Atividade da lipase do ácido lisossômico na doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD LAL)

A doença hepática gordurosa não alcoólica (DHGNA) é uma doença multifatorial que afeta um quarto da população mundial. O acúmulo patológico de gordura, nos hepatócitos, é o primeiro acerto e se deve à lipogênese hepática e extra-hepática alterada, lipólise e lipofagia das grandes gotículas lipídicas.

A lipofagia tem papel fundamental no surgimento da DHGNA, nos autolisossomos, pequenas gotículas de gordura são catabolizadas pela enzima Lisossomal Acid Lipase (LAL) que hidrolisa ésteres de colesterol e triglicerídeos formando colesterol e ácidos graxos livres.

Nosso grupo de pesquisa demonstrou que, indivíduos acometidos pela DHGNA, apresentam atividade enzimática reduzida tanto em relação a pacientes com doença hepática crônica de etiologia diferente, mas com estadiamento comparável, tanto em relação a indivíduos controles saudáveis.

Os leucócitos são o principal local de atividade enzimática no sangue, porém, nosso grupo de pesquisa tem demonstrado que ela também pode ser detectada no interior das plaquetas, demonstrando como a atividade do LAL pode ser trocada entre as células.

Além disso, nosso grupo demonstrou, pela primeira vez, como a atividade enzimática intracelular é reduzida, independentemente da contagem de plaquetas e leucócitos e progressivamente da doença hepática crônica até a cirrose.

Entre os fatores que contribuem para o metabolismo lipídico alterado, deve-se contar a predisposição genética ao acúmulo de gordura hepática. Várias variantes de genes que codificam proteínas envolvidas na digestão ou armazenamento de gorduras estão envolvidas.

Neste estudo foram considerados: patatin-like phospholipase domain-containing 3 (PNPLA3), Transmembrane 6 superfamília 2 (TM6SF2) e 17β-hidroxiesteróide desidrogenase tipo 13 (HSD17B13).

A variante rs738409 (C>G, p.I148M) do gene PNPLA3 consiste em uma proteína na qual o sítio catalítico não é totalmente acessível ao substrato que, consequentemente, se acumula no sítio de armazenamento.

Essa variante é comumente encontrada em indivíduos com NAFLD e tem sido amplamente relatado como os portadores variantes progridem mais rapidamente para a doença grave (esteato-hepatite) do que os indivíduos do tipo selvagem.

O gene TM6SF2 codifica um transportador de membrana envolvido no movimento dos triglicerídeos, a variante rs58542926 (C> T E167K) foi associada a uma maior predisposição à fibrose hepática em indivíduos com DHGNA. Isso provavelmente se deve à perda da função da proteína, resultando na retenção hepática de triglicerídeos e colesterol.

Ao contrário de PNPLA3 e TM6SF2, a variante rs72613567 (TA> TAA) do gene HSD17B13 tem um efeito protetor contra a progressão da DHGNA. Caracteriza-se por uma perda de função da proteína que protege contra danos crônicos no fígado e atenua a progressão da doença, embora ainda esteja em estudo a forma como ocorre o efeito protetor.

Devido à etiologia multifatorial da doença, à necessidade de realizar uma vigilância direcionada em indivíduos geneticamente predispostos e, a fim de prevenir a progressão da DHGNA para formas patológicas graves caracterizadas por aumento da mortalidade, neste estudo, 316 indivíduos serão incluídos.

Serão divididos da seguinte forma: Caucasianos Italianos, com idade > 18 e <70 anos, com DHGNA não cirrótica e portadores da variante PNPLA3 I148M, e, 158 Caucasianos Italianos, com idade > 18 e <70 anos, com doença não cirrótica NAFLD e portadores do alelo tipo selvagem.

Serão considerados os seguintes critérios de exclusão: qualquer tipo de doença maligna nos últimos 5 anos, qualquer tipo de doença inflamatória ou autoimune, corticosteróides para uso sistêmico, qualquer tipo de medicamento que possa afetar o peso corporal ou a composição corporal, insuficiência renal (TFG < 90 mL/min), insuficiência cardíaca (classes II-IV da NYHA), qualquer tipo de doença hepática diferente da DHGNA, ingestão excessiva de álcool (> 140 g/semana para homens e 70 g/semana para mulheres), participação em redução de peso programa nos últimos 3 meses, sais biliares, colestiramina nos últimos 6 meses antes da inscrição, colecistectomia anterior, doença da vesícula biliar.

Sangue periférico será coletado para dosagem de lipídios hemáticos (colesterol total e frações, triglicerídeos), atividade total de LAL no sangue, para realização de análises genéticas e por fim para avaliação da atividade da lipase nas plaquetas.

Também será realizada elastografia hepática, em 100 pacientes, de acordo com a presença/ausência da variante PNPLA3, a fim de ponderar a predisposição genética no desenvolvimento ou progressão da DHGNA Finalmente, em indivíduos que apresentem uma atividade da lipase 30% menor que o normal valor (0,88 ± 0,38 (média ± DP), a metilação do promotor LIPA será estudada.