Vergleich der Veränderungen der intramyokardialen Aminosäuren während der Verwendung von Calafiore und modifizierten kardioplegischen Lösungen von Del Nido

Zwanzig aufeinanderfolgende Patienten, die sich einer elektiven primären Koronararterien-Bypass-Transplantation unterzogen, wurden in diese Studie aufgenommen. Patienten wurden von dieser Studie ausgeschlossen, wenn sie zuvor einen Myokardinfarkt erlitten hatten, eine verminderte Ejektionsfraktion aufwiesen oder sich einer kombinierten oder wiederholten Operation unterzogen. Die Patienten wurden nach dem Zufallsprinzip einer Operation zugeteilt, bei der eine von zwei Methoden zum Myokardschutz zum Einsatz kam:

• Gruppe 1: Intermittierende antegrade Warmblut-Kardioplegie nach Calafiore (bestehend aus normothermischem Pumpblut, Kaliumchlorid 2 mEq/ml und Magnesiumsulfat 50 %). Diese kardioplegische Lösung wurde nach der Anwendung der Aortenkreuzklemme bei 37 °C verabreicht und nach Abschluss jeder distalen Koronaranastomose wie zuvor beschrieben wiederholt.
• Gruppe 2: Modifizierte intermittierende antegrade Kaltblut-Kardioplegiker-Lösung von del Nido (bestehend aus 750 ml Ringer-Laktat-Lösung, 200 ml Pumpblut, 13 ml Natriumbicarbonat 8,4 %, 16 ml Mannitol 20 %, 4 ml Magnesiumsulfat 50 % , 13 ml Lidocain 2 % und 13 ml Kaliumchlorid 2 mEq/ml). Diese Lösung wurde als 1-Liter-Bolus bei 3–4 °C nach der Anwendung der Aorten-Kreuzklemme verabreicht und als 500-ml-Bolus wiederholt, wenn die Kreuzklemmen-Zeit mehr als 60 Minuten dauerte (bei keinem der Patienten in dieser Studie). .

Jeder in die Studie aufgenommene Patient gab eine schriftliche Einverständniserklärung zur Veröffentlichung der Studiendaten ab, und das Studienprotokoll entsprach den ethischen Richtlinien der Helsinki-Erklärung von 1975, wie sie in der vorherigen Genehmigung durch das örtliche Humanforschungskomitee Nr. 171 vom 13. zum Ausdruck kamen April 2022

Entnahme von Blutproben und Myokardbiopsien. Periphere Blutproben wurden unmittelbar vor der Operation und 4, 12, 24 und 48 Stunden nach der Operation entnommen und zur Bestimmung der Blutkonzentrationen von Herzenzymen (CK-MB und Troponin I) verwendet.

Myokardbiopsien (4–14 mg Nassgewicht) wurden mit einer Tru-Cut-Nadel von der Spitze des linken Ventrikels bei jedem Patienten wie folgt entnommen:

• Biopsie 1: „Ruheprobe“, unmittelbar nach Beginn der extrakorporalen Zirkulation.
• Biopsie 2: „Ischämische Probe“, 30 Minuten nach Anwendung der Aortenkreuzklemme.
• Biopsie 3: „Reperfusionsprobe“, 20 Minuten nach der Entfernung der Aortenkreuzklemme.

Jede Probe wurde sofort in flüssigem Stickstoff (-185 °C) eingefroren, bis sie für die Analyse von Aminosäuren und Milchsäure verarbeitet wurde.

Bestimmung von Herzenzymen (CK-MB und Troponin I) Die Analysen wurden mit einem Immunfluoreszenzscanner (iChroma II, Boditech Med Incorporated, Korea und Obelis s.a, Belgien) durchgeführt. Die Blutspiegel von CK-MB wurden in mg/dl und die Troponin-I-Spiegel in ng/ml ausgedrückt.

Bestimmung der myokardialen Aminosäure- und Milchsäurekonzentrationen. Jede gefrorene Biopsieprobe wurde gewogen (Laboranalytische Waage, Sartorius, Deutschland), in flüssigem Stickstoff zerkleinert und in 1000 Mikromol 0,9 % normaler Kochsalzlösung homogenisiert. Eine 400-Mikromol-Probe des Homogenats wurde in ein Eppendorf-Röhrchen überführt und mit 100 Mikromol HPLC-Wasser versetzt. Jede Probe wurde dann eine Stunde lang bei 4 °C gelagert und anschließend 5 Minuten lang mit 10.000 Umdrehungen/Minute zentrifugiert. Eine 400-Mikromol-Probe des Überstands wurde durch einen Vivaspin® 500-Membranfilter 0,2 µm (Satorius, Deutschland) filtriert, in ein Eppendorf-Röhrchen überführt und 5 Minuten lang mit 10.000 Umdrehungen/Minute zentrifugiert. Eine 300-Mikromol-Probe des Filtrats wurde in ein Eppendorf-Röhrchen überführt und mit einem gleichen Volumen Probenverdünnungspuffer (membraPure, Deutschland) versetzt. Diese Lösung wurde zur Bestimmung der Konzentrationen von 7 Aminosäuren (Alanin, Glutamin, Glutaminsäure, Glycin, Lysin, Ornithin und Taurin) mit dem A300 Amino Acid Analyzer (ARACUS, membraPure, Deutschland) verwendet. Die Milchsäurekonzentrationen wurden auch mit einem speziellen Plasma-Laktat-Bestimmungskit und -Analysegerät (LACT2, cobas, Roche Diagnostics GmbH, Deutschland) gemessen. Die Konzentrationen von Aminosäuren und Milchsäure wurden in Mikromol/g Nassgewicht ausgedrückt.