피부 리슈만편모충증의 치료에서 통제된 산화질소 방출 패치 대 메글루민 안티모니에이트

배경

피부 레슈만편모충증(CL)은 88개국에서 유행하는 세계적인 질병입니다[1] . 매년 150만 명이 CL로 고통 받고 있으며 3억 5천만 명 이상이 감염 위험에 처해 있는 것으로 추정됩니다[2-4]. 미국에서는 매년 60,000건의 새로운 CL 사례가 보고되고[5], 22개국 중 20개국과 카리브해의 2개 섬에서 풍토병입니다[2]. 현재 CL은 이라크에서 복무 중인 500명 이상의 미군에게 영향을 미쳤습니다[6]. 안데스 지역에서는 지난 20년 동안 Leishmaniasis의 발병률이 극적으로 증가했습니다. 1996년부터 1998년까지 매년 14,000건 이상에 도달합니다[7]. 콜롬비아에서는 6,500건의 사례가 보고되었습니다[8]. 콜롬비아에서 보고된 CL 사례의 증가는 이주, 삼림 벌채, 불법 조림지 증가, 무력 정치적 갈등 및 벡터의 행동 변화와 같은 요인과 관련이 있습니다. 콜롬비아에서 Leishmania의 주요 변종은 L. panamensis, L. brazilensis, L. infantum 및 L. guyanensis이며, 이들은 주로 농촌 지역에 전체 국토에 분포합니다[10]. CL은 Leishmania 속의 세포내 원생동물 기생충에 의해 발생하며[1] 현재까지 분류된 phlebotomus 및 lutzomyia sandflies 종의 작은 비율을 통해 사람에게 전염됩니다[10]. sandflies의 소화 시스템에서 이 이형 기생충은 promastigote라고 하는 세포외 편모 형태를 나타내며 숙주 혈액에서 방출되면 대식 세포에 의해 식균되어 편모를 잃고 아마스티고테로 변합니다[12]. 개, 설치류 및 디델피데는 기생충의 자연 숙주인 반면 사람은 부수적인 숙주입니다[11]. 이 동물 전염병은 주로 활동적인 연령의 남성에게 영향을 미치는 저명한 시골 개체에서 모든 사람, 특히 어린이에게 영향을 미치는 질병으로 변화하는 흥미로운 도시화 현상을 겪었습니다[8,9]. 이 질환의 특징적인 병변은 분리균주에 따라 3개월에서 1년에 걸쳐 자연 치유되는 궤양이며 편평하고 위축되고 탈색된 반흔을 남깁니다[13-15]. CL, 특히 L. brazilensis에 의해 생성된 CL은 점막피부 Leishmaniasis(MCL)로 발전할 수 있으며, 병변의 변형 특성으로 인해 예후가 더 나쁩니다[16]. 이러한 병변의 자연 치유는 재감염에 대한 부분적인 저항성을 획득할 수 있게 하며, 이는 어린이 및 젊은 성인 인구에서 관찰되는 더 높은 병원성을 설명할 수 있습니다[9]. 이전 연구에서는 어린이 집단에서 CL의 발생률이 더 높고 치료에 대한 반응이 좋지 않은 것으로 나타났습니다[17]. 콜롬비아의 역학 경계 프로그램은 CL의 가능성 있는 사례(궤양 특징 및 환자의 기원에 의해 식별됨)가 궤양에서 얻은 분리 샘플을 현미경으로 직접 검사하여 음성인 경우 상처 생검을 통해 확인하도록 요구합니다. . 일단 확인되면 임상 역학 기록을 사용하여 지역 보건 장관에게 사례를 통보해야 합니다. 역학 감시를 담당하는 이 기관은 감염원을 조사하고 영향을 받는 사람들에게 약물을 배포합니다. 현재 CL을 치료할 때 다양한 측면을 고려하고 있는데 그 중 MCL의 발생 위험, 병변의 등급, 국소화, 수, 크기, 진화 및 지속성이 가장 중요하다[18]. 