Comparação de alterações nos aminoácidos intramiocárdicos durante o uso de soluções cardioplégicas Calafiore e Del Nido modificadas

Vinte pacientes consecutivos submetidos a cirurgia de revascularização miocárdica primária eletiva foram incluídos neste estudo. Os pacientes foram excluídos deste estudo se tivessem sofrido infarto do miocárdio prévio, tivessem fração de ejeção reduzida ou fossem submetidos a cirurgia combinada ou repetida. Os pacientes foram aleatoriamente designados para serem submetidos à cirurgia usando um dos dois métodos de proteção miocárdica:

• Grupo 1: cardioplegia sanguínea quente anterógrada intermitente de Calafiore (composta por bomba de sangue normotérmica, cloreto de potássio 2 mEq/ml e sulfato de magnésio 50%). Esta solução cardioplégica foi administrada a 37 graus C após a aplicação do pinçamento aórtico e repetida após a conclusão de cada anastomose coronária distal, conforme descrito anteriormente.
• Grupo 2: solução cardioplégica de sangue frio anterógrada intermitente del Nido modificada (composta por 750 ml de solução de Ringer com lactato, 200 ml de sangue de bomba, 13 ml de bicarbonato de sódio 8,4%, 16 ml de manitol 20%, 4 ml de sulfato de magnésio 50% , 13 ml de lidocaína 2% e 13 ml de cloreto de potássio 2 mEq/ml). Esta solução foi administrada como um bolus de 1 litro a 3-4 graus C após a aplicação do pinçamento aórtico e repetida como um bolus de 500 ml se o tempo de pinçamento se estendesse além de 60 minutos (nenhum dos pacientes neste estudo) .

Cada paciente inscrito no estudo deu um consentimento informado por escrito para a publicação dos dados do estudo, e o protocolo do estudo estava em conformidade com as diretrizes éticas da Declaração de Helsinque de 1975, conforme refletido na aprovação a priori do comitê local de pesquisa em seres humanos número 171 datado de 13. Abril de 2022

Coleta de amostras de sangue e biópsias miocárdicas Amostras de sangue periférico foram coletadas imediatamente antes da cirurgia e às 4, 12, 24 e 48 horas de pós-operatório e foram utilizadas para determinação das concentrações sanguíneas de enzimas cardíacas (CK-MB e troponina I).

Biópsias miocárdicas (4-14 mg de peso úmido) foram obtidas usando uma agulha Tru-cut do ápice do ventrículo esquerdo em todos os pacientes da seguinte forma:

• Biópsia 1: “Espécime em repouso”, imediatamente após início da circulação extracorpórea.
• Biópsia 2: “Espécime isquêmico”, 30 minutos após a aplicação do pinçamento aórtico.
• Biópsia 3: “Espécime de reperfusão”, 20 minutos após a retirada do pinçamento aórtico.

Cada amostra foi imediatamente congelada em nitrogênio líquido (-185 graus C) até o processamento para análises de aminoácidos e ácido lático.

Determinação de enzimas cardíacas (CK-MB e troponina I). ​​As análises foram realizadas utilizando um scanner de imunofluorescência (iChroma II, Boditech Med Incorporated, Coreia e Obelis s.a, Bélgica). Os níveis sanguíneos de CK-MB foram expressos em mg/dl e os níveis de troponina I foram expressos em ng/ml.

Determinação das concentrações de aminoácidos miocárdicos e ácido láctico Cada amostra de biópsia congelada foi pesada (Laboratory Analytical Balance, Sartorius, Alemanha), triturada em nitrogênio líquido e homogeneizada em 1000 micro mol de solução salina normal a 0,9%. Uma amostra de 400 micromoles do homogeneizado foi transferida para um tubo Eppendorf e foram adicionados 100 micromoles de água para HPLC. Cada amostra foi então armazenada a 4 graus C durante uma hora, após o que foi centrifugada a 10.000 voltas/minuto durante 5 minutos. Uma amostra de 400 micromol do sobrenadante foi filtrada através de um filtro de membrana Vivaspin® 500 de 0,2 µm (Satorius, Alemanha), transferida para um tubo Eppendorf e foi centrifugada a 10.000 voltas/min por 5 minutos. Uma amostra de 300 micromol do filtrado foi transferida para um tubo Eppendorf e um volume igual de tampão de diluição da amostra (membraPure, Alemanha) foi adicionado. Esta solução foi utilizada para determinar as concentrações de 7 aminoácidos (alanina, glutamina, ácido glutâmico, glicina, lisina, ornitina e taurina) utilizando o Analisador de Aminoácidos A300 (ARACUS, membraPure, Alemanha). As concentrações de ácido láctico também foram medidas usando um kit e analisador dedicado para determinação de lactato plasmático (LACT2, cobas, Roche Diagnostics GmbH, Alemanha). As concentrações de aminoácidos e ácido láctico foram expressas como micro mol/g de peso úmido.