Le rôle de la voie de coagulation au niveau de la synapse dans les maladies à prions

Nous prévoyons de collecter des échantillons de liquide céphalo-rachidien (LCR) pour le dosage de l'activité de la thrombine afin de tester s'il existe une différence d'activité de la thrombine dans le LCR entre les patients atteints de MCJ (maladie de Creutzfeldt-Jakob) et les patients non atteints de MCJ. Les échantillons de LCR seront obtenus à partir de deux sources 1. Patients atteints de MCJ familiale ou sporadique et patients témoins atteints d'autres troubles neurodégénératifs (par ex. SDAT**, NPH) qui seront évalués au Sheba Medical Center 2. De notre groupe collaborateur du Prof. Zerr au Centre allemand de référence sur les prions de l'Université de Göttingen, qui possède une collection de milliers d'échantillons de LCR provenant de patients atteints d'affections familiales et sporadiques. MCJ ainsi que des contrôles idéaux avec d'autres maladies cérébrales dégénératives.

L'étude comporte 2 volets :

1. Partie prospective dans laquelle nous prévoyons de recruter 25 patients atteints de MCJ et 25 patients atteints d'autres types de démence du Sheba Medical Center (SMC). Avant l'inclusion dans l'étude, un neurologue senior interrogera le patient et vérifiera qu'il comprend parfaitement les objectifs de l'étude et qu'il est mentalement qualifié pour signer le formulaire de consentement éclairé (patients gravement déments qui ne seront pas en mesure d'envisager adéquatement la participation dans l'étude seront exclus).

   Les performances cognitives seront évaluées à l'aide des échelles du mini-examen de l'état mental et de la batterie d'évaluation frontale.

   Aucune donnée clinique autre que le bilan cognitif et celles nécessaires au bilan clinique ne sera spécialement collectée pour cette étude.

2. Partie rétrospective dans laquelle des échantillons de LCR de patients atteints de MCJ et de patients atteints d'un autre type de démence nous seront expédiés par nos collaborateurs en Allemagne et seront dosés pour l'activité de la thrombine. Nous prévoyons de recruter pour cette partie de l'étude 100 à 200 échantillons de LCR de patients atteints de MCJ et un même nombre d'échantillons provenant de témoins appariés selon l'âge.

L'activité de la thrombine (pour les échantillons des deux parties de l'étude) sera dosée comme suit : L'échantillon de LCR sera placé dans une boîte noire à 96 puits (10 par puits). L'activité de la thrombine sera mesurée par un dosage fluorométrique, quantifiant le clivage du substrat peptidique synthétique Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC*** (I-1560, Bachem, Suisse, concentration finale 13 molaires). Les mesures seront effectuées par le lecteur de microplaques Infinite 2000 (Tecan, Infinity 200, Suisse) avec des filtres d'excitation et d'émission de 360 ​​± 35 et 460 ± 35 nm, respectivement. Les tests de LCR pour l'activité de la thrombine seront effectués dans le laboratoire du professeur Chapman à Sheba. Ce laboratoire est activement engagé dans la recherche sur le rôle de la thrombine et du PAR-1 dans les maladies du système nerveux et est entièrement équipé pour effectuer les expériences sur les niveaux biochimiques et protéiques.

Le test a le potentiel d'être commercialisé comme test de diagnostic de la MCJ. De plus, il est possible de développer des agents thérapeutiques ciblant l'activation excessive de la thrombine.

**SDAT = démence sénile de type Alzheimer

***AMC= Amino Méthyl Coumarine