De rol van de coagulatieroute bij de synaps bij prionziekten

We zijn van plan monsters van cerebrospinale vloeistof (CSF) te verzamelen voor een trombineactiviteitstest om te testen of er een verschil is in trombineactiviteit in het CSF tussen CJD (ziekte van Creutzfeldt-Jakob) en niet-CJD-patiënten. CSF-monsters zullen worden verkregen uit twee bronnen 1. Patiënten met familiaire of sporadische CJD en controlepatiënten met andere neurodegeneratieve aandoeningen (bijv. SDAT**, NPH) die zal worden geëvalueerd in Sheba Medical Center 2. Van onze samenwerkende groep van prof. Zerr in het Duitse Prion Referral Center aan de Universiteit van Göttingen, dat een verzameling heeft van duizenden CSF-monsters van patiënten met familiale en sporadische CJD evenals ideale controles met andere degeneratieve hersenziekte.

De studie bestaat uit 2 delen:

1. Prospectief deel waarin we van plan zijn om 25 patiënten met CJD en 25 patiënten met andere vormen van dementie te werven bij Sheba Medical Center (SMC). Voorafgaand aan opname in de studie zal een senior neuroloog de patiënt interviewen en verifiëren dat hij de doelstellingen van de studie volledig begrijpt en dat hij mentaal gekwalificeerd is om het geïnformeerde toestemmingsformulier te ondertekenen (ernstig dementerende patiënten die niet in staat zullen zijn om de deelname adequaat te overwegen). in de studie wordt uitgesloten).

   Cognitieve prestaties worden geëvalueerd met behulp van de Mini-mental Status Examination en Frontal Assessment Battery-schalen.

   Er zullen geen andere klinische gegevens worden verzameld dan de cognitieve beoordeling en de gegevens die nodig zijn voor het klinische onderzoek.

2. Retrospectief deel waarin CSF-monsters van CJD-patiënten en patiënten met andere vormen van dementie naar ons worden verzonden vanuit onze medewerkers in Duitsland en worden getest op trombineactiviteit. We zijn van plan om voor dit deel van het onderzoek 100-200 CSF-monsters van CJD-patiënten te rekruteren en eenzelfde aantal monsters van leeftijdsgematchte controles.

Trombine-activiteit (voor monsters uit beide delen van het onderzoek) wordt als volgt getest: CSF-monster wordt in een zwarte schaal met 96 putjes geplaatst (10 per putje). Trombine-activiteit zal worden gemeten met een fluorometrische assay, waarbij de splitsing van het synthetische peptidesubstraat Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC*** (I-1560, Bachem, Zwitserland, 13 molaire eindconcentratie) wordt gekwantificeerd. Metingen zullen worden uitgevoerd door de Infinite 2000 microplaatlezer (Tecan, infinite 200, Zwitserland) met excitatie- en emissiefilters van respectievelijk 360 ± 35 en 460 ± 35 nm. CSF-testen op trombine-activiteit zullen worden uitgevoerd in het laboratorium van professor Chapman in Sheba. Dit laboratorium houdt zich actief bezig met onderzoek naar de rol van trombine en PAR-1 bij ziekten van het zenuwstelsel en is volledig uitgerust om biochemische en eiwitgehalte-experimenten uit te voeren.

De test heeft het potentieel om op de markt te worden gebracht als een diagnostische test voor CJD. Bovendien is er het potentieel om therapeutische middelen te ontwikkelen die gericht zijn op overmatige activatie van trombine.

**SDAT=seniele dementie van het type Alzheimer

***AMC= Amino Methyl Coumarine