Sydänsisäisten aminohappojen muutosten vertailu Calafioren ja modifioitujen Del Nido Cardioplegic -liuosten käytön aikana

Kaksikymmentä peräkkäistä potilasta, joille tehtiin elektiivinen primaarinen sepelvaltimon ohitusleikkaus, otettiin mukaan tähän tutkimukseen. Potilaat suljettiin pois tästä tutkimuksesta, jos he olivat kärsineet aikaisemmasta sydäninfarktista, heillä oli vähentynyt ejektiofraktio tai heille tehtiin yhdistelmä- tai toistuva leikkaus. Potilaat jaettiin satunnaisesti leikkaukseen käyttämällä yhtä kahdesta menetelmästä sydänlihaksen suojaamiseksi:

• Ryhmä 1: Calafioren ajoittainen antegradinen lämpimän veren kardioplegia (koostuu normotermisestä pumppuverestä, kaliumkloridista 2 mekv/ml ja magnesiumsulfaatista 50 %). Tämä kardiologinen liuos annettiin 37 °C:ssa aortan ristikiinnittimen asettamisen jälkeen ja toistettiin kunkin distaalisen sepelvaltimon anastomoosin päätyttyä, kuten aiemmin on kuvattu.
• Ryhmä 2: Modifioitu del Nido jaksottainen antegradinen kylmäverinen kardiologinen liuos (sisältää 750 ml Ringerin laktaattiliuosta, 200 ml pumppuverta, 13 ml natriumbikarbonaattia 8,4 %, 16 ml mannitolia 20 %, 4 ml magnesiumsulfaattia 50 % , 13 ml lidokaiinia 2 % ja 13 ml kaliumkloridia 2 mekv/ml). Tämä liuos annettiin 1 litran boluksena 3-4 celsiusasteessa aortan ristipuristimen asettamisen jälkeen ja toistettiin 500 ml:n boluksena, jos ristikiinnitysaika pidentyi yli 60 minuuttia (ei yksikään tämän tutkimuksen potilaista). .

Jokainen tutkimukseen osallistunut potilas antoi kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen tutkimustietojen julkaisemiseen, ja tutkimussuunnitelma vastasi vuoden 1975 Helsingin julistuksen eettisiä ohjeita, kuten paikallisen ihmistutkimuskomitean 171 päivätty 13. Huhtikuu 2022

Verinäytteiden ja sydänlihasten biopsioiden kerääminen Ääreisverinäytteet otettiin välittömästi ennen leikkausta ja 4, 12, 24 ja 48 tuntia leikkauksen jälkeen, ja niitä käytettiin sydänentsyymien (CK-MB ja troponiini I) veripitoisuuksien määrittämiseen.

Sydänlihasbiopsiat (märkäpaino 4-14 mg) otettiin Tru-cut neulalla vasemman kammion kärjestä seuraavasti:

• Biopsia 1: "Lepäävä näyte", välittömästi kehonulkoisen verenkierron alkamisen jälkeen.
• Biopsia 2: "Iskeeminen näyte", 30 minuuttia aortan ristikiinnittimen asettamisen jälkeen.
• Biopsia 3: "Reperfuusionäyte", 20 minuuttia aortan ristikiinnittimen poistamisen jälkeen.

Jokainen näyte pikapakastettiin välittömästi nestetypessä (-185 astetta C) aminohappo- ja maitohapon analyysiin asti.

Sydänentsyymien (CK-MB ja troponiini I) määritys Analyysit suoritettiin käyttämällä immunofluoresenssiskanneria (iChroma II, Boditech Med Incorporated, Korea ja Obelis s.a, Belgia). CK-MB-tasot veressä ilmaistiin mg/dl:na ja troponiini I:n tasot ilmaistiin ng/ml:nä.

Sydänlihaksen aminohappo- ja maitohappopitoisuuksien määritys Jokainen pakastettu biopsianäyte punnittiin (Laboratory Analytical Balance, Sartorius, Saksa), murskattiin nestetypessä ja homogenoitiin 1000 mikromoolissa 0,9 % normaalia suolaliuosta. 400 mikromoolin näyte homogenaatista siirrettiin Eppendorf-putkeen ja lisättiin 100 mikromoolia HPLC-vettä. Kutakin näytettä säilytettiin sitten 4 °C:ssa yhden tunnin ajan, minkä jälkeen sitä sentrifugoitiin nopeudella 10 000 kierrosta/min 5 minuuttia. 400 mikromoolin näyte supernatantista suodatettiin Vivaspin® 500 -kalvosuodattimen 0,2 um (Satorius, Saksa) läpi, siirrettiin Eppendorf-putkeen ja sentrifugoitiin nopeudella 10 000 kierrosta/min 5 minuuttia. 300 mikromoolin näyte suodoksesta siirrettiin Eppendorf-putkeen ja sama tilavuus näytteen laimennuspuskuria (membraPure, Saksa) lisättiin. Tätä liuosta käytettiin 7 aminohapon (alaniini, glutamiini, glutamiinihappo, glysiini, lysiini, ornitiini ja tauriini) pitoisuuksien määrittämiseen käyttämällä A300 Amino Acid Analyzer -laitetta (ARACUS, membraPure, Saksa). Maitohappopitoisuudet mitattiin myös käyttämällä erityistä plasmalaktaatin määrityssarjaa ja analysaattoria (LACT2, cobas, Roche Diagnostics GmbH, Saksa). Aminohappojen ja maitohapon pitoisuudet ilmaistiin mikromooleina/g märkäpainoa.