60년 이상 동안 5가 안티몬 화합물인 스티보글루콘산나트륨(Pentostan®, Glaxo-Wellcome에서 생산) 및 메글루민 안티모니에이트(Glucantime®, Sanofi-Aventis에서 생산)가 이 질병에 대한 선택 치료제로 간주되었습니다[19 ]. 콜롬비아에서 이루어진 연구에서는 메글루민 안티모니에이트를 사용하여 85%의 치유율을 보고했습니다[20,21]. 이러한 약물의 효능은 높음에도 불구하고 비경구 투여와 같은 많은 단점이 있으며, 오심, 구토, 근육통 및 복통, 심장 질환, 간 아미노트랜스퍼라아제 농도 상승, 화학적 췌장염[21,22]. 또한 치료 순응도는 기간(몇 주)과 배포 제한으로 인한 가용성에 영향을 받습니다. 두 번째 라인의 치료 대안이 제안되었습니다. amphotericin B와 pentamidine은 우수한 결과를 보여왔으나 고비용, 낮은 가용성, 투여를 위해 환자를 입원시켜야 하는 필요성 및 2차 효과의 심각성으로 인해 사용이 제한되었습니다[23,24]. 지난 10년 동안 mefloquine, itraconazole, miltefosine, paromomycin, ketoconazole, allopurinol 및 dapsone과 같은 경구용 제제를 사용하여 CL에 대한 새로운 치료법이 개발되었지만 그 효과에 대한 충분한 증거를 보여주지 못했습니다[19,21,25,26 ]. CL에 대한 국소 치료제를 개발하기 위한 노력의 일환으로 파로모마이신이 다양한 제제에 사용되었습니다. 그러나 이 약물로 달성한 완치율은 위약과 비교해도 기존 치료법보다 높지 않았다[27,28]. 시험관 내 및 생체 내 여러 연구에서 산화질소(NO)가 아마스티고테 형태의 다양한 Leishmania 변종을 제거하는 데 효과적이라는 것이 입증되었습니다[29-35]. iNOS(inducible nitric oxide synthase)에 의한 L-아르기닌의 산화로 인한 NO 생성은 대식세포의 가장 중요한 방어 메커니즘 중 하나이며 [36], 리슈만편모충에 대한 두 가지 산화 방어 형태가 확인되었습니다. 감염의 첫 번째 단계에서 식균 작용 과정에 대한 반응으로 일부 promastigotes는 NADPH oxidase에 의해 촉매되는 과정인 superoxide ion의 방출로 인해 제거됩니다[29]. 이 방어 메커니즘에서 살아남은 promastigotes는 amastigotes로 진화하여 대식세포에서 IL-12의 생산을 활성화하고 Leishmania 항원의 제시를 촉진합니다. iNOS에 의해 촉매되는 NO 생성을 촉진하여 인터페론 감마(INFγ) 및 종양 괴사 인자 알파(TNFα)를 통해 기생충을 제거합니다[31-33]. 최근 연구는 CL에 감염된 대상의 대식세포에서 iNOS의 더 높은 활성을 보여주며, 이는 Leishmania에 대한 면역학적 활성에서 NO의 중요한 역할을 시사합니다[34]. L. major, L. chagasi 또는 L. donovani가 접종된 Leishmania 감염(C57BL/6)에 내성이 있는 설치류에 대한 연구에서 NG-monomethyl-L-arginine(L-NMMA)과 같은 iNOS 억제제를 적용하면 더 높은 대식세포에서 기생충의 생존율과 병독성[33,35,37,38]. Leishmania(BALB/C) 감염에 대한 유전적 감수성을 가진 쥐에 L. major를 접종한 후 iNOS의 활동이 관찰되지 않았습니다. 그러나 IL-12의 적용은 iNOS를 활성화하여 감염을 제어할 수 있었다[31]. 인간의 경우, NO 기증자를 포함하는 국소 치료제로 여러 임상 시험이 실현되었습니다[39,40]. 