使用 Calafiore 和改良 Del Nido 心脏停搏液期间心肌内氨基酸变化的比较

本研究纳入了 20 名连续接受选择性原发性冠状动脉旁路移植术的患者。 如果患者既往患有心肌梗死、射血分数降低或正在接受联合或重复手术，则被排除在本研究之外。 患者被随机分配接受以下两种心肌保护方法之一的手术：

• 第 1 组：Calafiore 间歇性顺行温血停跳液（由常温泵血、氯化钾 2 mEq/ml 和硫酸镁 50% 组成）。 在应用主动脉十字夹后，在 37 摄氏度下施用该心脏停跳溶液，并在完成每个远端冠状动脉吻合术后重复，如前所述。
• 第2组：改良del Nido间歇性顺行冷血心脏停跳液（由750 ml乳酸林格液、200 ml泵血、13 ml 8.4%碳酸氢钠、16 ml 20%甘露醇、4 ml 50%硫酸镁组成） ，13 ml 利多卡因 2% 和 13 ml 氯化钾 2 mEq/ml)。 在应用主动脉夹钳后，在 3-4 摄氏度下以 1 升推注形式施用该溶液，如果夹钳时间延长超过 60 分钟，则以 500 毫升推注形式重复施用（本研究中没有患者） 。

参与该研究的每位患者均就研究数据的发表提供了书面知情同意书，并且研究方案符合 1975 年《赫尔辛基宣言》的道德准则，这反映在当地人类研究委员会 171 号（日期为 13）的事先批准中。 2022 年 4 月

血样和心肌活检的采集 在手术前和术后 4、12、24 和 48 小时采集外周血样，用于测定血液中心肌酶（CK-MB 和肌钙蛋白 I）浓度。

使用 Tru-cut 针从每位患者的左心室心尖处进行心肌活检（4-14 mg 湿重），如下所示：

• 活检 1：“静息标本”，体外循环开始后立即进行。
• 活检 2：“缺血标本”，应用主动脉夹钳 30 分钟后。
• 活检 3：“再灌注标本”，主动脉夹钳移除后 20 分钟。

每个样本立即在液氮（-185 摄氏度）中速冻，直到进行氨基酸和乳酸分析。

心肌酶（CK-MB 和肌钙蛋白 I）的测定 使用免疫荧光扫描仪（iChroma II，Boditech Med Incorporated，韩国和 Obelis s.a，比利时）进行分析。 CK-MB 的血液水平以 mg/dl 表示，肌钙蛋白 I 的水平以 ng/ml 表示。

心肌氨基酸和乳酸浓度的测定将每个冷冻活检标本称重（实验室分析天平，Sartorius，德国），在液氮中粉碎并在1000微摩尔0.9%生理盐水中匀浆。 将 400 微摩尔匀浆样品转移至 Eppendorf 管中，并添加 100 微摩尔 HPLC 水。 然后将每个样品在 4 摄氏度下保存一小时，然后以 10000 转/分钟的速度离心 5 分钟。 将 400 微摩尔上清液样品通过 Vivaspin® 500 膜过滤器 0.2 µm（Satorius，德国）过滤，转移至 Eppendorf 管中并以 10000 转/分钟离心 5 分钟。 将 300 微摩尔滤液样品转移至 Eppendorf 管中，并添加等体积的样品稀释缓冲液（membraPure，德国）。 使用 A300 氨基酸分析仪（ARACUS，membraPure，德国）将该溶液用于测定 7 种氨基酸（丙氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、鸟氨酸和牛磺酸）的浓度。 还使用专用血浆乳酸测定试剂盒和分析仪（LACT2，cobas，Roche Diagnostics GmbH，德国）测量乳酸浓度。 氨基酸和乳酸的浓度以微摩尔/克湿重表示。