Il ruolo della via della coagulazione alla sinapsi nelle malattie da prioni

Abbiamo in programma di raccogliere campioni di liquido cerebrospinale (CSF) per il test dell'attività della trombina al fine di verificare se vi è una differenza nell'attività della trombina nel CSF tra pazienti CJD (malattia di Creutzfeldt-Jakob) e non-CJD. I campioni di CSF saranno ottenuti da due fonti 1. Pazienti con CJD familiare o sporadica e pazienti di controllo con altri disturbi neurodegenerativi (ad es. SDAT**, NPH) che saranno valutati presso lo Sheba Medical Center 2. Dal nostro gruppo di collaborazione del Prof. Zerr presso il German Prion Referral Center dell'Università di Gottinga, che dispone di una raccolta di migliaia di campioni di CSF da pazienti con malattia familiare e sporadica CJD così come i controlli ideali con altre malattie degenerative del cervello.

Lo studio si compone di 2 sezioni:

1. Parte prospettica in cui prevediamo di reclutare 25 pazienti con CJD e 25 pazienti con altri tipi di demenza dallo Sheba Medical Center (SMC). Prima dell'inclusione nello studio un neurologo senior intervisterà il paziente e verificherà che comprenda appieno gli obiettivi dello studio e che sia mentalmente qualificato per firmare il modulo di consenso informato (pazienti gravemente dementi che non saranno in grado di considerare adeguatamente la partecipazione nello studio saranno esclusi).

   Le prestazioni cognitive saranno valutate utilizzando le scale Mini-mental Status Examination e Frontal Assessment Battery.

   Nessun dato clinico diverso dalla valutazione cognitiva e da quelli necessari per il lavoro clinico sarà raccolto appositamente per questo studio.

2. Parte retrospettiva in cui i campioni di CSF di pazienti CJD e pazienti con altri tipi di demenza ci verranno spediti dai nostri collaboratori in Germania e verranno analizzati per l'attività della trombina. Abbiamo in programma di reclutare per questa parte dello studio 100-200 campioni di CSF di pazienti affetti da CJD e lo stesso numero di campioni da controlli di pari età.

L'attività della trombina (per i campioni di entrambe le parti dello studio) sarà analizzata come segue: il campione di CSF sarà posto in una piastra nera da 96 pozzetti (10 per pozzetto). L'attività della trombina sarà misurata mediante un saggio fluorometrico, quantificando la scissione del substrato peptidico sintetico Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC*** (I-1560, Bachem, Svizzera, concentrazione finale 13 molare). Le misure saranno eseguite dal lettore di micropiastre Infinite 2000 (Tecan, infinite 200, Switzerland) con filtri di eccitazione ed emissione rispettivamente di 360±35 e 460±35 nm. Il test del CSF per l'attività della trombina sarà condotto nel laboratorio del professor Chapman a Sheba. Questo laboratorio è attivamente impegnato nella ricerca sul ruolo della trombina e del PAR-1 nelle malattie del sistema nervoso ed è completamente attrezzato per eseguire gli esperimenti sui livelli biochimici e proteici.

Il test ha il potenziale per la commercializzazione come test diagnostico per CJD. Inoltre, esiste la possibilità di sviluppare agenti terapeutici mirati all'eccessiva attivazione della trombina.

**SDAT=Demenza senile di tipo Alzheimer

***AMC= Amminometil cumarina