에콰도르에서 우리 그룹은 S-니트로소-N-아세틸페니실라민(SNAP)을 함유한 NO 생성 국소 크림을 개발 및 테스트하여 심각한 부작용에 대한 보고 없이 이러한 유형의 궤양 관리에 유익한 효과를 입증했습니다. 그럼에도 불구하고 불안정한 산화질소 방출로 인해 크림을 자주(1일 4회) 도포해야 하여 치료의 순응이 어려웠다[39]. 시리아에서 또 다른 그룹은 L. tropica의 국소 치료를 위해 살리실산과 아스코르브산으로 산성화된 질산칼륨을 사용했습니다[40]. 시험관 내에서 이 NO 생성 혼합물은 Leishmania의 amastigotes와 promastigotes를 파괴했습니다. 그러나 40명의 환자를 대상으로 한 생체 내 연구에서는 일관되지 않은 결과를 보여 피험자의 28%에서 궤양의 크기가 감소했고 치유율은 12%에 불과했습니다. 이러한 결과의 불일치는 NO를 얻기 위해 사용된 기술 때문인 것으로 생각됩니다. 아질산염의 산성화는 NO의 즉각적인 폭발을 일으키지만 그 방출은 오랜 기간 동안 유지되지 않습니다[40]. NO의 방출 제어의 어려움으로 인해 방출을 조절하기 위한 새로운 기술을 찾아야 할 필요성이 생겼습니다. 전기방사 기술로 제조된 나노섬유 고분자는 병변에 대한 약물의 지속적인 방출을 보장하기 위해 연구되었습니다. 전기방사 공정에서 고전압을 사용하여 고분자 용액의 전하를 띤 제트를 생성하고 건조 및 응고되어 건조한 고분자 섬유를 남깁니다[41]. 이 제트가 공기를 통해 이동할 때 용매는 전기적으로 편향되어 금속 스크린에 수집될 수 있는 하전된 섬유를 남기고 증발합니다[42,43]. 다양한 단면 모양과 크기를 가진 섬유는 다양한 폴리머에서 생산됩니다. 이 기술을 사용하면 여러 의약품, 효소 및 단백질의 캡슐화 또는 포획이 성공적으로 이루어졌습니다. 이전 연구에서 나노섬유 패치는 테트라사이클린 염산염의 방출 비히클로 성공적으로 사용되었습니다. 테트라사이클린의 방출은 5일 동안 일정했습니다[41;43]. 동일한 모델을 사용하여 아질산염이 이온 교환 수지(DOWEX)에 결합되어 폴리우레탄 나노섬유 층으로 전기 방사되는 다층 경피 패치가 생산되었습니다. Waterlock® 고흡수제와 폴리우레탄을 함유한 용액은 아질산염-DOWEX 층 위에 전기 방사됩니다. 폴리우레탄 용액에 포획된 아스코르브산은 세 번째 층에 전기 방사되며, 또 다른 Waterlock® 고흡수제 및 폴리우레탄 층이 네 번째이자 마지막 층입니다. 수화 시, 이 산화질소 방출 패치(NOP)는 12시간 동안 3.5μmol의 NO를 안정적으로 방출합니다[41,44,45]. 콜롬비아 산탄데르의 Landazuri에서 개발된 파일럿 연구에서 L. panamensis에 의해 생성된 68개의 궤양을 나타낸 35명의 환자를 대상으로 위약 대조 임상 시험이 수행되었습니다.NOP를 사용하여 치료받은 궤양에서 65% 개선이 관찰되었으며 위약 그룹에서는 25%만 개선되었습니다(p=0.001). 이 파일럿 연구에서 설명된 고유한 부작용은 패치를 적용한 부위의 가려움증이었습니다(미공개 데이터). CL의 광범위한 분포, 전달 형태의 변화, 약물의 가용성과 관련된 어려움을 고려하여 본 연구는 전기방사법으로 제조된 NO 공여체 경피 패치가 최소한 CL 치료를 위한 메글루민 안티모니에이트는 부작용이 적고 비용이 저렴하므로 효과적인 치료 대안이 됩니다. 본 연구에서 NOP의 효과가 입증된다면 우리나라에서 가장 중요한 공중보건 문제 중 하나에 대한 접근이 용이하고 순응도가 높은 새롭고 안전한 치료 대안이 가능해질 것입니다.

