Detección de genes de susceptibilidad para lesiones hepáticas inducidas por fármacos inducidos por APAP en la población china: un estudio de casos y controles (PAIN)

I. Estudiar objeto

(i) En la estrategia grupal: continuo en grupo.

(ii) Estrategia de agrupación:

1. Grupo de casos.

   Criterios de inclusión:

   • Una clara historia de ingestión de acetaminofeno (o fármacos que contienen acetaminofeno).
   • Pruebas de plasma y/o orina para componentes de acetaminofeno si el historial de ingestión no está claro.
   • Monitoreo de alanina aminotransferasa (ALT) o aspartato aminotransferasa (AST) ≥ 1000 UI/L en cualquier momento después de la administración APAP y el Método de Evaluación de Causalidad Roussel (RUCAM)> 6
   • Edad ≥ 14 años.
   • El sujeto o tutor acuerda participar en este proyecto y firma un formulario de consentimiento informado.

   Criterios de exclusión: el uso de fármacos para los cuales la frecuencia de las reacciones adversas al daño hepático se define como "común o muy común" (≥1%) en las instrucciones.

   • Uso concurrente de hierbas que son claramente susceptibles al daño hepático (ver lista de definiciones en el anexo).
   • Tienen una causa definida de daño hepático conocida: hepatitis viral activa; enfermedad hepática alcohólica; enfermedad hepática autoinmune; tumores hepáticos primarios o secundarios; y otra enfermedad hepática subyacente que ha afectado la función hepática.
   • Aquellos que no proporcionan información general e información clínica completa.
   • Los sujetos o guardianes que no aceptan ver este proyecto no firman el formulario de consentimiento informado.

2. Grupo de control

   Criterios de inclusión:

   • Una clara historia de ingestión de acetaminofeno (o fármacos que contienen acetaminofeno).
   • Pruebas de plasma y/o orina para componentes de acetaminofeno si la historia de la ingestión de APAP no está claro.
   • Edad: ≥ 14 años.
   • El sujeto o tutor acuerda participar en este proyecto y firma un formulario de consentimiento informado.

   Criterios de exclusión: el uso de fármacos para los cuales la frecuencia de las reacciones adversas al daño hepático se define como "común o muy común" (≥1%) en las instrucciones.

   • Uso concurrente de hierbas que son claramente susceptibles al daño hepático (ver lista de definiciones en el anexo).

   • Existen causas definidas conocidas del daño hepático (ver lista adjunta de definiciones): hepatitis viral activa; enfermedad hepática alcohólica; enfermedad hepática autoinmune; tumores hepáticos primarios o secundarios; y otra enfermedad hepática subyacente que ha afectado la función hepática.

   • Aquellos que no proporcionan información general e información clínica completa.

   • Los sujetos o tutores que no aceptan ver este proyecto no firman el formulario de consentimiento informado.

   (iii) Estrategia de correspondencia.

   Principio coincidente:

   • Los participantes de casos y control se combinaron de acuerdo con la dosis ingerida, la duración de la administración antídoto y la duración del lavado gástrico.

   • 1: 2 coincidencia.

   Factores de confusión:

   • Ingesta de dosis: Informe del paciente (Primario) + Prueba de concentración de sangre (secundaria)

   • Tiempo de uso antídoto: <4 horas, 4-24 horas,> 24 horas

   • Tiempo de lavado gástrico: <1 hora, ≥1 hora

   (iv) Estimación del tamaño de la muestra

   Fuente de parámetros:

   • Centrarse en las enzimas metabolizantes de drogas, loci inmunogénicos
   • La distribución de las frecuencias de alelos de susceptibilidad DILI dependientes de APAP en poblaciones asiáticas basadas en hallazgos de la literatura.

2. Valor de parámetro:

• Hipótesis: ambiente genético.
• Modelo de resultado: Riesgo de referencia P0 = 0.10.
• Efecto genético = 1.2,
• Potencia = 0.8, tasa de error tipo I = 0.05 (dos lados).

Resultados: el tamaño de la muestra del caso debe ser 113 con un tamaño de muestra de control de 226.

II. Factores de exposición/riesgo.

(i) Definición. Los factores de exposición se refieren a los genes de susceptibilidad para DILI causados ​​por APAP, incluido::

• 2,036,060 sitios marcadores
• Antígeno leucocitario humano (HLA): loci inmunes HLA-A y HLA-B.
• Imputación de genotipo.

(ii) Métodos de medición.

