade: ≥ 14 anos.
   • O sujeito ou Guardian concorda em participar deste projeto e assina um formulário de consentimento informado.

   Critérios de exclusão: • O uso de medicamentos para os quais a frequência de reações adversas a danos no fígado é definida como "comum ou muito comum" (≥1%) nas instruções.

   • Uso simultâneo de ervas que são claramente suscetíveis a danos no fígado (consulte a lista de definições no anexo).

   • Existem causas definidas conhecidas de danos no fígado (ver lista anexada de definições): hepatite viral ativa; doença hepática alcoólica; doença hepática auto -imune; Tumores hepáticos primários ou secundários; e outra doença hepática subjacente que afetou a função hepática.

   • Aqueles que não fornecem informações gerais completas e informações clínicas.

   • Assuntos ou guardiões que não concordam em ver este projeto não assinam o formulário de consentimento informado.

   (iii) Estratégia de correspondência.

   Princípio correspondente:

   • Os participantes do caso e do controle foram comparados de acordo com a dose ingerida, duração da administração de antídotos e duração da lavagem gástrica.

   • 1: 2 correspondência.

   Fatores de confusão:

   • Ingestão de dose: Relatório do paciente (primário) + teste de concentração sanguínea (secundária)

   • Tempo de uso do antídoto: <4 horas, 4-24 horas,> 24 horas

   • Tempo de lavagem gástrica: <1 hora, ≥1 hora

   (iv) Estimativa do tamanho da amostra

   Fonte do parâmetro:

   • Concentre -se em enzimas metabolizadoras de drogas, loci imunogênico
   • A distribuição das frequências alélicas de suscetibilidade de Dili dependentes de APAP em populações asiáticas baseadas em achados da literatura.

2. Valor do parâmetro:

• Hipótese: gene-ambiente.
• Modelo de resultado: risco de linha de base P0 = 0,10.
• Efeito genético = 1,2,
• Potência = 0,8, taxa de erro do tipo I = 0,05 (bilateral).

Resultados ： O tamanho da amostra do caso deve ser 113 com um tamanho de amostra de controle de 226.

Ii. Fatores de exposição/risco.

(i) Definição. Os fatores de exposição se referem a genes de suscetibilidade para DILI causados ​​pelo APAP, incluindo:

• 2.036.060 sites de marcadores
• Antígeno de leucócitos humanos (HLA): Loci imune HLA-A e HLA-B.
• Imputação genótipo.

(ii) Métodos de medição.

1. Adote a estratégia de genes candidatos. A estratégia do gene candidato é uma abordagem flexível com baixo custo, controle de qualidade relativamente simples e análise estatística, e uma explicação biológica relativamente fácil por trás da associação porque os genes selecionados são todos importantes para a doença.
2. Usando a abordagem orientada por hipóteses. Considering the hypothesis that some specific genes may be associated with the study outcome, a sequence-based approach was chosen for the analysis of potentially functional single nucleotide polymorphism (SNPs), selecting SNPs that are more likely to be of functional value associated with drug metabolizing enzymes, immunogenic loci, drug transport proteins, drug-acting receptors and other links, especially those located in candidate genes coding regions.
3. Usando chips personalizados. A matriz de genotipagem multiétnica expandida (MEGAEX), um microarray construído por consórcios com recursos aprimorados para entender doenças complexas em uma variedade de populações. Este microarray disponível comercialmente determina a resposta individual a medicamentos através da detecção de loci de 2.036.060 marcadores. Ele também complementa as informações imunológicas HLA-A e HLA-B para concluir a imputação do genótipo.

Iii. Controle de qualidade O estudo possui um procedimento estrito de operação de teste padrão e o treinamento relevante é realizado para o pessoal envolvido no teste antes do início do experimento, e o teste só pode ser realizado após a aprovação do treinamento. Temos um centro de controle de qualidade com pessoal dedicado responsável pelo progresso do sujeito e pelo controle da qualidade dos dados. Uma plataforma de randomização digital on -line e o sistema de gerenciamento de entrada de informações são configurados com base no terminal do servidor da Web, capaz de agrupar o caso de casos em tempo hábil e a entrada de informações do formulário de observação de casos clínicos eletrônicos e pode verificar e corrigir de maneira eficaz e automaticamente os erros durante o processo de entrada de informações. Ou seja, ajuda a garantir a precisão e a confiabilidade das informações inseridas e pode fornecer monitoramento de dados em tempo real para os supervisores. Além disso, este estudo monitorará a condução de experimentos e entrada de dados.

4. Plano de gerenciamento de dados

• Data Center: O Centro de Gerenciamento de Dados estabelecido pelo Standard Nacional de Gerenciamento de Dados realiza o trabalho de gerenciamento de dados.
• Sistema de gerenciamento de dados: o RedCap é usado para estabelecer formulários de relato de caso eletrônico para coleta e gerenciamento de dados on -line.
• Coleta de dados: entrada de dados por registrantes de dados independentes não envolvidos no estudo na unidade principal do estudo.
• Monitoramento de consistência dos dados: monitoramento de consistência dos dados por um monitor independente de terceiros.
• Auditoria e bloqueio de dados: os dados são auditados, limpos e bloqueados por um gerenciador de dados dedicado.

V. Plano de Análise Estatística

(i) Teste de hipótese. H0: Não há diferença nos genes entre indivíduos com e sem danos ao fígado após a ingestão de APAP H1: diferenças genéticas significativas entre indivíduos com e sem danos no fígado após a ingestão de APAP

(ii) Estratégias analíticas.

• As variáveis ​​contínuas foram descritas como média ± desvio padrão (DP) ou mediana da faixa interquartil (IQR), e as diferenças entre os grupos foram analisadas por ANOVA de dois fatores ou testes não paramétricos. As variáveis ​​categóricas foram expressas como números e porcentagens e analisadas por modelos de regressão logística.
• O equilíbrio de Hardy-Weinberg (HWE) entre os grupos controle foi testado usando o teste χ2 de qualidade de ajuste. Usando a exibição de análise de haplótipos （Software de Haploview） 4.2, o grupo da região do haplótipo foi selecionado considerando o desequilíbrio de ligação entre as tags de polimorfismos de nucleotídeo único (TAGSNPs).
• A análise de regressão logística condicional multivariada foi realizada para estimar a associação entre genótipo e risco de DILI da APAP por taxas de dominância (ORS) e intervalos de confiança de 95% (cis) com lavagem gástrica e uso de antídotos como covariáveis.
• Três modelos genéticos diferentes foram usados ​​para sintetizar o papel dos TagsNPs. Pacote de software para o programa on-line Hardy-Weinberg (Shesis) foi usado para análise de haplótipos em modelo de regressão logística.
• Todas as análises foram realizadas usando estatísticas é uma poderosa plataforma de software estatística (SPSS) para Windows (versão 26.0 EUA). Os valores de P bicaudal <0,05 foram considerados estatisticamente significativos.