목표

일반 목표

메글루민 안티모니에이트(Glucantime®)와 비교하여 CL 치료에서 NOP의 효과 및 안전성을 평가합니다.

특정 목표

1. 보건부가 권장하는 메글루민 안티몬제 치료 계획과 비교하여 NOP를 사용하여 CL 궤양의 치유율을 평가한다.
2. NOP 적용과 관련된 부작용을 확인하고 이를 메글루민 안티모니에이트 치료에 의해 생성된 부작용과 비교합니다.
3. NOP와 메글루민 안티모니에이트 모두에서 발생할 수 있는 재범을 확인하고 비교합니다.
4. 콜롬비아에서 CL에 대한 치료적 대안을 찾기 위해 전진합니다.

설계

산화질소 방출 패치와 메글루민 안티모니에이트를 비교하는 이중 맹검, 무작위, 이중 마스크, 위약 대조 임상 시험.

표본의 크기

샘플은 80%의 검정력과 0.05%의 1종 오류를 사용하여 아크코사인 공식에 따라 계산되었습니다. meglumine antimoniate의 경우 85%, NOP의 경우 75%의 성공률을 지정하면 558명의 환자가 필요합니다. 손실률 5%로 조정한 후 모집해야 하는 총 환자 수는 620명(치료군당 환자 310명)입니다.

인구

인구는 콜롬비아의 두 지역에서 구성됩니다. 첫 번째는 막달레나 계곡과 동부 산맥 사이에 위치한 콜롬비아 산탄데르의 풍토병 지역으로 Landazuri, El Carmen, San Vicente, El Playon 및 Rionegro 시를 포함합니다. 두 번째 지역은 Chaparral, San Antonio, Libano, Falan, Palocabildo 및 Mariquita 시를 포함하는 North Tolima의 풍토병 지역입니다.

환자의 선택

포함 기준

1. 18세에서 50세 사이의 남녀
2. 진화 2주 이상의 피부 궤양
3. CL에 대한 양성 기생충 진단
4. 자발적으로 연구 참여에 동의하고 정보에 입각한 동의서에 서명한 환자.
5. 모든 방문에 정시에 참석하는 처분(초기, 치료 및 후속 조치)
6. 연구 중에 CL에 대한 다른 치료법을 사용하지 않는다는 수락

제외 기준

1. 임산부
2. 환자를 면역학적으로 손상시키는 상태 또는 질병의 존재(예: 당뇨병, 암 등) 또는 연구원의 판단에 따라 CL 과정을 변경할 수 있는 기타 모든 것.
3. 미만성 CL 또는 5개 이상의 활성 병변.
4. 점막피부 레슈만편모충증(비강, 비뇨생식기 및/또는 항문 점막 또는 입술 가장자리에서 2cm 미만에 병변이 위치해서는 안 됨).
5. 내장 레슈마니아증
6. 지난 3개월 동안 안티몬 화합물을 사용한 완전 또는 불완전 치료.
7. 간, 신장 또는 심혈관 질환의 병력이 있는 환자.
8. 연구 참여를 승인하기에 적합하지 않은 것으로 간주되는 정신적 또는 신경학적 장애가 있는 환자.

연구 개발

물류 단계

이 단계는 4개월 동안 지속되며 다음 활동을 포함합니다.

1. 연구에 참여할 직원 교육.
2. 프로젝트 개발에 필요한 자재 확보.
3. 전단지, 판촉 및 교육 자료, 절차 매뉴얼 및 사례 보고서 양식(CRF)의 정교화.
4. 치료 무작위화. 치료 무작위화는 콜롬비아 심혈관 재단의 역학자에 의해 실현될 것입니다. 이 무작위화는 치료 그룹의 크기를 유사하게 유지하고, 동일한 치료의 긴 시퀀스를 피하고, 가능한 경우 단순 무작위화 프로세스에 내재된 일부 편향의 균형을 맞추기 위해 블록 단위로 수행됩니다. 또한 이러한 블록 무작위화는 중간 분석 실행을 용이하게 합니다.

