Пластырь с контролируемым высвобождением оксида азота по сравнению с антимониатом меглюмина при лечении кожного лейшманиоза

ЗАДНИЙ ПЛАН

Кожный лейшманиоз (КЛ) является всемирным заболеванием, эндемичным в 88 странах [1]. Подсчитано, что 1,5 млн человек ежегодно болеют КЛ и более 350 млн подвержены риску заражения инфекцией [2-4]. В Америке ежегодно регистрируется 60 000 новых случаев КЛ [5], являющихся эндемичными в 20 из 22 стран и на 2 островах Карибского моря [2]. В настоящее время от КЛ пострадало более 500 солдат армии США, проходящих службу в Ираке [6]. В Андском регионе заболеваемость лейшманиозом резко возросла за последние два десятилетия; достигая более 14 000 случаев в год с 1996 по 1998 год [7]. В Колумбии зарегистрировано 6500 случаев [8]. Увеличение числа зарегистрированных случаев КЛ в Колумбии связано с такими факторами, как миграция, вырубка лесов, разрастание незаконных плантаций, вооруженный политический конфликт и поведенческие изменения переносчиков. Основными штаммами Leishmania в Колумбии являются L. panamensis, L. brazilensis, L. infantum и L. Guyanensis, которые распространены по всей территории страны, преимущественно в сельской местности [10]. КЛ вызывается внутриклеточными простейшими паразитами рода Leishmania [1] и передается человеку через укус небольшого процента классифицированных на сегодняшний день видов москитов phlebotomus и lutzomyia [10]. В пищеварительной системе москитов этот диморфный паразит представляет собой внеклеточную жгутиковую форму, называемую промастиготой, которая при попадании в кровь хозяина фагоцитируется макрофагом, теряя жгутики и превращаясь в амастиготу [12]. Собаки, грызуны и дидельфиды являются естественными хозяевами паразита, а человек — случайным хозяином [11]. Этот зооноз претерпел интересное явление урбанизации, превратившись из крупной сельской единицы, поражающей в основном мужчин активного возраста, в болезнь, поражающую всех людей, особенно детей [8,9]. Характерными поражениями этого заболевания являются язвы, которые заживают спонтанно в течение периода от трех месяцев до года, в зависимости от изолята, и оставляют плоский, атрофический и депигментированный рубец [13-15]. КЛ, особенно продуцируемый L. brazilensis, может развиваться в кожно-слизистый лейшманиоз (МКЛ), который имеет худший прогноз из-за деформирующего характера поражения [16]. Самопроизвольное излечение этих поражений позволяет приобрести частичную устойчивость к реинфекции, что может объяснить более высокую патогенность, наблюдаемую у детей и молодежи [9]. Предыдущие исследования показали более высокую частоту КЛ и плохой ответ на лечение в детской популяции [17]. Программа эпидемиологического надзора в Колумбии требует, чтобы вероятные случаи КЛ (определяемые по признакам язвы и происхождению больного) подтверждались прямым микроскопическим исследованием образца отделения, полученного из язвы, если они отрицательные, биопсией раны. . После подтверждения случаи должны быть уведомлены местному секретарю здравоохранения с использованием клинико-эпидемиологических записей. Это учреждение, отвечающее за эпидемиологический надзор, изучает источники передачи и распределяет лекарства среди пострадавших. В настоящее время при лечении КЛ учитывают различные аспекты, среди которых наиболее важными являются риск развития МКЛ, степень, локализация, количество, размер, эволюция и персистенция поражений [18]. Более 60 лет соединения пятивалентной сурьмы: стибоглюконат натрия (Pentostan®, производства Glaxo-Wellcome) и меглумина антимониат (Glucantime®, производства Sanofi-Aventis) считались препаратами выбора для лечения этого заболевания [19]. ]. Исследования, проведенные в Колумбии, показали процент излечения 85% при использовании меглюмина антимониата [20,21]. Несмотря на то, что эффективность этих препаратов высока, они обладают многими недостатками, такими как парентеральное введение, обратимые побочные эффекты, такие как тошнота, рвота, мышечные и абдоминальные боли, проблемы с сердцем, повышение концентрации печеночных аминотрансфераз и др. химический панкреатит [21,22]. Кроме того, на приверженность лечению влияет его продолжительность (несколько недель), а на доступность — ограничения в его распространении. Были предложены терапевтические альтернативы второй линии; амфотерицин В и пентамидин использовались с отличными результатами, тем не менее их высокая стоимость, малая доступность, необходимость госпитализации пациентов для их введения и тяжесть их побочных эффектов ограничивали их применение [23,24]. В последнее десятилетие были разработаны новые методы лечения КЛ с использованием пероральных препаратов, таких как мефлохин, итраконазол, милтефозин, паромомицин, кетоконазол, аллопуринол и дапсон, однако их эффективность недостаточно доказана [19,21,25,26]. ]. В попытке разработать местное лечение КЛ паромомицин использовался в различных препаратах. Однако показатели излечения, достигаемые с помощью этого препарата, не превышали обычных методов лечения, даже по сравнению с плацебо [27,28]. В нескольких исследованиях in vitro и in vivo было продемонстрировано, что оксид азота (NO) эффективен для элиминации различных штаммов Leishmania в его амастиготной форме [29-35]. Продукция NO в результате окисления L-аргинина, вызванного индуцибельной синтазой оксида азота (iNOS), представляет собой один из наиболее важных защитных механизмов макрофагов [36], в котором идентифицированы две окислительные формы защиты от Leishmania. На первой фазе инфекции в ответ на