Role koagulační dráhy v synapsi u prionových chorob

Plánujeme odběr vzorků mozkomíšního moku (CSF) pro stanovení aktivity trombinu, abychom otestovali, zda existuje rozdíl v aktivitě trombinu v CSF mezi CJD (Creutzfeldt-Jakobova nemoc) a pacienty bez CJN. Vzorky CSF budou získány ze dvou zdrojů 1. Pacienti s familiární nebo sporadickou CJN a kontrolní pacienti s jinými neurodegenerativními poruchami (např. SDAT**, NPH), která bude vyhodnocena v Sheba Medical Center 2. Od naší spolupracující skupiny Prof. Zerra v německém Prion Referral Center na Univerzitě v Gottingenu, které má sbírku tisíců vzorků CSF od pacientů s familiární a sporadickou CJD stejně jako ideální kontroly s jiným degenerativním onemocněním mozku.

Studie má 2 sekce:

1. Prospektivní část, ve které plánujeme nábor 25 pacientů s CJN a 25 pacientů s jinými typy demence ze Sheba Medical Center (SMC). Před zařazením do studie senior neurolog provede rozhovor s pacientem a ověří, že plně rozumí cílům studie a je mentálně způsobilý podepsat informovaný souhlas (pacienti s těžkou demenci, kteří nebudou schopni adekvátně zvážit účast ve studii budou vyloučeny).

   Kognitivní výkon bude hodnocen pomocí vah Mini-mental Status Examination a Frontal Assessment Battery.

   Pro tuto studii nebudou shromažďována žádná jiná klinická data než kognitivní hodnocení a data potřebná pro klinickou práci.

2. Retrospektivní část, ve které nám budou zasílány vzorky CSF od pacientů s CJN a pacientů s jiným typem demence od našich spolupracovníků v Německu a budou testovány na aktivitu trombinu. Plánujeme přijmout do této části studie 100–200 vzorků mozkomíšního moku pacientů s CJD a stejný počet vzorků od věkově odpovídajících kontrol.

Trombinová aktivita (pro vzorky z obou částí studie) bude testována následovně: Vzorek CSF bude umístěn do černé 96jamkové misky (10 na jamku). Aktivita trombinu bude měřena fluorometrickým testem, kvantifikujícím štěpení syntetického peptidového substrátu Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC*** (1-1560, Bachem, Švýcarsko, 13 molární konečná koncentrace). Měření bude prováděno čtečkou mikrodestiček Infinite 2000 (Tecan, infinite 200, Švýcarsko) s excitačními a emisními filtry 360±35 a 460±35 nm. Testování CSF na aktivitu trombinu bude provedeno v laboratoři profesora Chapmana v Shebě. Tato laboratoř se aktivně zabývá výzkumem role trombinu a PAR-1 při onemocněních nervového systému a je plně vybavena pro provádění biochemických experimentů a experimentů na úrovni proteinů.

Test má potenciál pro komercializaci jako diagnostický test na CJD. Kromě toho existuje potenciál vyvinout terapeutická činidla zaměřená na nadměrnou aktivaci trombinu.

**SDAT=Senilní demence Alzheimerova typu

***AMC= Aminomethyl kumarin