Сравнение изменений внутримиокардиальных аминокислот при применении Калафиоре и модифицированных кардиоплегических растворов Дель Нидо

В это исследование были включены двадцать последовательных пациентов, перенесших плановое первичное аортокоронарное шунтирование. Пациенты были исключены из этого исследования, если они ранее перенесли инфаркт миокарда, имели сниженную фракцию выброса или подвергались комбинированному или повторному хирургическому вмешательству. Пациенты были случайным образом распределены на операцию с использованием одного из двух методов защиты миокарда:

• Группа 1: Калафиоре, интермиттирующая антеградная теплокровная кардиоплегия (состоящая из нормотермического насоса крови, хлорида калия 2 мэкв/мл и сульфата магния 50%). Этот кардиоплегический раствор вводили при 37 градусах Цельсия после наложения аортального поперечного зажима и повторяли после завершения каждого дистального коронарного анастомоза, как описано ранее.
• Группа 2: Модифицированный раствор дель Нидо для интермиттирующей антеградной холодовой кардиоплегии (состоящий из 750 мл раствора Рингера с лактатом, 200 мл перекачиваемой крови, 13 мл бикарбоната натрия 8,4%, 16 мл маннита 20%, 4 мл сульфата магния 50%). , 13 мл лидокаина 2% и 13 мл хлорида калия 2 мэкв/мл). Этот раствор вводили болюсно объемом 1 литр при температуре 3-4 градуса Цельсия после наложения пережатия аорты и повторяли болюсно по 500 мл, если время пережатия превышало 60 минут (ни у одного из пациентов в этом исследовании). .

Каждый пациент, включенный в исследование, дал письменное информированное согласие на публикацию данных исследования, а протокол исследования соответствовал этическим принципам Хельсинкской декларации 1975 года, что отражено в предварительном одобрении местного комитета по исследованиям на людях № 171 от 13. апрель 2022 г.

Сбор образцов крови и биопсия миокарда. Образцы периферической крови собирали непосредственно перед операцией, а также через 4, 12, 24 и 48 часов после операции и использовали для определения концентрации в крови сердечных ферментов (CK-MB и тропонина I).

Биопсии миокарда (сырой вес 4–14 мг) брали с помощью иглы Tru-cut из верхушки левого желудочка у каждого пациента следующим образом:

• Биопсия 1: «Покоящийся препарат», сразу после начала экстракорпорального кровообращения.
• Биопсия 2: «Ишемический образец», через 30 минут после наложения пережатия аорты.
• Биопсия 3: «Реперфузионный образец», через 20 минут после снятия пережатия аорты.

Каждый образец был немедленно заморожен в жидком азоте (-185°С) до обработки для анализа аминокислот и молочной кислоты.

Определение сердечных ферментов (CK-MB и тропонин I). Анализы проводили с помощью иммунофлуоресцентного сканера (iChroma II, Boditech Med Incorporated, Корея и Obelis s.a., Бельгия). Уровни CK-MB в крови выражали в мг/дл, а уровни тропонина I выражали в нг/мл.

Определение концентрации аминокислот и молочной кислоты в миокарде. Каждый замороженный образец биопсии взвешивали (Лабораторные аналитические весы, Sartorius, Германия), измельчали ​​в жидком азоте и гомогенизировали в 1000 микромоль 0,9% физиологического раствора. Образец гомогената объемом 400 микромоль переносили в пробирку Эппендорфа и добавляли 100 микромоль воды для ВЭЖХ. Затем каждый образец хранили при 4 градусах Цельсия в течение одного часа, после чего центрифугировали при 10000 об/мин в течение 5 минут. Образец супернатанта объемом 400 микромоль фильтровали через мембранный фильтр Vivaspin® 500 0,2 мкм (Satorius, Германия), переносили в пробирку Эппендорфа и центрифугировали при 10000 об/мин в течение 5 минут. Образец фильтрата (300 микромоль) переносили в пробирку Эппендорфа и добавляли равный объем буфера для разведения образца (membraPure, Германия). Этот раствор использовали для определения концентрации 7 аминокислот (аланина, глютамина, глутаминовой кислоты, глицина, лизина, орнитина и таурина) с помощью анализатора аминокислот A300 (ARACUS, membraPure, Германия). Концентрацию молочной кислоты также измеряли с использованием специального набора и анализатора для определения лактата в плазме (LACT2, cobas, Roche Diagnostics GmbH, Германия). Концентрации аминокислот и молочной кислоты выражали в микромоль/г сырой массы.