Роль ИФА анти-мышиного PLA2R1 в мембранозной нефропатии (SOURIS)

Мембранозная нефропатия (МН) является аутоиммунным заболеванием почек и частой причиной нефротического синдрома. Около 30% больных ЗН прогрессируют до терминальной стадии болезни почек (ТХПН), а у 30% наступает спонтанная ремиссия. Рецептор фосфолипазы А2 (PLA2R1) является основным аутоантигеном при идиопатических МН. Аутоантитела против PLA2R1 обнаруживаются во время активной фазы ЗН [2,3]. Предикторами прогрессирования заболевания являются высокие титры аутоантител к PLA2R1 и уровни креатинина в сыворотке при поступлении, а также снижение почечной функции в течение первых шести месяцев наблюдения. Исследователи определили новые прогностические факторы в когорте из 41 пациента с идиопатической МН с нефротическим синдромом и анти-PLA2R1 аутоантителами на момент поступления. В течение периода наблюдения не менее 36 мес у 21 пациента развился стойкий нефротический синдром (группа А), у 20 — частичная или полная ремиссия (группа R). Сначала мы измерили перекрестную реактивность их сывороток во время презентации рекомбинантного PLA2R1 человека, кролика и мыши с помощью вестерн-блоттинга. Все пациенты проявляли реактивность в отношении PLA2R1 человека и кролика, но только у некоторых из них — в отношении PLA2R1 мыши. Эти результаты предполагают наличие различных эпитопов, которые по-разному консервативны среди ортологов PLA2R1. Затем мы настроили три параллельных ELISA с использованием рекомбинантного PLA2R1 человека, кролика и мыши. Все 41 пациент с МН показали активность в ИФА человека и кролика при поступлении, но только 32 из них (78%) в ИФА мыши.

Наконец, исследователи проанализировали связь между титрами анти-PLA2R1 при представлении в различных ИФА и последующим клиническим исходом. Средняя активность против PLA2R1 значительно различалась между группами А и R в ELISA на мышах как в одномерном, так и в многомерном анализе (p = 0,006 и p = 0,02 соответственно), но не в ELISA у человека и кролика. Анализ титров ELISA у мышей определяет порог 605 RU/мл, выше которого 100% пациентов имеют плохой прогноз, но такой порог не может быть определен в ELISA кролика и человека. Пациенты с активностью анти-мышиного PLA2R1 более 605 RU/мл показали значительно более низкую выживаемость без удвоения сывороточного креатинина или ЕСКД (p=0,002 с использованием логарифмического рангового теста), но пациенты с самым высоким терцилем активности анти-PLA2R1 у кроликов и ELISA у человека не показал значительного увеличения риска прогрессирования почечной недостаточности. Результаты показывают, что специфическое обнаружение определенных аутоантител против PLA2R1 с использованием нового иммуноферментного анализа против мышиного PLA2R1 может выявить пациентов с МН, подверженных риску развития тХПН. Цель состоит в том, чтобы подтвердить эти результаты на проспективной когорте. Мы предлагаем измерить проспективную когорту во время диагностики ЗН, если высокий титр анти-mPLA2R1 Ab (антитела против мышиного рецептора фосфолипазы A21) связан с нефротической протеинурией (более 3,5 г/г) или увеличение креатининемии более чем на 30% на 6, 12 и 18 месяце. В дополнительном исследовании будет предпринята попытка охарактеризовать нефрогенный эпитоп, сохраняющийся у человека, кролика и мыши.

Каждому пациенту с нефротическим синдромом показана биопсия почки. Для каждого пациента мы сохраняем 2 сухие пробирки, замороженные во время биопсии. Если мы подтвердим диагноз ЗН с помощью антител против PLA2R1, мы предлагаем пациенту включиться в это исследование. Его будут посещать каждый месяц в течение первых трех месяцев и каждые три месяца после этого со сбором следующих данных: кровяное давление, масса тела, креатинин, альбумин, электролиты крови, протеинурия/креатинин в образце 1, анализ Ac anti-PLA2R1 на 3 ELISA. (человек, кролик и мышь) В случае персистирующего рефрактерного нефротического синдрома через 6 месяцев или появления 30%-ного повышения уровня креатинина в сыворотке будет предложено лечение ритуксимабом (2 × 1 г в/в 15 дней). Клинический и биологический мониторинг будет продолжаться каждые 3 месяца в течение 18 месяцев.