Die Rolle des Gerinnungswegs an der Synapse bei Prionenerkrankungen

Wir planen, Proben der Zerebrospinalflüssigkeit (CSF) für den Thrombinaktivitätstest zu sammeln, um zu testen, ob es einen Unterschied in der Thrombinaktivität im Liquor zwischen CJD- (Creutzfeldt-Jakob-Krankheit) und Nicht-CJD-Patienten gibt. Liquorproben werden aus zwei Quellen erhalten 1. Patienten mit familiärer oder sporadischer CJK und Kontrollpatienten mit anderen neurodegenerativen Erkrankungen (z. SDAT**, NPH), die im Sheba Medical Center 2 ausgewertet werden. Von unserer Kooperationsgruppe von Prof. Zerr im Deutschen Prionen-Überweisungszentrum an der Universität Göttingen, das über eine Sammlung von Tausenden von CSF-Proben von Patienten mit familiärer und sporadischer Erkrankung verfügt CJD sowie ideale Kontrollen mit anderen degenerativen Hirnerkrankungen.

Die Studie hat 2 Abschnitte:

1. Prospektiver Teil, in dem wir planen, 25 Patienten mit CJD und 25 Patienten mit anderen Arten von Demenz vom Sheba Medical Center (SMC) zu rekrutieren. Vor der Aufnahme in die Studie wird ein leitender Neurologe den Patienten befragen und überprüfen, ob er die Ziele der Studie vollständig versteht und geistig qualifiziert ist, die Einwilligungserklärung zu unterzeichnen (schwer demente Patienten, die die Teilnahme nicht angemessen in Betracht ziehen können in der Studie ausgeschlossen).

   Die kognitive Leistung wird anhand der Waagen Mini-Mental Status Examination und Frontal Assessment Battery bewertet.

   Für diese Studie werden keine anderen klinischen Daten als die kognitive Bewertung und die für die klinische Aufarbeitung erforderlichen Daten erhoben.

2. Retrospektiver Teil, in dem Liquorproben von CJD-Patienten und Patienten mit anderen Arten von Demenz von unseren Mitarbeitern in Deutschland an uns versandt und auf Thrombin-Aktivität untersucht werden. Wir planen, für diesen Teil der Studie 100-200 CJK-Patienten-CSF-Proben und eine gleiche Anzahl von Proben von altersangepassten Kontrollen zu rekrutieren.

Die Thrombinaktivität (für Proben aus beiden Teilen der Studie) wird wie folgt getestet: Die CSF-Probe wird in eine schwarze Schale mit 96 Vertiefungen (10 pro Vertiefung) gegeben. Die Thrombinaktivität wird durch einen fluorometrischen Assay gemessen, der die Spaltung des synthetischen Peptidsubstrats Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC*** (I-1560, Bachem, Schweiz, 13 molare Endkonzentration) quantifiziert. Die Messungen werden mit dem Mikroplattenlesegerät Infinite 2000 (Tecan, infinite 200, Schweiz) mit Anregungs- und Emissionsfiltern von 360 ± 35 bzw. 460 ± 35 nm durchgeführt. CSF-Tests auf Thrombinaktivität werden im Labor von Professor Chapman in Sheba durchgeführt. Dieses Labor ist aktiv an der Erforschung der Rolle von Thrombin und PAR-1 bei Erkrankungen des Nervensystems beteiligt und ist vollständig ausgestattet, um die biochemischen Experimente und Experimente auf Proteinebene durchzuführen.

Der Assay hat das Potenzial zur Kommerzialisierung als diagnostischer Test für CJD. Darüber hinaus besteht das Potenzial, Therapeutika zu entwickeln, die auf eine übermäßige Thrombinaktivierung abzielen.

**SDAT=senile Demenz vom Alzheimer-Typ

***AMC= Aminomethylcumarin