Porównanie zmian w stężeniu aminokwasów w mięśniu sercowym podczas stosowania roztworów kardioplegicznych Calafiore i modyfikowanych Del Nido

Do badania włączono dwudziestu kolejnych pacjentów poddawanych planowemu pierwotnemu pomostowaniu aortalno-wieńcowemu. Pacjenci byli wykluczani z tego badania, jeśli przebyli zawał mięśnia sercowego w przeszłości, mieli obniżoną frakcję wyrzutową lub byli poddawani łączonej lub powtarzanej operacji. Pacjenci zostali losowo przydzieleni do operacji z zastosowaniem jednej z dwóch metod ochrony mięśnia sercowego:

• Grupa 1: Przerywana kardioplegia wstępna metodą Calafiore z ciepłą krwią (składająca się z normotermicznej krwi z pompy, chlorku potasu 2 mEq/ml i siarczanu magnezu 50%). Ten roztwór kardioplegiczny podawano w temperaturze 37 stopni C po założeniu zacisku krzyżowego aorty i powtarzano po zakończeniu każdego dalszego zespolenia wieńcowego, jak opisano wcześniej.
• Grupa 2: Zmodyfikowany roztwór do kardioplegii z zimną krwią, przerywany, antegrade del Nido (składający się z 750 ml roztworu Ringera z dodatkiem mleczanu, 200 ml krwi z pompy, 13 ml wodorowęglanu sodu 8,4%, 16 ml mannitolu 20%, 4 ml siarczanu magnezu 50% , 13 ml lidokainy 2% i 13 ml chlorku potasu 2 mEq/ml). Roztwór ten podawano w postaci 1-litrowego bolusa w temperaturze 3-4 stopni C po założeniu zacisku krzyżowego aorty i powtarzano jako bolus 500 ml, jeśli czas stosowania zacisku krzyżowego przekraczał 60 minut (żaden z pacjentów w tym badaniu) .

Każdy pacjent włączony do badania wyraził pisemną świadomą zgodę na publikację danych z badania, a protokół badania był zgodny z wytycznymi etycznymi Deklaracji Helsińskiej z 1975 r., co znalazło odzwierciedlenie w apriorycznej zgodzie lokalnego komitetu ds. badań na ludziach nr 171 z dnia 13 kwiecień 2022 r

Pobieranie krwi i biopsje mięśnia sercowego Bezpośrednio przed operacją oraz 4, 12, 24 i 48 godzin po operacji pobierano próbki krwi obwodowej, które wykorzystywano do oznaczania stężenia enzymów sercowych (CK-MB i troponiny I) we krwi.

U każdego pacjenta pobierano biopsję mięśnia sercowego (4–14 mg mokrej masy) za pomocą igły Tru-cut z wierzchołka lewej komory w następujący sposób:

• Biopsja 1: „Okaz w spoczynku”, bezpośrednio po rozpoczęciu krążenia pozaustrojowego.
• Biopsja 2: „Próbka niedokrwienna”, 30 minut po założeniu zacisku krzyżowego aorty.
• Biopsja 3: „Próbka reperfuzyjna”, 20 minut po usunięciu zacisku krzyżowego aorty.

Każdą próbkę natychmiast zamrażano w ciekłym azocie (-185 stopni C) do czasu przetworzenia w celu analizy aminokwasów i kwasu mlekowego.

Oznaczanie enzymów sercowych (CK-MB i troponiny I) Analizy przeprowadzono przy użyciu skanera immunofluorescencyjnego (iChroma II, Boditech Med Incorporated, Korea i Obelis s.a, Belgia). Poziomy CK-MB we krwi wyrażono w mg/dl, a poziomy troponiny I wyrażono w ng/ml.

Oznaczanie stężeń aminokwasów mięśnia sercowego i kwasu mlekowego. Każdą zamrożoną próbkę biopsyjną zważono (Laboratory Analytical Balance, Sartorius, Niemcy), rozdrobniono w ciekłym azocie i homogenizowano w 1000 mikromoli 0,9% roztworu soli fizjologicznej. Próbkę homogenatu o wielkości 400 mikromoli przeniesiono do probówki Eppendorfa i dodano 100 mikromoli wody HPLC. Każdą próbkę następnie przechowywano w temperaturze 4 stopni C przez jedną godzinę, po czym wirowano ją przy 10000 obr/min przez 5 minut. 400 mikromolową próbkę supernatantu przesączono przez filtr membranowy Vivaspin® 500 0,2 µm (Satorius, Niemcy), przeniesiono do probówki Eppendorfa i wirowano przy 10000 obr/min przez 5 minut. Próbkę przesączu o wielkości 300 mikromoli przeniesiono do probówki Eppendorfa i dodano równą objętość buforu do rozcieńczania próbki (membraPure, Niemcy). Roztwór ten wykorzystano do oznaczenia stężeń 7 aminokwasów (alaniny, glutaminy, kwasu glutaminowego, glicyny, lizyny, ornityny i tauryny) przy użyciu analizatora aminokwasów A300 (ARACUS, membraPure, Niemcy). Stężenia kwasu mlekowego mierzono także przy użyciu dedykowanego zestawu i analizatora do oznaczania mleczanu w osoczu (LACT2, cobas, Roche Diagnostics GmbH, Niemcy). Stężenia aminokwasów i kwasu mlekowego wyrażono w mikromolach/g mokrej masy.