1. Adoptar la estrategia de genes candidatos. La estrategia de genes candidatos es un enfoque flexible con control de calidad relativamente simple y de análisis estadístico relativamente simple, y una explicación biológica relativamente fácil detrás de la asociación porque los genes seleccionados son importantes para la enfermedad.
2. Utilizando el enfoque impulsado por la hipótesis. Teniendo en cuenta la hipótesis de que algunos genes específicos pueden estar asociados con el resultado del estudio, se eligió un enfoque basado en la secuencia para el análisis del polimorfismo de un solo nucleótido potencialmente funcional (SNP), seleccionando SNP que tienen más probabilidades de ser de valor funcional asociado con la metabolización de los fármacos, la enzimas inmunogénicas, los loci, las proteínas de transporte de fármaco, los receptores de acción fármaco y otros vínculos, especialmente los que se ubican en vínculos de los vínculos de los vínculos de las cárcel.
3. Uso de chips personalizados. La matriz de genotipado multiétnico ampliado (MegaEX), una microarray construida por consorcios con capacidades mejoradas para comprender enfermedades complejas en una variedad de poblaciones. Esta microarrays disponible comercialmente determina la respuesta de fármacos individuales a través de la detección de 2,036,060 loci de marcadores. También complementa la información de loci inmunes HLA-A y HLA-B para completar laomputación de genotipo.

Iii. Control de calidad El estudio tiene un procedimiento estricto de operación de prueba estándar, y se realiza una capacitación relevante para el personal involucrado en la prueba antes del inicio del experimento, y la prueba solo se puede realizar después de pasar la capacitación. Tenemos un centro de control de calidad con personal dedicado responsable del progreso del sujeto y el control de calidad de los datos. Se configura una plataforma de aleatorización digital en línea y un sistema de administración de ingresos de información en función del terminal del servidor web, que es capaz de agrupar a la aleatorización de casos oportuno y la entrada de información de información de observación clínica electrónica, y puede verificar y corregir de manera efectiva los errores durante el proceso de entrada de información. Es decir, ayuda a garantizar la precisión y confiabilidad de la información ingresada, y puede proporcionar monitoreo de datos en tiempo real para los supervisores. Además, este estudio monitoreará la realización de experimentos y entrada de datos.

IV. Plan de gestión de datos

• Centro de datos: el centro de gestión de datos establecido por el estándar nacional de gestión de datos realiza trabajos de gestión de datos.
• Sistema de gestión de datos: REDCAP se utiliza para establecer formularios de informes de casos electrónicos para la recopilación y gestión de datos en línea.
• Recopilación de datos: Entrada de datos por registrantes de datos independientes que no están involucrados en el estudio en la unidad principal del estudio.
• Monitoreo de consistencia de datos: monitoreo de consistencia de datos por un monitor de terceros independiente.
• Auditoría y bloqueo de datos: los datos son auditados, limpiados y bloqueados por un administrador de datos dedicado.

V. Plan de análisis estadístico

(i) Prueba de hipótesis. H0: No hay diferencia en los genes entre sujetos con y sin daño hepático después de la ingestión de APAP H1: diferencias genéticas significativas entre los sujetos con y sin daño hepático después de la ingestión de APAP

(ii) estrategias analíticas.

• Las variables continuas se describieron como media ± desviación estándar (DE) o mediana del rango intercuartil (IQR), y las diferencias entre los grupos se analizaron mediante pruebas ANOVA de dos factores o no paramétricas. Las variables categóricas se expresaron como números y porcentajes y se analizaron mediante modelos de regresión logística.
• El equilibrio de Hardy-Weinberg (HWE) entre los grupos de control se probó utilizando la prueba χ2 de bondad de ajuste. Utilizando el análisis de análisis de haplotipo （Haploview） 4.2 Software, se seleccionó el grupo de región de haplotipo considerando el desequilibrio de enlace entre las etiquetas de polimorfismos de un solo nucleótido (TAGSNPS).
• Se realizó un análisis de regresión logística condicional multivariante para estimar la asociación entre el genotipo y el riesgo de DILI de APAP por relaciones de dominio (ORS) e intervalos de confianza del 95% (IC) con lavado gástrico y uso de antídotos como covariables.
• Se usaron tres modelos genéticos diferentes para sintetizar el papel de los TAGSNP. El paquete de software para el programa en línea de análisis de Hardy-Weinberg se utilizó para el análisis de haplotipo en el modelo de regresión logística.
• Todos los análisis se realizaron utilizando estadísticas es una poderosa plataforma de software estadístico (SPSS) para Windows (versión 26.0 USA). Los valores de P de dos colas <0.05 se consideraron estadísticamente significativos.