Confronto delle variazioni degli aminoacidi intramiocardici durante l'uso di soluzioni cardioplegiche Calafiore e Del Nido modificate

In questo studio sono stati arruolati venti pazienti consecutivi sottoposti a bypass coronarico primario elettivo. I pazienti sono stati esclusi da questo studio se avevano sofferto di un precedente infarto miocardico, avevano una frazione di eiezione ridotta o erano sottoposti a interventi chirurgici combinati o ripetuti. I pazienti sono stati assegnati in modo casuale a sottoporsi ad un intervento chirurgico utilizzando uno dei due metodi per la protezione del miocardio:

• Gruppo 1: cardioplegia intermittente anterograda a sangue caldo di Calafiore (composta da sangue di pompa normotermica, cloruro di potassio 2 mEq/ml e solfato di magnesio al 50%). Questa soluzione cardioplegica è stata somministrata a 37 gradi C dopo l'applicazione del morsetto aortico e ripetuta dopo il completamento di ciascuna anastomosi coronarica distale come descritto in precedenza.
• Gruppo 2: Soluzione cardioplegica a sangue freddo anterogrado intermittente modificata del Nido (composta da 750 ml di soluzione Ringer lattato, 200 ml di sangue di pompaggio, 13 ml di bicarbonato di sodio 8,4%, 16 ml di mannitolo 20%, 4 ml di solfato di magnesio 50% , 13 ml di lidocaina 2% e 13 ml di cloruro di potassio 2 mEq/ml). Questa soluzione è stata somministrata come bolo da 1 litro a 3-4 gradi C dopo l'applicazione del cross-clamp aortico e ripetuta come bolo da 500 ml se il tempo del cross-clamp si estendeva oltre i 60 minuti (nessuno dei pazienti in questo studio) .

Ciascun paziente arruolato nello studio ha fornito un consenso informato scritto per la pubblicazione dei dati dello studio e il protocollo dello studio è conforme alle linee guida etiche della Dichiarazione di Helsinki del 1975, come indicato nell'approvazione a priori da parte del comitato locale di ricerca umana numero 171 del 13 Aprile 2022

Raccolta di campioni di sangue e biopsie miocardiche I campioni di sangue periferico sono stati raccolti immediatamente prima dell'intervento chirurgico e 4, 12, 24 e 48 ore dopo l'intervento e sono stati utilizzati per la determinazione delle concentrazioni ematiche degli enzimi cardiaci (CK-MB e troponina I).

Le biopsie miocardiche (4-14 mg di peso umido) sono state effettuate utilizzando un ago Tru-cut dall'apice del ventricolo sinistro in ogni paziente come segue:

• Biopsia 1: "Campione a riposo", immediatamente dopo l'inizio della circolazione extracorporea.
• Biopsia 2: "Prelievo ischemico", 30 minuti dopo l'applicazione della pinza crociata aortica.
• Biopsia 3: "Campione di riperfusione", 20 minuti dopo la rimozione della pinza crociata aortica.

Ciascun campione è stato immediatamente congelato in azoto liquido (-185°C) fino al momento del trattamento per le analisi degli aminoacidi e dell'acido lattico.

Determinazione degli enzimi cardiaci (CK-MB e troponina I) Le analisi sono state effettuate utilizzando uno scanner a immunofluorescenza (iChroma II, Boditech Med Incorporated, Corea e Obelis s.a, Belgio). I livelli ematici di CK-MB sono stati espressi come mg/dl e i livelli di troponina I sono stati espressi come ng/ml.

Determinazione delle concentrazioni di aminoacidi e acido lattico nel miocardio Ciascun campione bioptico congelato è stato pesato (Bilancia Analitica di Laboratorio, Sartorius, Germania), frantumato in azoto liquido e omogeneizzato in 1000 micromoli di soluzione salina normale allo 0,9%. Un campione di 400 micromoli dell'omogenato è stato trasferito in una provetta Eppendorf e sono state aggiunte 100 micromoli di acqua HPLC. Ciascun campione è stato poi conservato a 4 gradi C per un'ora, dopo di che è stato centrifugato a 10.000 giri/min per 5 minuti. Un campione di 400 micromoli del surnatante è stato filtrato attraverso un filtro a membrana Vivaspin® 500 da 0,2 µm (Satorius, Germania), trasferito in una provetta Eppendorf ed è stato centrifugato a 10.000 giri/min per 5 minuti. Un campione da 300 micromoli del filtrato è stato trasferito in una provetta Eppendorf ed è stato aggiunto un volume uguale di tampone di diluizione del campione (membraPure, Germania). Questa soluzione è stata utilizzata per determinare le concentrazioni di 7 aminoacidi (alanina, glutammina, acido glutammico, glicina, lisina, ornitina e taurina) utilizzando l'analizzatore di aminoacidi A300 (ARACUS, membraPure, Germania). Le concentrazioni di acido lattico sono state misurate anche utilizzando un kit e un analizzatore dedicati per la determinazione del lattato plasmatico (LACT2, cobas, Roche Diagnostics GmbH, Germania). Le concentrazioni di amminoacidi e acido lattico sono state espresse come micromoli/g di peso umido.