Screening dei geni di suscettibilità per la lesione epatica indotta dal farmaco APAP nella popolazione cinese: uno studio caso-controllo (PAIN)

I. Oggetto di studio

(i) Nella strategia del gruppo: continuo in gruppo.

(ii) Strategia di raggruppamento ：

1. Gruppo di casi.

   Criteri di inclusione ：

   • Una chiara storia di ingestione di paracetamolo (o farmaci contenenti paracetamori).
   • Test di plasma e/o urina per componenti di paracetamolo se la storia dell'ingestione non è chiara.
   • Monitoraggio di alanina aminotransferasi (ALT) o aspartato aminotransferasi (AST) ≥ 1000 UI/L in qualsiasi momento dopo la somministrazione di APAP e il punteggio RUCAM (RUCAM)
   • Età ≥ 14 anni.
   • L'argomento o il tutore accetta di partecipare a questo progetto e firma un modulo di consenso informato.

   Criteri di esclusione ： • L'uso di farmaci per i quali la frequenza delle reazioni avverse al danno epatico è definita come "comune o molto comune" (≥1%) nelle istruzioni.

   • Uso concomitante di erbe chiaramente suscettibili al danno epatico (vedere l'elenco delle definizioni nell'allegato).
   • Avere una causa definita nota di danno epatico: epatite virale attiva; malattia epatica alcolica; malattia epatica autoimmune; tumori epatici primari o secondari; e altre malattie epatiche sottostanti che hanno influenzato la funzione epatica.
   • Coloro che non forniscono informazioni generali complete e informazioni cliniche.
   • Soggetti o tutori che non accettano di vedere questo progetto non firmano il modulo di consenso informato.

2. Gruppo di controllo

   Criteri di inclusione ：

   • Una chiara storia di ingestione di paracetamolo (o farmaci contenenti paracetamori).
   • Test plasmatici e/o urine per componenti di paracetamolo se la storia dell'ingestione APAP non è chiara.
   • Età: ≥ 14 anni.
   • L'argomento o il tutore accetta di partecipare a questo progetto e firma un modulo di consenso informato.

   Criteri di esclusione ： • L'uso di farmaci per i quali la frequenza delle reazioni avverse al danno epatico è definita come "comune o molto comune" (≥1%) nelle istruzioni.

   • Uso simultaneo di erbe chiaramente suscettibili al danno epatico (vedere l'elenco delle definizioni nell'allegato).

   • Ci sono cause definite note di danno epatico (vedere l'elenco delle definizioni allegate): epatite virale attiva; malattia epatica alcolica; malattia epatica autoimmune; tumori epatici primari o secondari; e altre malattie epatiche sottostanti che hanno influenzato la funzione epatica.

   • Coloro che non riescono a fornire informazioni generali complete e informazioni cliniche.

   • Soggetti o tutori che non accettano di vedere questo progetto non firmano il modulo di consenso informato.

   (iii) Strategia di abbinamento.

   Principio corrispondente ：

   • I partecipanti al caso e al controllo sono stati abbinati in base alla dose ingerita, alla durata della somministrazione di antidoto e alla durata del lavaggio gastrico.

   • 1: 2 corrispondenza.

   Fattori confondenti ：

   • Assunzione della dose: Rapporto del paziente (primario) + Test di concentrazione del sangue (secondario)

   • Tempo di utilizzo dell'antidoto: <4 ore, 4-24 ore,> 24 ore

   • Tempo di lavaggio gastrico: <1 ora, ≥1 ora

   (iv) stima della dimensione del campione

   Fonte dei parametri ：

   • Concentrati su enzimi metabolizzanti dei farmaci, loci immunogeni
   • La distribuzione delle frequenze alleliche di suscettibilità di DILI dipendenti da APAP nelle popolazioni asiatiche basate sui risultati della letteratura.

2. Valore dei parametri ：

• Ipotesi: ambiente genico.
• Modello di risultato: rischio basale P0 = 0,10.
• Effetto genetico = 1.2,
• Potenza = 0,8, tasso di errore di tipo I = 0,05 (due lati).

Risultati ： La dimensione del campione del caso deve essere 113 con una dimensione del campione di controllo di 226.

Ii. Fattori di esposizione/rischio.

(i) Definizione. I fattori di esposizione si riferiscono ai geni di suscettibilità per Dili causati da APAP, tra cui ：

• 2.036.060 siti di marker
• Antigene leucocitario umano (HLA): loci immunitari HLA-A e HLA-B.
• Imputazione genotipo.

(ii) Metodi di misurazione.