процесс фагоцитоза часть промастигот элиминируется за счет высвобождения супероксид-иона, процесс, который катализируется НАДФН-оксидазой [29]. Те промастиготы, которые переживают этот защитный механизм, эволюционируют в амастиготы, активируя выработку IL-12 в макрофагах и способствуя презентации антигенов Leishmania [29] Т-хелперам 1-лимфоцитам, которые усиливают цитотоксическую активность макрофагов по отношению к внутриклеточным паразитов через гамма-интерферон (INFγ) и фактор некроза опухоли альфа (TNFα), способствуя продукции NO, катализируемой iNOS [31-33]. Недавнее исследование показывает более высокую активность iNOS в макрофагах субъектов, инфицированных CL, что указывает на жизненно важную роль NO в иммунологической активности против Leishmania [34]. В исследованиях на грызунах, устойчивых к инфекции Leishmania (C57BL/6), которым инокулировали L. major, L. chagasi или L. donovani, применение ингибиторов iNOS, таких как NG-монометил-L-аргинин (L-NMMA), вызывало более высокий скорость выживания и вирулентность паразитов в макрофагах [33,35,37,38]. После инокуляции L. major мышам с генетической предрасположенностью к развитию инфекций Leishmania (BALB/C) активность iNOS не наблюдалась. Однако применение IL-12 позволяло контролировать инфекцию путем активации iNOS [31]. На людях было проведено несколько клинических испытаний местного лечения, содержащего доноры NO [39,40]. В Эквадоре наша группа разработала и испытала крем для местного применения, генерирующий NO, с S-нитрозо-N-ацетилпеницилламином (SNAP), свидетельствующий о положительном эффекте при лечении язв этого типа без сообщений о каких-либо серьезных побочных эффектах. Тем не менее из-за нестабильного высвобождения оксида азота крем приходилось наносить часто (4 раза в день), что затрудняло соблюдение режима лечения [39]. В Сирии другая группа использовала нитрат калия, подкисленный салициловой кислотой и аскорбиновой кислотой, для местного лечения L. tropica [40]. In vitro эта смесь, генерирующая NO, уничтожала амастиготы и промастиготы Leishmania; однако в естественных условиях исследование 40 пациентов показало противоречивые результаты: уменьшение размера язвы у 28% субъектов и заживление только у 12%. Считается, что расхождение в этих результатах связано с методом, использованным для получения NO. Подкисление нитрита вызывает мгновенный выброс NO, но его выделение не сохраняется в течение длительного периода времени [40]. Сложность контроля за высвобождением NO вызвала необходимость поиска новых методов регулирования его высвобождения. Полимеры нановолокна, полученные методом электропрядения, были изучены, чтобы гарантировать постоянное высвобождение фармацевтических препаратов в очаге поражения. В процессе электропрядения высокое напряжение используется для создания электрически заряженной струи полимерного раствора, который высыхает и затвердевает, оставляя после себя сухое полимерное волокно [41]. Когда эта струя проходит через воздух, растворитель испаряется, оставляя после себя заряженное волокно, которое можно электрически отклонить и собрать на металлическом экране [42,43]. Волокна с разнообразными формами и размерами поперечного сечения производятся из различных полимеров. С помощью этой техники удалось успешно инкапсулировать или захватить несколько фармацевтических препаратов, ферментов и белков. В предыдущем исследовании пластыри из нановолокна успешно использовались в качестве средств высвобождения гидрохлорида тетрациклина. Высвобождение тетрациклина было постоянным в течение 5 дней [41;43]. Используя ту же модель, был изготовлен многослойный трансдермальный пластырь, в котором нитрит связан с ионообменной смолой (DOWEX) и получен электроформованием в слой полиуретановых нановолокон. Раствор, содержащий суперабсорбент Waterlock® и полиуретан, наносится методом электропрядения поверх слоя нитрита-DOWEX. Аскорбиновая кислота, захваченная полиуретановым раствором, наносится методом электропрядения на третий слой, а еще один слой суперабсорбента Waterlock® и полиуретана используется в качестве четвертого и последнего слоя. При гидратации этот пластырь, высвобождающий оксид азота (NOP), обеспечивает стабильное высвобождение 3,5 мкмоль NO в течение 12 часов [41,44,45]. В пилотном исследовании, проведенном в Ландазури, Сантандер, Колумбия, было проведено плацебо-контролируемое клиническое исследование с участием 35 пациентов, у которых было выявлено 68 язв, вызванных L. panamensis.Используя NOP, наблюдалось улучшение на 65% в обработанных язвах, при этом улучшение только на 25% в группе плацебо (p = 0,001). В этом пилотном исследовании единственным описанным нежелательным явлением был зуд в области, где был наложен пластырь (неопубликованные данные). Принимая во внимание широкое распространение КЛ, изменение формы его передачи и трудности, связанные с доступностью лекарств, в данном исследовании предлагается выяснить, является ли трансдермальный пластырь донора NO, полученный методом электроспиннинга, по крайней мере, столь же эффективным, как и пластырь донора NO. меглюмина антимониат для лечения КЛ с меньшим количеством побочных эффектов и более низкой стоимостью, что, таким образом, представляет собой эффективную терапевтическую альтернативу. В случае, если эффективность НОП будет продемонстрирована в этом исследовании, будет предоставлена ​​новая и безопасная терапевтическая альтернатива с легким доступом и более высокой приверженностью к одной из самых важных проблем общественного здравоохранения в нашей стране.

