Porovnání změn intramyokardiálních aminokyselin během užívání Calafiore a modifikovaných del Nido kardioplegických roztoků

Do této studie bylo zařazeno dvacet po sobě jdoucích pacientů podstupujících elektivní primární bypass koronární tepny. Z této studie byli vyloučeni pacienti, kteří prodělali předchozí infarkt myokardu, měli sníženou ejekční frakci nebo podstupovali kombinovanou či opakovanou operaci. Pacienti byli náhodně přiřazeni k chirurgickému zákroku za použití jedné ze dvou metod ochrany myokardu:

• Skupina 1: Calafiore intermitentní antegrádní teplokrevná kardioplegie (skládající se z krve z normotermické pumpy, chloridu draselného 2 mEq/ml a síranu hořečnatého 50 %). Tento kardioplegický roztok byl podáván při 37 °C po aplikaci aortální zkřížené svorky a opakován po dokončení každé distální koronární anastomózy, jak bylo popsáno dříve.
• Skupina 2: Modifikovaný del Nido intermitentní antegrádní chladnokrevný kardioplegický roztok (skládající se ze 750 ml laktátového Ringerova roztoku, 200 ml krve z pumpy, 13 ml hydrogenuhličitanu sodného 8,4 %, 16 ml mannitolu 20 %, 4 ml 50 % síranu hořečnatého 13 ml lidokainu 2% a 13 ml chloridu draselného 2 mEq/ml). Tento roztok byl podáván jako 1-litrový bolus při 3-4 stupních C po aplikaci aortální zkřížené svorky a opakován jako 500 ml bolus, pokud doba zkřížené svorky přesáhla 60 minut (žádný z pacientů v této studii) .

Každý pacient zařazený do studie dal písemný informovaný souhlas se zveřejněním údajů studie a protokol studie byl v souladu s etickými pokyny Helsinské deklarace z roku 1975, jak se odráží v a priori schválení místním výborem pro lidský výzkum číslo 171 ze dne 13. dubna 2022

Odběr vzorků krve a biopsie myokardu Vzorky periferní krve byly odebrány bezprostředně před operací a 4, 12, 24 a 48 hodin po operaci a byly použity pro stanovení krevních koncentrací srdečních enzymů (CK-MB a troponinu I).

Biopsie myokardu (4-14 mg vlhké hmotnosti) byly odebrány pomocí jehly Tru-cut z vrcholu levé komory u každého pacienta následovně:

• Biopsie 1: "Klidový vzorek", bezprostředně po začátku mimotělního oběhu.
• Biopsie 2: "Ischemický vzorek", 30 minut po aplikaci křížové svorky aorty.
• Biopsie 3: "Reperfuzní vzorek", 20 minut po odstranění aortální křížové svorky.

Každý vzorek byl okamžitě rychle zmražen v kapalném dusíku (-185 stupňů C) až do zpracování pro analýzy aminokyselin a kyseliny mléčné.

Stanovení srdečních enzymů (CK-MB a troponin I) Analýzy byly provedeny pomocí imunofluorescenčního skeneru (iChroma II, Boditech Med Incorporated, Korea a Obelis s.a, Belgie). Hladiny CK-MB v krvi byly vyjádřeny jako mg/dl a hladiny troponinu I byly vyjádřeny jako ng/ml.

Stanovení koncentrací aminokyselin myokardu a kyseliny mléčné Každý zmrazený bioptický vzorek byl zvážen (Laboratory Analytical Balance, Sartorius, Německo), rozdrcen v kapalném dusíku a homogenizován v 1000 mikromolech 0,9% normálního fyziologického roztoku. Vzorek 400 mikromol homogenátu byl přenesen do zkumavky Eppendorf a bylo přidáno 100 mikromol vody pro HPLC. Každý vzorek byl poté uložen při teplotě 4 °C po dobu jedné hodiny, poté byl 5 minut odstřeďován při 10 000 kolech/min. Vzorek 400 mikromol supernatantu byl přefiltrován přes membránový filtr Vivaspin® 500 0,2 um (Satorius, Německo), přenesen do Eppendorfovy zkumavky a centrifugován při 10 000 kolech/min po dobu 5 minut. Vzorek 300 mikromol filtrátu byl přenesen do Eppendorfovy zkumavky a byl přidán stejný objem pufru pro ředění vzorku (membraPure, Německo). Tento roztok byl použit pro stanovení koncentrací 7 aminokyselin (alanin, glutamin, kyselina glutamová, glycin, lysin, ornithin a taurin) pomocí A300 Amino Acid Analyzer (ARACUS, membraPure, Německo). Koncentrace kyseliny mléčné byly také měřeny pomocí speciální soupravy a analyzátoru pro stanovení laktátu v plazmě (LACT2, cobas, Roche Diagnostics GmbH, Německo). Koncentrace aminokyselin a kyseliny mléčné byly vyjádřeny jako mikromol/g vlhké hmotnosti.