1. Adottare la strategia genica candidata. La strategia genica candidata è un approccio flessibile con un controllo di qualità e un'analisi statistica relativamente a basso costo, relativamente semplice e una spiegazione biologica relativamente semplice alla base dell'associazione perché i geni selezionati sono tutti importanti per la malattia.
2. Usando l'approccio guidato dall'ipotesi. Considerando l'ipotesi che alcuni geni specifici possano essere associati all'esito dello studio, è stato scelto un approccio basato su sequenza per l'analisi del polimorfismo a singolo nucleotide potenzialmente funzionale (SNP) (SNP), selezionando SNP che hanno maggiori probabilità di essere un valore funzionale associato a anzimi di metabolizzazioni farmacologici.
3. Utilizzo di chip personalizzati. L'array di genotipizzazione multietnico ampliato (MEGAEX), un microarray costruito da consorzi con capacità migliorate per comprendere le malattie complesse in una varietà di popolazioni. Questo microarray disponibile in commercio determina la risposta individuale del farmaco attraverso il rilevamento di 2.036.060 loci marcatori. Completa inoltre informazioni su loci immunitari HLA-A e HLA-B per completare l'imputazione del genotipo.

Iii. Controllo di qualità Lo studio ha una rigorosa procedura di operazione di prova standard e viene condotta una formazione pertinente per il personale coinvolto nel test prima dell'inizio dell'esperimento e il test può essere condotto solo dopo aver superato la formazione. Abbiamo un centro di controllo di qualità con personale dedicato responsabile del progresso degli argomenti e del controllo di qualità dei dati. Una piattaforma di randomizzazione digitale online e un sistema di gestione delle informazioni sulle informazioni sono impostati in base al terminale del server Web, in grado di raggruppare la randomizzazione del caso tempestivo e della voce delle informazioni sul modulo di osservazione clinica elettronica e può verificare efficacemente e automaticamente gli errori durante il processo di inserimento delle informazioni. Cioè, aiuta a garantire l'accuratezza e l'affidabilità delle informazioni inserite e può fornire il monitoraggio dei dati in tempo reale per i supervisori. Inoltre, questo studio monitorerà lo svolgimento di esperimenti e immissione dei dati.

IV. Piano di gestione dei dati

• Data Center: il centro di gestione dei dati istituiti dal National Data Management Standard intraprende un lavoro di gestione dei dati.
• Sistema di gestione dei dati: RedCap viene utilizzato per stabilire moduli elettronici per la raccolta e la gestione dei dati online.
• Raccolta di dati: immissione dei dati da parte di dichiaranti di dati indipendenti non coinvolti nello studio nell'unità di lead dello studio.
• Monitoraggio della coerenza dei dati: monitoraggio della coerenza dei dati da parte di un monitor indipendente di terze parti.
• Audit e blocco dei dati: i dati vengono controllati, puliti e bloccati da un gestore dati dedicato.

V. Piano di analisi statistica

(i) test di ipotesi. H0: nessuna differenza nei geni tra soggetti con e senza danno epatico dopo l'ingestione di APAP H1: differenze genetiche significative tra soggetti con e senza danno epatico dopo l'ingestione di APAP

(ii) Strategie analitiche.

• Le variabili continue sono state descritte come media ± deviazione standard (DS) o mediana dell'intervallo interquartile (IQR) e le differenze tra i gruppi sono state analizzate mediante ANOVA a due fattori o test non parametrici. Le variabili categoriche sono state espresse come numeri e percentuali e analizzate dai modelli di regressione logistica.
• L'equilibrio di Hardy-Weinberg (HWE) tra i gruppi di controllo è stato testato utilizzando il test χ2 bontà di adattamento. Utilizzando l'analisi aplotipo Visualizza （Haploview） 4,2 Software, il gruppo di regione aplotipo è stato selezionato considerando lo squilibrio del collegamento tra i tag di polimorfismi a singolo nucleotide (TAGSNP).
• È stata eseguita l'analisi di regressione logistica condizionale multivariata per stimare l'associazione tra genotipo e il rischio di dili dall'APAP per rapporti di dominanza (OR) e intervalli di confidenza al 95% (CIS) con lavaggio gastrico e uso antidoto come covariate.
• Sono stati usati tre diversi modelli genetici per sintetizzare il ruolo dei TAGSNP. Il pacchetto software per il programma online di analisi Hardy-Weinberg (Shesis) è stato utilizzato per l'analisi di aplotipo nel modello di regressione logistica.
• Tutte le analisi sono state eseguite utilizzando statistiche è una potente piattaforma software statistica (SPSS) per Windows (versione 26.0 USA). I valori P a due code <0,05 sono stati considerati statisticamente significativi.