모집 단계

이 단계는 22개월이 소요됩니다. 선정된 지자체에서 병원과 보건소에서 근무하는 보건 인력은 질병 및 연구 방법론에 관한 교육을 받게 됩니다. 동시에 지역사회 지도자 및 보건 담당자와 역학 초점 연구를 수행하여 가능한 리슈만편모충증 사례를 모집하기 위한 전략을 개발할 목적으로 지리적 및 인구통계학적 조건을 식별할 것입니다. 그 후, CL의 기생충학적 확인 유무에 관계없이 2주 이상 진행된 활동성 궤양을 나타내는 피험자는 건강 프로모터가 스크리닝 방문에 참석하도록 초대할 것입니다(표 1).

스크리닝 방문

이 방문 동안 완전한 임상 병력이 정교해지고 리슈만편모충증의 전조에 대한 데이터(투여된 치료, 국소화, 병변 수 등)가 얻어질 것입니다. 보편적으로 인정되는 기술을 기반으로 완전한 의학적 평가가 실현될 것입니다. 포함/제외 기준이 적용되고 선택된 후보자에게 연구에 대한 정보를 제공한 후 정보에 입각한 동의서에 서명합니다. 기생충학적 진단 없이 2주 이상 진행된 궤양이 있는 피험자의 경우 기생충학자가 직접 테스트를 수행합니다. 첫 번째 직접 테스트가 음성이면 최대 세 번 반복됩니다. 그 후 음성 결과의 경우 생검이 수행됩니다. 레슈만편모충증이 확인되지 않은 경우 환자는 원래 보건소로 이송됩니다.

최초 방문

포함된 환자는 두 그룹 중 하나에 무작위로 배정됩니다. 변종 식별을 위해 Novy-Nicole-McNeal(NNN) 배지에서 배양하고 간 효소, 크레아티닌 및 췌장 아밀라아제 측정을 위해 전주정맥에서 혈액 샘플을 채취합니다. 이 방문 동안 완전한 의학적 평가가 수행되고 궤양이 측정되고 사진이 찍힐 것입니다. 사진을 찍기 전에 참가자의 식별 코드와 방문 날짜가 표시된 스티커와 함께 눈금이 궤양 옆에 붙습니다. 첫 번째 NOP(활성 또는 위약)를 병변에 적용하고 메글루민 안티모니에이트(활성 또는 위약)의 첫 번째 샷을 투여합니다. 환자는 패치를 손상시키지 않는 방법과 부작용을 식별하고 보고하는 방법에 대한 정보를 받게 됩니다. 환자가 그렇게 할 수 있도록 돕기 위해 등록할 수 있는 일기를 받게 됩니다. 무작위로 구성된 두 그룹은 다음과 같이 나뉩니다.

그룹 1: 20일 동안 이 그룹은 동시에 근육내(IM) 메글루민 안티모니에이트(Glucantime® 20mg/kg/일, 최대 용량은 하루 3앰플); 및 NOP 위약.

그룹 2: 20일 동안 이 그룹은 IM 메글루민 안티모니에이트 위약(5-15cc/일)과 활성 NOP를 동시에 투여받습니다.

치료 방문

환자는 20일 동안 매일 보건소를 방문하여 NOP(위약 또는 활성)와 메글루민 안티모니에이트(위약 또는 활성)를 모두 투여받습니다. 매일 피험자와 치료 준수 여부를 평가하고 데이터를 수집합니다. 부작용이 발견되면 환자는 평가를 할 의료진에게 즉시 회부되고 각 경우에 대한 최종 결정을 내리는 부작용 위원회에 보고합니다.

후속 방문

이 단계는 10개월 동안 지속됩니다. 후속 조치 동안 연구 그룹은 환자를 4번의 기회로 볼 것입니다. 첫 번째 방문은 생화학적 결정을 위해 새로운 혈액 샘플을 채취하는 치료가 끝난 다음 날(21일)에 이루어집니다. 두 번째, 세 번째 및 네 번째 방문은 각각 45일, 90일 및 180일에 실현됩니다. 이러한 방문 중에 궤양의 치유 과정, 재범 및/또는 재감염의 존재 및 참가자의 건강이 평가됩니다. 궤양의 진화는 사진으로 등록됩니다.