ЦЕЛИ

Общая цель

Оценить эффективность и безопасность НОП при лечении ХЛ по сравнению с антимониатом меглюмина (Глюкантим®).

Конкретные цели

1. Оценить скорость заживления язв КЛ с помощью НОП по сравнению с планом лечения меглюмина антимониатом, рекомендованным Минздравом.
2. Выявить нежелательные явления, связанные с применением НОП, и сравнить их с таковыми при лечении антимониатом меглюмина.
3. Выявить и сравнить рецидивы, которые могут возникнуть как с NOP, так и с меглюмина антимониатом.
4. Продвинуться в поиске терапевтической альтернативы КЛ в Колумбии.

ДИЗАЙН

Двойное слепое, рандомизированное, двойное замаскированное, плацебо-контролируемое клиническое исследование, в котором сравнивали пластыри, высвобождающие оксид азота, с антимониатом меглюмина.

РАЗМЕР ОБРАЗЦА

Выборка рассчитана по формуле арккосинуса с использованием степени 80% и ошибки первого рода 0,05%. При назначении 85% успешных случаев для меглюмина антимониата и 75% для NOP потребуется 558 пациентов. После поправки на коэффициент потерь 5% общее количество пациентов, которых необходимо набрать, составляет 620 (по 310 пациентов на группу лечения).

ЧИСЛЕННОСТЬ НАСЕЛЕНИЯ

Население будет состоять из двух регионов Колумбии. Первая — это эндемичная зона в Сантандере, Колумбия, расположенная между долиной Магдалена и Восточным горным хребтом, которая включает муниципалитеты Ландазури, Эль-Кармен, Сан-Висенте, Эль-Плайон и Рионегро. Второй регион представляет собой эндемическую зону в Северной Толиме, в которую входят муниципалитеты Чапараль, Сан-Антонио, Либано, Фалан, Палокабильдо и Марикита.

