Роль пути коагуляции в синапсе при прионных заболеваниях

Мы планируем собрать образцы спинномозговой жидкости (ЦСЖ) для анализа активности тромбина, чтобы проверить, есть ли разница в активности тромбина в ЦСЖ у пациентов с БКЯ (болезнь Крейтцфельдта-Якоба) и без БКЯ. Образцы спинномозговой жидкости будут получены из двух источников 1. Пациенты с семейной или спорадической БКЯ и контрольные пациенты с другими нейродегенеративными заболеваниями (например, SDAT**, NPH), которые будут оцениваться в Медицинском центре Шиба 2. От нашей сотрудничающей группы проф. CJD, а также идеальный контроль с другими дегенеративными заболеваниями головного мозга.

В исследовании 2 раздела:

1. Проспективная часть, в которой мы планируем набрать 25 пациентов с БКЯ и 25 пациентов с другими типами деменции из Медицинского центра Шиба (SMC). Перед включением в исследование старший невролог проведет беседу с пациентом и убедится, что он полностью понимает цели исследования и что он в состоянии подписать форму информированного согласия (пациенты с тяжелой деменцией, которые не смогут адекватно рассмотреть вопрос об участии). в исследовании будут исключены).

   Когнитивные способности будут оцениваться с использованием шкалы Mini-Metal Status Examination и Frontal Assessment Battery.

   Для этого исследования не будут специально собираться никакие клинические данные, кроме когнитивной оценки и тех, которые необходимы для клинической работы.

2. Ретроспективная часть, в которой образцы спинномозговой жидкости от пациентов с CJD и пациентов с другим типом деменции будут отправлены нам нашими сотрудниками в Германии и будут проанализированы на активность тромбина. Мы планируем привлечь к этой части исследования 100-200 образцов ЦСЖ пациентов с БКЯ и такое же количество образцов контрольной группы того же возраста.

Тромбиновую активность (для образцов из обеих частей исследования) будут анализировать следующим образом: Образец ЦСЖ помещают в черную 96-луночную чашку (по 10 на лунку). Активность тромбина будет измеряться с помощью флуорометрического анализа, количественно определяющего расщепление синтетического пептидного субстрата Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC*** (I-1560, Bachem, Швейцария, 13-молярная конечная концентрация). Измерения будут выполняться устройством для считывания микропланшетов Infinite 2000 (Tecan, Infinite 200, Швейцария) с фильтрами возбуждения и эмиссии 360±35 и 460±35 нм соответственно. Тестирование ЦСЖ на активность тромбина будет проводиться в лаборатории профессора Чепмена в Шибе. Эта лаборатория активно занимается исследованиями роли тромбина и PAR-1 в заболеваниях нервной системы и полностью оборудована для проведения экспериментов по биохимическим и белковым уровням.

Анализ имеет потенциал для коммерциализации в качестве диагностического теста для CJD. Кроме того, существует потенциал для разработки терапевтических средств, нацеленных на чрезмерную активацию тромбина.

**SDAT = старческое слабоумие альцгеймеровского типа.

***AMC= аминометилкумарин