눈금자를 사용하여 궤양의 최대 및 최소 직경을 측정하고 볼펜 기법을 사용하여 경결을 측정합니다. 궤양 부위와 경결 부위를 따로 계산하여 CRF에 등록하게 됩니다. 임상 반응의 평가는 최소 개선을 보이는 궤양을 기준으로 합니다.

1. 완전한 임상 반응: 궤양의 완전한 재상피화 및 경결의 소실.
2. 임상적 개선: 마지막 임상 평가와 관련하여 궤양 및 경결 부위의 50% 이상 감소.
3. 임상 반응 부재: 마지막 임상 평가와 관련하여 궤양 및 경결 영역의 50% 미만 증가 또는 감소.

4. 치료 실패:

   1. 마지막 임상 평가와 관련하여 궤양 크기가 50% 이상 증가한 경우
   2. 치료 시작 3개월 후 궤양의 존재.
   3. 재활성화: 완전한 재상피화 기간 후 긍정적인 기생충학적 진단과 함께 흉터 가장자리 또는 중앙에 병변이 나타납니다.
   4. 점막의 영향: 치료 중, 치료 종료 시 또는 후속 방문 시 점막의 영향이 존재합니다.
5. 재감염: 원래 병변과 다른 영역에서 궤양의 활성화.

치료가 실패한 것으로 간주되는 피험자의 경우 코드가 깨져 다른 치료 방법을 찾기 위해 원래 의료 센터로 보내집니다.

절차

신체 검사

완전한 신체 검사가 실현되고 활력 징후가 측정됩니다.

혈액 샘플 회수

다음과 같은 생화학적 분석을 수행하기 위해 혈액 샘플을 전주정맥에서 채취합니다.

1. 분광광도법에 의한 크레아티닌
2. 분광광도계에 의한 알라닌 트랜스아미나제(ALT)
3. 분광광도계에 의한 아스파르트산 트랜스아미나제(AST)
4. 분광광도계에 의한 췌장 아밀라아제

CL 직접 테스트를 위한 샘플링 기법

진피 찰과[46,47]에서 아마스티고트를 가진 세포의 존재를 확인하기 위해 직접 테스트가 수행됩니다. 샘플은 가능한 한 혈액, 세포 찌꺼기 또는 고름이 없어야 합니다. 환자에게 여러 병변이 있는 경우, 진행 시간이 가장 짧고 경결 면적이 가장 크거나 화농성 분비물이 가장 적은 것에서 샘플을 채취해야 합니다. 병변에 딱지가 있으면 샘플의 품질을 개선하기 위해 제거해야 합니다. 샘플은 활성 가장자리 또는 궤양 바닥에서 채취할 수 있습니다. 활성 가장자리에서 검체를 채취할 때는 70%의 알코올로 무균 처리한 다음 검지에 혈액이 없는지 확인하기 위해 첫 번째 손가락과 두 번째 손가락을 사용하여 지혈을 수행해야 합니다. 약 3mm 길이와 깊이의 작은 절개는 궤양의 가장자리와 평행한 활성 가장자리에 메스로 만들어집니다. 외과용 메스의 날카로운 면으로 절개 부위의 진피벽을 긁어 조직을 채취합니다. 추출된 물질은 두 개의 현미경 슬라이드로 확장됩니다. 샘플을 실온에서 건조시킨 다음 메탄올로 고정하고 Giemsa, Wright 또는 Field로 염색합니다. 침지 오일을 사용하여 샘플을 100X 렌즈가 있는 현미경으로 관찰하고 Leishmania 아마스티고트의 존재를 평가하고 그 구조(핵, 동체 및 세포막)를 확인합니다. 병변 중앙에서 샘플을 채취하는 경우 동일한 지혈 기술을 사용해야 하며, 딱지를 제거하고 궤양의 바닥을 메스의 날카로운 면을 사용하여 잘 세척하여 세포 파편 및/또는 화농성 물질의 존재를 방지해야 합니다. . 육아종이 바닥에서 보일 때까지 이 절차를 계속해야 합니다. 활성 가장자리에서 샘플을 처리하는 데 사용된 것과 동일한 기술로 Leishmania 아마스티고트의 존재가 확인됩니다.

