Улучшенная диагностика перитонеального диализного перитонита с помощью калориметрии

Фон:

Перитонит до сих пор считается важнейшим осложнением перитонеального диализа (ПД), связанным с высокой смертностью, неэффективностью терапии и расходами на здравоохранение. Недавно мы продемонстрировали, что перитонит продолжает оставаться наиболее частой причиной технических неудач при ПД, в равной степени влияя на ранние и поздние неудачи; 12 из 279 пациентов умерли вследствие перитонита, связанного с БП. Диагноз перитонита обычно основывается на клинических симптомах, которые отражают уже запущенное состояние воспаления и заболевания. С момента внедрения системы посева крови для выявления бактериального роста в выделениях ПД более десяти лет назад не было достигнуто значительного прогресса в улучшении диагностики перитонита, связанного с ПД. В нашей собственной популяции пациентов с БП 36 из 219 (16%) эпизодов инфекционного перитонита были культурально-отрицательными. Обычно время обнаружения микроорганизмов составляет не менее 12 часов, а время идентификации возбудителя – более 48 часов. Быстро делящиеся клетки, такие как бактерии, выделяют тепло, которое можно измерить с помощью калориметрии. Как недавно показала наша исследовательская группа, калориметрия позволяет быстро и точно диагностировать бактериальный рост в случаях менингита и контаминированных тромбоцитов. В пилотных экспериментах мы смогли показать потенциал и возможности калориметрии для раннего и точного обнаружения микроорганизмов в жидкости для ЧД.

Гипотеза и цели:

Мы предполагаем, что калориметрия выделений ПД может значительно улучшить диагностику перитонита, связанного с ПД, за счет раннего и точного обнаружения патогенов. По сравнению с традиционными культуральными методами калориметрия может (i) иметь более короткое время до положительного результата и (ii) более высокую чувствительность без потери специфичности. Конкретные цели состоят в том, чтобы оценить, является ли калориметрия: (i) более быстрой в обнаружении микроорганизмов по сравнению с обычными культурами крови, (ii) превосходит с точки зрения чувствительности и специфичности перитонит, связанный с болезнью Паркинсона, по сравнению со стандартной системой культур крови и ( iii) является ценным инструментом для идентификации патогенов по «сигнатурам» специфических тепловых сигналов, полученных с помощью калориметрии. Первичной конечной точкой является время до положительного результата бактериального роста при калориметрии и обычных культурах крови. Вторичными конечными точками являются точность (т. чувствительность и специфичность) скорости обнаружения микроорганизмов в жидкости ПД и степени согласованности идентификации возбудителя между кривыми калориметрии и обычным микробиологическим методом.

План исследования:

После получения информированного согласия мы проспективно включим в это открытое сравнительное исследование всех пациентов в возрасте 16 лет и старше, которые выполняли ПД в университетской больнице в период с января 2009 года по декабрь 2011 года. Жидкость для ПД будет отправлена ​​на обычное скрининговое исследование (количество клеток и дифференциальный анализ) и калориметрию (стерильная пробирка MonovetteR) во время планового визита. При подозрении на перитонит ПД жидкость для ПД также инокулируют во флаконы для аэробных и анаэробных культур у постели больного в стерильных условиях, каждый флакон содержит 10 мл жидкости для ПД. Для калориметрии 1 мл жидкости для PD культивируют при 37°C в калориметрических пробирках, содержащих 2 мл триптиказо-соевого бульона (TSB). Обычные флаконы для культивирования и калориметрические пробирки инкубируют в общей сложности 6 дней, после чего посев и/или калориметрия считаются отрицательными. Медицинские записи будут проспективно выделены для демографических характеристик, клинических, рентгенографических, лабораторных и микробиологических данных с использованием стандартизированной формы истории болезни. Расчет размера выборки выполнялся отдельно для первичных и вторичных конечных точек при следующих настройках: 0,05, мощность 80%, двусторонний тест. Чтобы получить статистически значимые различия для первичной конечной точки, для исследования требуется 286 образцов. Для вторичной конечной точки с p0 = 80% (чувствительность обычных культур крови), p1 = 95% (чувствительность калориметрических культур) требуется 255 образцов. При ожидаемом уровне отсева 5% потребуется примерно 300 образцов. При ожидаемых 120-180 образцах в год необходима продолжительность исследования примерно от 2,5 до 3 лет.

Ожидаемый результат:

Мы ожидаем, что калориметрия значительно улучшит диагностику перитонита, связанного с болезнью Паркинсона. Во-первых (первичная конечная точка), мы прогнозируем более раннее обнаружение патогена с помощью калориметрии; во-вторых (вторичная конечная точка), мы ожидаем повышения чувствительности на 15% без потери специфичности (>90%). Кроме того, мы предполагаем, что наиболее важные патогены, обнаруженные в нашей популяции БП (т. е. S. aureus, коагулазонегативные стафилококки, стрептококки, энтеробактерии), могут быть идентифицированы в течение 12 часов (по сравнению с > 48 часами при использовании обычных микробиологических методов) с точностью 80%. Метод сверхчувствительной калориметрии позволяет с высокой точностью диагностировать перитонит, связанный с болезнью Паркинсона, на ранней стадии заболевания. Это будет основой для быстрой и целенаправленной антибактериальной терапии, которая может существенно повлиять на исход лечения этих пациентов.