Avaliação do papel dos microRNAs na fisiopatologia familiar da febre mediterrânea FMF (miRinFMF)
Estudo do papel dos microARNs na Fisiopatologia do Fièvre Mediterrâneo Familiar
O diagnóstico genético da Febre Familiar do Mediterrâneo (FMF) está bem estabelecido para pacientes homozigotos. Por outro lado, embora os indivíduos heterozigotos sejam portadores teoricamente saudáveis, 1/3 deles desenvolverão sintomas clínicos de FFM e poderiam se beneficiar de tratamento profilático. Isto sugere que os mecanismos de expressão do distúrbio não estão totalmente elucidados até o momento. Os resultados preliminares obtidos no Instituto de Medicina Regenerativa e Bioterapia (IRMB) sugerem o envolvimento de um mecanismo epigenético na patogênese da FMF, e nosso laboratório tem fortes argumentos quanto ao envolvimento de microRNAs (em particular miR-326) que são reguladores negativos de expressão genetica.
Este estudo é exploratório e tem como objetivo validar o papel dos miRNAs na expressão clínica da FMF em pacientes, explorando assim os mecanismos epigenéticos que podem explicar a variabilidade de expressão deste distúrbio.
Visão geral do estudo
Status
Condições
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
A febre familiar do Mediterrâneo (FMF) é uma doença autoinflamatória rara devido a mutações no gene MEFV (MEditerranean FeVer), que causa episódios recorrentes de febre e serosite aguda (peritônio, pleura, sinóvia) começando na primeira infância.
A identificação do gene MEFV permitiu o desenvolvimento de um teste de sequenciamento genômico para confirmar o diagnóstico. As mutações mais frequentes são M680I, M694V, V726A e M694I, localizadas no éxon 10. Este gene codifica a proteína pirina, que, após um estímulo pró-inflamatório, é capaz de montar um complexo multiproteico para formar o inflamassoma de pirina. Mutações no gene MEFV levam a uma alteração de sua expressão nas células do sistema imune inato em pacientes com FFM, causando uma desregulação da resposta imune, o que resulta na secreção anormal de certas citocinas pró-inflamatórias, como IL-1β e IL-18.
FMF é uma doença autossômica recessiva. Assim, indivíduos heterozigotos são portadores teoricamente saudáveis. No entanto, em quase 1/3 dos pacientes com sintomas clínicos de FFM, é encontrada uma única mutação heterozigótica. Até o momento, não existe nenhum marcador biológico que distinga os indivíduos heterozigotos que desenvolverão a doença daqueles que permanecerão portadores saudáveis, daí erros de diagnóstico e atrasos no tratamento. Várias hipóteses foram apresentadas para explicar esta variação na expressão da mutação, seja ela o ambiente, o envolvimento de outros genes ou o envolvimento de modificadores epigenéticos.
Dentre os mecanismos que regulam a expressão gênica, os microRNAs (miRNAs), que são pequenos RNAs não codificantes, regulam negativamente a expressão gênica no nível pós-transcricional, ligando-se a sequências localizadas principalmente na região 3'UTR do mRNA do gene. Muitas publicações relatam que eles são expressos de forma anormal em diversas patologias. Muito recentemente, isso foi relatado para FMF. Vários estudos concentraram-se nos miRNAs como biomarcadores da FMF, sem avaliar o seu papel na patogênese da FMF.
Avaliar o papel dos miRNAs direcionados especificamente ao gene MEFV nas células mieloides (especialmente monócitos), e o impacto funcional de sua modulação nessas células, aprofundaria nossa compreensão da fisiopatologia da FMF. Se um miRNA direcionado especificamente ao MEFV tiver um papel comprovado na fisiopatologia da FMF, ele poderá, em última análise, provar ser um biomarcador prognóstico do distúrbio para pacientes heterozigotos, ou mesmo um futuro alvo terapêutico.