ОТБОР ПАЦИЕНТОВ

Критерии включения

1. Мужчины и женщины от 18 до 50 лет
2. Кожные язвы более двух недель эволюции
3. Положительный паразитологический диагноз КЛ
4. Пациенты, которые добровольно соглашаются на участие в исследовании и подписывают информированное согласие.
5. Готовность своевременно посещать все визиты (первоначальный, лечебный и последующий)
6. Согласие не использовать какое-либо другое лечение КЛ во время исследования

Критерий исключения

1. Беременные женщины
2. Наличие любого состояния или заболевания, которое подвергает пациента иммунологическому риску (т. сахарный диабет, рак и др.) или любое другое, что, по мнению исследователя, могло изменить течение ХЛ.
3. Диффузный КЛ или более пяти активных поражений.
4. Кожно-слизистый лейшманиоз (очаги не должны располагаться менее чем в 2 см от слизистых оболочек носа, мочеполовой и/или анальной области или от края губ).
5. Висцеральный лейшманиоз
6. Полное или неполное лечение соединениями сурьмы за последние три месяца.
7. Пациенты с печеночной, почечной или сердечно-сосудистой патологией в анамнезе.
8. Умственно или неврологически неполноценные пациенты, которые считаются непригодными для участия в исследовании.

РАЗВИТИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Логистический этап

Этот этап продлится 4 месяца и будет включать в себя следующие мероприятия:

1. Обучение персонала, который будет участвовать в исследовании.
2. Приобретение материалов, необходимых для разработки проекта.
3. Разработка листовок, рекламных и образовательных материалов, инструкций по процедурам и форм отчетов о случаях (CRF).
4. Рандомизация лечения. Рандомизация лечения будет осуществляться эпидемиологом Фонда сердечно-сосудистых заболеваний Колумбии. Эта рандомизация будет выполняться блоками, чтобы сохранить одинаковый размер групп лечения, избежать длинных последовательностей одного и того же лечения и, по возможности, сбалансировать некоторую предвзятость, присущую простому процессу рандомизации. Кроме того, эта рандомизация в блоках облегчит выполнение промежуточных анализов.

Этап набора

Этот этап займет 22 месяца. В выбранных муниципалитетах медицинский персонал, работающий в больницах и медицинских центрах, пройдет обучение по вопросам заболевания и методологии исследования. Одновременно с лидерами сообщества и медицинским персоналом будет проведено целенаправленное эпидемиологическое исследование для определения географических и демографических условий с целью разработки стратегий набора возможных случаев лейшманиоза. Впоследствии субъекты, у которых проявляются активные язвы с более чем 2-недельной эволюцией, с паразитологическим подтверждением CL или без него, будут приглашены промоутерами здоровья для участия в скрининговом посещении (таблица 1).

Контрольный визит

Во время этого визита будет составлен полный клинический анамнез и получены данные об анамнезе лейшманиоза (назначенное лечение, локализация, количество поражений и т.д.). Полная медицинская оценка будет проводиться на основе общепринятых методов. Будут применяться критерии включения/исключения, и отобранные кандидаты будут проинформированы об исследовании, после чего они подпишут информированное согласие. Для субъектов с язвами продолжительностью более двух недель без паразитологического диагноза паразитолог проведет прямой тест. Если первый прямой тест отрицательный, его повторяют до трех раз; после чего, в случае отрицательного результата, будет проведена биопсия. В случае, если лейшманиоз не подтвердится, пациент будет переведен в исходный медицинский центр.

