Rollen til koagulasjonsveien ved synapsen ved prionsykdommer

Vi planlegger å samle prøver av cerebrospinalvæske (CSF) for trombinaktivitetsanalyse for å teste om det er forskjell i trombinaktivitet i CSF mellom CJD (Creutzfeldt-Jakobs sykdom) og ikke-CJD-pasienter. CSF-prøver vil bli hentet fra to kilder 1. Pasienter med familiær eller sporadisk CJD og kontrollpasienter med andre nevrodegenerative lidelser (f. SDAT**, NPH) som vil bli evaluert i Sheba Medical Center 2. Fra vår samarbeidsgruppe av prof. Zerr i det tyske Prion Referral Center ved Universitetet i Göttingen som har en samling av tusenvis av CSF-prøver fra pasienter med familiær og sporadisk CJD samt ideelle kontroller med andre degenerative hjernesykdommer.

Studien har 2 seksjoner:

1. Prospektiv del der vi planlegger å rekruttere 25 pasienter med CJD og 25 pasienter med andre typer demens fra Sheba Medical Center (SMC). Før inkludering i studien vil en seniornevrolog intervjue pasienten og verifisere at han fullt ut forstår målene med studien og at han er mentalt kvalifisert til å signere skjemaet for informert samtykke (alvorlig demente pasienter som ikke vil være i stand til å vurdere deltakelsen tilstrekkelig. i studien vil bli ekskludert).

   Kognitiv ytelse vil bli evaluert ved hjelp av mini-mental statusundersøkelse og frontal vurdering batteriskalaer.

   Ingen andre kliniske data enn den kognitive vurderingen og de som er nødvendige for det kliniske arbeidet vil bli samlet inn spesielt for denne studien.

2. Retrospektiv del der CSF-prøver fra CJD-pasienter og pasienter med annen type demens vil bli sendt til oss fra våre samarbeidspartnere i Tyskland og vil bli analysert for trombinaktivitet. Vi planlegger å rekruttere til denne delen av studien 100-200 CJD-pasient-CSF-prøver og samme antall prøver fra alderstilpassede kontroller.

Trombinaktivitet (for prøver fra begge deler av studien) vil bli analysert som følger: CSF-prøve vil bli plassert i en svart 96-brønns skål (10 per brønn). Trombinaktivitet vil bli målt ved en fluorometrisk analyse, som kvantifiserer spaltningen av det syntetiske peptidsubstratet Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC*** (I-1560, Bachem, Sveits, 13 molar sluttkonsentrasjon). Målinger vil bli utført av Infinite 2000 mikroplateleser (Tecan, infinite 200, Sveits) med eksitasjons- og emisjonsfiltre på henholdsvis 360±35 og 460±35 nm. CSF-testing for trombinaktivitet vil bli utført i professor Chapmans laboratorium i Sheba. Dette laboratoriet er aktivt engasjert i forskning på rollen til trombin og PAR-1 i sykdommer i nervesystemet og er fullt utstyrt for å utføre biokjemiske eksperimenter og proteinnivåer.

Analysen har potensial for kommersialisering som en diagnostisk test for CJD. I tillegg er det potensial for å utvikle terapeutiske midler rettet mot overdreven trombinaktivering.

**SDAT=Senil demens av Alzheimer-type

***AMC= Amino Metyl Kumarin