Tipo de estudo
Inscrição (Estimado)
Estágio
- Não aplicável
Contactos e Locais
Contato de estudo
- Nome: Anna DEGUET, MD
- Número de telefone: 0033669107224
- E-mail: a-deguet@chu-montpellier.fr
Locais de estudo
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Nîmes, França
- University Hospital of Nimes
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Investigador principal:
- Tu Anh TRAN, MD
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Contato:
- Tu Anh TRAN, MD
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Paris, França
- Robert Debré University Hospital of Paris
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Contato:
- Ulrich MEINZER, MD
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Investigador principal:
- Ulrich MEINZER, MD
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Paris, França
- University Hospital of Paris Kremlin Bicêtre
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Contato:
- Isabelle KONE-PAUT, MD
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Investigador principal:
- Isabelle KONE-PAUT, MD
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Toulouse, França
- University Hospital of Toulouse
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Contato:
- Karine BROCHARD-PAYET, MD
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Investigador principal:
- Karine BROCHARD-PAYET, MD
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
- Filho
- Adulto
- Adulto mais velho
Aceita Voluntários Saudáveis
Descrição
Critério de inclusão:
- Paciente com idade ≥1 ano
- Peso corporal ≥ 10kg
- Grupo de pacientes homozigotos: pacientes homozigotos para MEFV (M694V, M694I, M680I, V726A)
- Grupo de pacientes heterozigotos sintomáticos: pacientes heterozigotos para o gene MEFV (M694V, M694I, M680I, V726A) que atendem aos critérios de Yalcinkaya para diagnóstico de FMF (febre com duração de 6 a 72 horas com pelo menos 3 crises - Dor abdominal de 6 a 72 horas de duração com pelo menos menos 3 crises - Dor no peito com duração de 6 a 72 horas com pelo menos 3 crises - Artrite com duração de 6 a 72 horas com pelo menos 3 crises - FMF História familiar de FMF)
- Grupo de pacientes heterozigotos assintomáticos: pacientes heterozigotos para o gene MEFV (M694V, M694I, M680I, V726A) que não atendem aos critérios de Yalcinkaya para diagnóstico de FMF
- Grupo controle: ausência de distúrbio autoinflamatório identificado
Critério de exclusão:
- Ausência de coleta de consentimento informado do participante ou ausência de consentimento informado dos representantes/responsáveis legais do participante pediátrico
- Sujeitos não inscritos na Previdência Social
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Finalidade Principal: Outro
- Alocação: N / D
- Modelo Intervencional: Atribuição de grupo único
- Mascaramento: Nenhum (rótulo aberto)
Armas e Intervenções
Grupo de Participantes / Braço |
Intervenção / Tratamento |
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Outro: Amostra de sangue
Coleta de 10 ml de sangue em tubo de EDTA durante:
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Coleta de 10 ml de sangue em tubos de EDTA por paciente.
Uma vez coletados, os tubos de sangue serão transportados em até 24 horas para o IRB (Instituto de Pesquisa em Bioterapia) do Hospital Universitário de Montpellier, onde os monócitos serão isolados por triagem magnética com base na expressão do marcador de superfície CD14+, após uma etapa preliminar de Ficoll .
Os monócitos serão então congelados em nitrogênio a -196°C até o uso (biobanco). Experimentos de ganho de função serão então realizados em monócitos transfectando-os com o microRNA de interesse ou controle.
A expressão da proteína pirina e sua taxa de fosforilação serão avaliadas após indução por experimentos de imunoprecipitação seguidos de western blot.
A atividade do inflamassoma de pirina também será estudada observando a piroptose e a taxa de toxicidade usando o teste LDH.
Todos esses experimentos serão realizados na ausência e na presença do microRNA para estudar seu papel na fisiopatologia da FMF.
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Quantificação do nível de expressão miR-326
Prazo: 1 dia (na inscrição)
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Analisar os níveis de expressão (quantificação) do miRNA miR-326 em monócitos sanguíneos nos 4 grupos de indivíduos: homozigotos, heterozigotos sintomáticos, heterozigotos assintomáticos para MEFV e indivíduos controle, a fim de determinar se o miR-326 influencia ou não a resposta inflamatória de monócitos.
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1 dia (na inscrição)
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Quantificação do nível de expressão de MEFV
Prazo: 1 dia (na inscrição)
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Analisar os níveis de expressão (quantificação) do gene MEFV em monócitos sanguíneos nos 4 grupos de indivíduos: homozigotos, heterozigotos sintomáticos, heterozigotos assintomáticos para MEFV e indivíduos controle
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1 dia (na inscrição)
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Comparação do nível de expressão miR-326
Prazo: 1 dia (na inscrição)
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Compare os níveis de expressão do miR-326 entre grupos heterozigotos sintomáticos e assintomáticos.
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1 dia (na inscrição)
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Comparação do nível de expressão MEFV
Prazo: 1 dia (na inscrição)
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Compare os níveis de expressão de MEFV entre grupos heterozigotos sintomáticos e assintomáticos.
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1 dia (na inscrição)
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Coleta de amostras de sangue
Prazo: 1 dia (na inscrição)
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Criar um biobanco (congelamento de monócitos extraídos de amostras de pacientes) para posteriormente estudar outros miRNAs
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1 dia (na inscrição)
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Níveis de expressão de outros miRNAs candidatos direcionados ao MEFV
Prazo: 1 dia (na inscrição)
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Quantificação dos níveis de expressão de outros miRNAs candidatos direcionados ao MEFV nos 4 grupos de participantes.
5 miRNAs serão selecionados usando um estudo de metiloma em andamento.
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1 dia (na inscrição)
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: Eric JEZIORSKI, MD, University Hospital, Montpellier
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Estimado)
Conclusão Primária (Estimado)
Conclusão do estudo (Estimado)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
Outros números de identificação do estudo
- RECHMPL22_0296 - UF 8310
Plano para dados de participantes individuais (IPD)
Planeja compartilhar dados de participantes individuais (IPD)?
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
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