문화 샘플링 기술

배양을 위한 샘플은 궤양 활성 가장자리를 흡인하거나 조직 조각을 추출한 다음 인산염 완충 식염수(PBS)에 항생제(cc당 1000UI의 결정성 페니실린)를 첨가하여 침지하여 얻을 수 있습니다. 배양액에 넣습니다. 0.3cc의 항생제가 포함된 PBS 용액이 들어 있는 가는 바늘(26G)이 있는 투베르쿨린 주사기가 흡입 기술에 사용됩니다. 이전에 70% 알코올로 궤양을 무균 처리한 후 바늘을 진피에 삽입하고 회전 운동을 통해 약 1분 동안 소량의 조직을 바늘 베벨로 침범한 다음 주사기로 흡입합니다. 샘플은 NNN 배양 배지에 무균 상태로 보관되고 4주 동안 26ºC에서 배양됩니다[46,47]. 매주 한 방울을 배양 배지에서 추출하여 두 슬라이드 사이에 놓고 현미경으로 관찰합니다. promastigotes가 발견되지 않는 경우 배양은 음성으로 거부됩니다[46]. 균주는 Dr. Diane Mc Mahon Pratt[48,49]에 의해 개발된 단클론 항체를 사용하여 종별로 식별됩니다.

부작용 평가 및 관리

치료 및 후속 방문 중에 환자는 부작용에 대해 질문을 받게 됩니다. 각 부작용은 의사에 의해 심각하거나 심각하지 않은 것으로 분류됩니다(표 2 및 3). 심각한 부작용은 다음 기준 중 하나 이상을 충족해야 합니다.

1. 죽음
2. 생명을 위협하는(즉, 즉각적인 사망 위험)
3. 입원 환자 입원 또는 기존 입원의 연장
4. 지속적이거나 심각한 장애/무능 환자의 생명을 위험에 빠뜨리고/거나 즉각적인 의료 또는 수술 절차가 필요한 심각한 부작용이 있는 경우 치료를 중단하고 환자에 대한 적절한 의료 관리를 시작해야 합니다. 조사관은 중대한 이상반응을 알게 된 후 24시간 이내에 FCV의 이상반응위원회(AEC)에 알릴 것입니다.

심각하지 않은 부작용은 다음과 같이 분류됩니다.

1. 경증: 환자가 증상 및/또는 징후를 알고 있지만 견딜 수 있습니다. 의료 개입이나 특정 치료가 필요하지 않습니다.
2. 중등도: 환자는 일상 활동을 방해하는 문제를 나타냅니다. 의료 개입이나 특정 치료가 필요합니다.
3. 중증: 환자가 일을 할 수 없거나 일상 활동에 참석할 수 없습니다. 의료 개입이나 특정 치료가 필요합니다.

이상 반응과 시험 약물 사이의 가능한 관계는 조사자의 임상적 판단과 다음 정의에 따라 조사자가 분류할 것입니다.

1. 확실히 관련됨: 사건은 테스트된 약물의 투여에 의해 완전히 설명될 수 있습니다.
2. 아마도 관련된 것: 사건은 다른 약물보다는 시험된 약물의 투여 또는 환자의 임상 상태에 의해 설명될 가능성이 가장 높습니다.
3. 가능한 관련: 사건은 시험된 약물 또는 기타 약물의 투여 또는 환자의 임상 상태에 의해 설명될 수 있습니다.
4. 관련 없음: 사건은 테스트된 약물보다는 환자의 임상 상태 또는 기타 약물에 의해 설명될 가능성이 가장 높습니다.

모든 이벤트는 AEC에 보고되며, 기준에 따라 연구에서 환자의 연속성 또는 철회 및 따라서 코드 위반을 결정할 것입니다.