Первоначальный визит

Включенные пациенты будут случайным образом распределены в одну из двух групп. Будет взята культура в среде Novy-Nicole-McNeal (NNN) для идентификации штамма, а образец крови будет взят из локтевой вены для определения печеночных ферментов, креатинина и панкреатической амилазы. Во время этого визита будет проведена полная медицинская оценка, будет измерена язва и сделан снимок. Перед фотографированием рядом с язвой будет помещена градуированная линейка вместе с наклейкой с идентификационным кодом участника и датой посещения. Будет применен первый NOP (активный или плацебо), покрывающий поражение, и будет введена первая инъекция антимониата меглюмина (активного или плацебо). Пациенты получат информацию о том, как не повредить пластыри и как выявить и сообщить о нежелательных явлениях. Чтобы помочь пациентам в этом, они получат дневник для их регистрации. Две случайно составленные группы будут разделены следующим образом:

Группа 1: в течение 20 дней эта группа будет получать одновременно внутримышечно (в/м) меглюмина антимониат (Глюкантим® 20 мг/кг/сут с максимальной дозой 3 ампулы в сутки); и плацебо NOP.

Группа 2: В течение 20 дней эта группа будет получать одновременно плацебо меглюмина антимониата в/м (5-15 мл/день) и активный NOP.

Визиты для лечения

Пациенты будут посещать медицинский центр ежедневно в течение 20 дней, чтобы получить как NOP (плацебо или активный препарат), так и меглюмина антимониат (плацебо или активный препарат). Ежедневно будут оцениваться субъекты и их приверженность лечению, и будут собираться данные. При обнаружении какого-либо нежелательного явления пациент будет немедленно направлен к медицинскому персоналу, который проведет оценку и сообщит об этом комитету по нежелательным явлениям, который примет окончательное решение в каждом случае.

Последующие визиты

Этот этап продлится 10 месяцев. Во время последующего наблюдения пациенты будут осмотрены исследовательской группой в 4 случаях. Первый визит состоится на следующий день после окончания лечения (день 21), во время которого будут взяты новые образцы крови для биохимических определений. Второй, третий и четвертый визиты будут осуществлены на 45, 90 и 180 день соответственно. Во время этих посещений будет оцениваться процесс заживления язвы, наличие рецидивов и/или реинфекции, а также состояние здоровья участников. Эволюция язв будет зарегистрирована фотографически.

Максимальный и минимальный диаметр язвы измеряют с помощью градуированной линейки, а уплотнение — с помощью шариковой ручки. Площади язв и уплотнений рассчитываются отдельно, а затем регистрируются в ИРК. Оценка клинического ответа будет основываться на язве, показывающей наименьшее улучшение.

1. Полный клинический ответ: полная реэпителизация язвы и исчезновение уплотнения.
2. Клиническое улучшение: уменьшение площади язвы и уплотнения более чем на 50% по сравнению с последней клинической оценкой.
3. Отсутствие клинического ответа: увеличение или уменьшение площади язвы и уплотнений менее чем на 50 % по сравнению с последней клинической оценкой.

4. Терапевтическая неудача:

   1. Увеличение размера язвы более чем на 50% по сравнению с последней клинической оценкой
   2. Наличие язвы через три месяца после начала лечения.
   3. Реактивация: появление поражения по краю или в центре рубца при положительном паразитологическом диагнозе после периода полной реэпителизации.
   4. Поражение слизистых оболочек: Наличие поражений слизистых оболочек во время лечения, в конце его или при последующих визитах.
5. Реинфекция: Активация язвы в области, отличной от первоначального поражения.

Для субъектов, лечение которых будет сочтено неудачным, код будет взломан, и они будут отправлены в свой первоначальный медицинский центр для поиска другого терапевтического подхода.

Процедуры

Физическое обследование

Будет проведен полный медицинский осмотр и измерены основные показатели жизнедеятельности.

Образцы крови изъяты

Образцы крови будут взяты из локтевой вены для проведения следующих биохимических анализов:

1. Креатинин по спектрофотометрии
2. Аланинтрансаминаза (АЛТ) по данным спектрофотометрии
3. Аспартаттрансаминаза (АСТ) по данным спектрофотометрии
4. Панкреатическая амилаза по данным спектрофотометрии

