Koagulationsvägens roll vid synapsen vid prionsjukdomar

Vi planerar att samla in cerebrospinalvätska (CSF) prover för trombinaktivitetsanalys för att testa om det finns en skillnad i trombinaktivitet i CSF mellan CJD (Creutzfeldt-Jakobs sjukdom) och icke-CJD patienter. CSF-prover kommer att erhållas från två källor 1. Patienter med familjär eller sporadisk CJD och kontrollpatienter med andra neurodegenerativa störningar (t. SDAT**, NPH) som kommer att utvärderas i Sheba Medical Center 2. Från vår samarbetsgrupp med Prof. Zerr i det tyska Prion Referral Center vid universitetet i Göttingen som har en samling av tusentals CSF-prover från patienter med familjär och sporadiska CJD samt idealiska kontroller med andra degenerativa hjärnsjukdomar.

Studien har 2 avsnitt:

1. Prospektiv del där vi planerar att rekrytera 25 patienter med CJD och 25 patienter med andra typer av demens från Sheba Medical Center (SMC). Innan inkluderingen i studien kommer en senior neurolog att intervjua patienten och verifiera att han till fullo förstår syftet med studien och att han är mentalt kvalificerad att underteckna formuläret för informerat samtycke (svårt dementa patienter som inte kommer att kunna överväga deltagandet på ett adekvat sätt i studien kommer att exkluderas).

   Kognitiv prestation kommer att utvärderas med hjälp av Mini-mental Status Examination och Frontal Assessment Batteriskalor.

   Inga andra kliniska data än den kognitiva bedömningen och de som behövs för det kliniska arbetet kommer att samlas in speciellt för denna studie.

2. Retrospektiv del där CSF-prover från CJD-patienter och patienter med annan typ av demens kommer att skickas till oss från våra samarbetspartners i Tyskland och kommer att analyseras för trombinaktivitet. Vi planerar att rekrytera till denna del av studien 100-200 CJD-patient-CSF-prover och samma antal prover från åldersmatchade kontroller.

Trombinaktivitet (för prover från båda delarna av studien) kommer att analyseras enligt följande: CSF-prov kommer att placeras i en svart skål med 96 brunnar (10 per brunn). Trombinaktivitet kommer att mätas med en fluorometrisk analys, som kvantifierar klyvningen av det syntetiska peptidsubstratet Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC*** (I-1560, Bachem, Schweiz, 13 molar slutkoncentration). Mätningar kommer att utföras av mikroplattläsaren Infinite 2000 (Tecan, infinite 200, Schweiz) med excitations- och emissionsfilter på 360±35 respektive 460±35 nm. CSF-testning för trombinaktivitet kommer att utföras i professor Chapmans laboratorium i Sheba. Detta laboratorium är aktivt engagerat i forskning om rollen av trombin och PAR-1 i sjukdomar i nervsystemet och är fullt utrustat för att utföra experiment med biokemiska och proteinnivåer.

Analysen har potential för kommersialisering som ett diagnostiskt test för CJD. Dessutom finns det potential att utveckla terapeutiska medel som är inriktade på överdriven trombinaktivering.

**SDAT=Senil demens av Alzheimertyp

***AMC= Aminometylkumarin