이 프로젝트는 내재된 위험을 최소화하도록 설계되었지만 연구 약물과 관련된 부작용은 AEC에서 신중하게 평가하고 필요한 치료로 인해 발생하는 비용은 연구에서 충당됩니다.

데이터 분석 단계

이 단계는 6개월 동안 지속됩니다. CFR에 모든 데이터 입력을 완료한 후 결과를 감사하고 발견된 오류는 담당자가 평가 및 수정합니다. 이 정보는 서로 다른 두 사람이 서로 다른 두 데이터베이스에 입력하고 불일치를 감지하기 위해 기록을 비교합니다. 원본 CFR은 데이터베이스의 오류를 수정하는 데 사용됩니다.

통계 분석을 위해 Stata 8.0이 사용됩니다. 기술 분석은 각각 95% 신뢰 구간과 함께 변수의 특성에 따라 중앙값과 비율로 구성됩니다. 분산 측정으로 표준 편차가 계산됩니다. 변수의 분포는 Shapiro-Wilk 테스트를 사용하여 연구합니다. 그룹 간의 차이를 감지하기 위해 분포에 따라 T-테스트 또는 Wilcoxon 테스트를 수행합니다. 범주형 변수는 Chi2 테스트 또는 정확한 피셔 테스트를 사용하여 비교됩니다. 필요한 경우 다중 로지스틱 회귀 모델 또는 공분산 분석이 수행됩니다.

두 가지 중간 분석은 계산된 샘플의 35%와 70%가 수집될 때 처리 사이의 유효성과 안전성의 차이를 결정하기 위해 수행됩니다.

끝점

연구가 끝날 때 두 가지 종점이 평가됩니다.

1. 성공적인 치료:

   1. 치료 시작 3개월 후 완전한 재상피화.
   2. 연구 6개월 동안 점막의 재활성화 및 손상의 부재.

2. 치료 실패:

   1. 치료 시작 3개월 후 불완전한 재상피화.
   2. 마지막 임상 평가와 관련하여 궤양 크기가 50% 이상 증가한 경우
   3. 연구 6개월 동안 점막의 재활성화 및/또는 손상.

최종 보고서

연구가 끝나면 결과를 평가 및 논의하고 프로젝트를 후원하는 기관인 COLCIENCIAS에 최종 보고서를 제출합니다. 관련 결과는 국내 및 국제 저널에 발표되고 의회 및 과학 회의에서 발표됩니다.

윤리적 측면

이 연구는 보건부의 결의안 8430/93에 따라 헬싱키 선언 및 콜롬비아 법률에 따라 수행됩니다. 연구에 환자를 등록하기 전에 목적과 방법론을 설명하고 정보에 입각한 동의를 얻습니다. 이 연구는 콜롬비아 심혈관 재단의 연구 윤리 위원회(법 # 105/2005년 1월 28일)의 승인을 받았습니다. 환자의 기밀 유지에 대한 권리는 연구의 모든 단계에서 유지됩니다.

경쟁 관심

비재무적 경쟁 이해관계

이 원고의 저자는 정치적, 개인적, 종교적, 이념적, 학문적, 지적 또는 기타 경쟁적 이해 관계를 포함하여 경쟁적 이해 관계가 없음을 선언합니다.

재정적 경쟁 이해관계

우리는 지난 5년 동안 현재 또는 미래에 이 원고의 출판으로 인해 어떤 식으로든 이익을 얻거나 잃을 수 있는 조직으로부터 환급, 수수료, 자금 또는 급여를 받은 적이 없습니다. 우리는 현재나 미래에 원고 출판으로 인해 어떤 식으로든 재정적으로 이익을 얻거나 잃을 수 있는 조직의 주식이나 주식을 보유하지 않습니다. 우리는 원고의 내용과 관련된 특허를 보유하지 않았거나 현재 출원 중입니다. 우리는 원고 내용과 관련된 특허를 보유하거나 신청한 조직으로부터 환급, 수수료, 자금 또는 급여를 받지 않았습니다.