Техника выборки для прямого теста CL

Прямой тест проводится для подтверждения наличия клеток с амастиготами в соскобе дермы [46,47]; образец должен быть, насколько это возможно, свободен от крови, клеточного детрита или гноя. Если у пациентов имеется несколько образований, образец необходимо брать из очага с наименьшим временем развития, наибольшей площадью уплотнения и/или наименьшим гнойным отделяемым. Если на поражении есть струп, его необходимо удалить, чтобы улучшить качество образца. Пробу можно взять с активного края или со дна язвы. Когда образец берется из активного края, необходимо провести асептику 70%-ным спиртом, а затем провести гемостаз с использованием первого и второго пальцев, чтобы убедиться, что в образце нет крови. Небольшой разрез около 3 мм в длину и глубину делают скальпелем в активном крае параллельно краю язвы. Острой стороной скальпеля делается соскоб в кожной стенке разреза для получения ткани. Извлеченный материал растягивается на два предметных стекла микроскопа. Образец сушат при комнатной температуре, затем фиксируют метанолом и окрашивают по Гимзе, Райту или Филду. Используя иммерсионное масло, образец наблюдают под микроскопом со 100-кратным увеличением, оценивают присутствие амастигот Leishmania и подтверждают их структуру (ядро, кинетопласт и клеточная мембрана). Если образец берется из центра поражения, необходимо использовать тот же гемостатический метод, удалить струп и тщательно очистить дно язвы с помощью острой стороны скальпеля, чтобы предотвратить наличие клеточного детрита и/или гнойного материала. . Эту процедуру необходимо продолжать до тех пор, пока гранулемы не будут видны на дне. По той же методике, что и при обработке образцов из активного края, проверяется наличие амастигот Leishmania.

Методика отбора культур

Образец для культуры может быть получен путем отсасывания активного края язвы или путем извлечения фрагмента ткани, который затем мацерируют в фосфатно-солевом буферном растворе (PBS) с антибиотиками (1000 МЕ кристаллического пенициллина на куб. помещают в питательную среду. В технике отсасывания используют туберкулиновый шприц с тонкой иглой (26G), содержащий 0,3 мл раствора PBS с антибиотиками. Предварительно асептику язвы 70%-ным спиртом вводят в дерму иглу и вращательными движениями мацерируют скосом иглы небольшое количество ткани в течение около минуты, после чего отсасывают в шприц. Образец помещают в асептических условиях в культуральную среду NNN и инкубируют при 26ºC в течение 4 недель [46,47]. Каждую неделю из культуральной среды извлекают каплю и помещают ее между двумя предметными стеклами для наблюдения под микроскопом. В случае, если промастиготы не обнаружены, культуры отбраковывают как отрицательные [46]. Штаммы идентифицируются по видам с использованием моноклональных антител, разработанных доктором Дайан МакМахон Пратт [48,49].

Оценка и управление нежелательными явлениями

Во время лечения и последующих посещений пациентов будут спрашивать о нежелательных явлениях. Каждое нежелательное явление классифицируется врачом как серьезное или несерьезное (таблицы 2 и 3). Серьезное нежелательное явление должно соответствовать одному или нескольким из следующих критериев:

1. Смерть
2. Угрожающие жизни (т. е. непосредственный риск смерти)
3. Стационарная госпитализация или продление существующей госпитализации
4. Стойкая или значительная инвалидность/недееспособность. Наличие серьезного нежелательного явления, которое ставит под угрозу жизнь пациента и/или требует немедленного медицинского или хирургического вмешательства, требует прекращения лечения и начала соответствующего медицинского ведения пациентов. Исследователь уведомляет Комитет по нежелательным явлениям (AEC) FCV о любом серьезном нежелательном явлении в течение 24 часов с момента получения информации о нем.

Несерьезные нежелательные явления будут классифицироваться следующим образом:

1. Легкая: пациенты знают о своих симптомах и/или признаках, но они терпимы. Они не требуют медицинского вмешательства или специального лечения.
2. Умеренная: пациенты предъявляют проблемы, которые мешают их повседневной деятельности. Они требуют медицинского вмешательства или специального лечения.
3. Тяжелая: пациенты не могут работать или заниматься своими повседневными делами. Они требуют медицинского вмешательства или специального лечения.

Возможная связь между нежелательными явлениями и тестируемым лекарством будет классифицироваться исследователем на основе его/ее клинического суждения и следующих определений:

1. Определенно связанный: событие может быть полностью объяснено введением тестируемого лекарства.
2. Вероятно, связано: событие, скорее всего, объясняется приемом тестируемого препарата, а не других препаратов, или клиническим состоянием пациента.
3. Возможно, связано: событие может быть объяснено введением тестируемого лекарства или других лекарств или клиническим состоянием пациента.
4. Не связано: событие, скорее всего, объясняется клиническим состоянием пациента или другими лекарствами, а не тестируемым.

Обо всех событиях будет сообщено в AEC, который, в зависимости от своих критериев, примет решение о продолжении или исключении пациента из исследования и, следовательно, о нарушении кода.

Несмотря на то, что проект был разработан для сведения к минимуму неотъемлемых рисков, любое нежелательное явление, связанное с исследуемыми препаратами, будет тщательно оценено AEC, а расходы, связанные с необходимым лечением, будут покрыты за счет исследования.

Этап анализа данных

Этот этап продлится 6 месяцев. После завершения ввода всех данных в CFR результаты будут проверены, а обнаруженные ошибки оценены и исправлены ответственным лицом. Информация будет введена в две разные базы данных двумя разными людьми, и записи будут сравниваться для выявления любых несоответствий. Исходный CFR будет использоваться для исправления любой ошибки в базе данных.

Для статистического анализа будет использоваться Stata 8.0. Описательный анализ будет состоять из медиан и пропорций в соответствии с характером переменных с соответствующими 95% доверительными интервалами. В качестве измерения дисперсии будет рассчитано стандартное отклонение. Распределение переменных будет изучаться с помощью критерия Шапиро-Уилка. Чтобы обнаружить какие-либо различия между группами, будет проведен Т-тест или критерий Уилкоксона в соответствии с его распределением. Категориальные переменные будут сравниваться с использованием критерия Chi2 или точного критерия Фишера. При необходимости будет выполнена модель множественной логистической регрессии или ковариационный анализ.

Когда будет собрано 35% и 70% расчетной пробы, будут проведены два промежуточных анализа с целью определения различий в эффективности и безопасности между видами лечения.

Конечные точки

В конце исследования будут оцениваться две конечные точки:

1. Успешное лечение:

   1. Полная реэпителизация через три месяца после начала лечения.
   2. Отсутствие реактивации и поражения слизистых оболочек в течение 6 мес исследования.

2. Неэффективность лечения:

   1. Неполная реэпителизация через три месяца после начала лечения.
   2. Увеличение размера язвы более чем на 50% по сравнению с последней клинической оценкой
   3. Реактивация и/или поражение слизистых оболочек в течение 6 мес исследования.

Заключительный отчет

В конце исследования результаты будут оценены и обсуждены, а окончательный отчет будет представлен COLCIENCIAS, организации, спонсирующей проект. Соответствующие результаты будут опубликованы как в национальных, так и в международных журналах, а также представлены на конгрессах и научных встречах.

ЭТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ

Это исследование будет проводиться в соответствии с Хельсинкской декларацией и колумбийским законодательством в соответствии с резолюцией 8430/93 Министерства здравоохранения. Перед включением пациентов в исследование будут объяснены цели и методология, а также получено информированное согласие. Исследование было одобрено Комитетом по этике исследований Фонда сердечно-сосудистых заболеваний Колумбии (Закон № 105 от 28 января 2005 г.). Право пациентов на конфиденциальность будет сохраняться на всех этапах исследования.

КОНКУРИРУЮЩИЕ ИНТЕРЕСЫ

Нефинансовые конкурирующие интересы

Авторы этой рукописи заявляют, что у них нет конкурирующих интересов, включая политические, личные, религиозные, идеологические, академические, интеллектуальные или любые другие конкурирующие интересы.

Финансовые конкурирующие интересы

За последние пять лет мы не получали компенсаций, гонораров, финансирования или заработной платы от какой-либо организации, которая могла бы каким-либо образом выиграть или потерять от публикации этой рукописи ни сейчас, ни в будущем. Мы не владеем какими-либо акциями или долями в организациях, которые могут каким-либо образом получить или понести финансовые убытки от публикации рукописи ни сейчас, ни в будущем. Мы не владеем и в настоящее время не подаем заявку на получение каких-либо патентов, касающихся содержания рукописи. Мы не получали компенсаций, гонораров, финансирования или заработной платы от организации, которая владеет или подала заявку на получение патента, относящегося к содержанию рукописи.