Koagulationsvejens rolle ved synapsen ved prionsygdomme

Vi planlægger at indsamle cerebrospinalvæske (CSF) prøver til thrombinaktivitetsanalyse for at teste, om der er forskel i thrombinaktivitet i CSF mellem CJD (Creutzfeldt-Jakobs sygdom) og ikke-CJD patienter. CSF-prøver vil blive indhentet fra to kilder 1. Patienter med familiær eller sporadisk CJD og kontrolpatienter med andre neurodegenerative lidelser (f. SDAT**, NPH), der vil blive evalueret i Sheba Medical Center 2. Fra vores samarbejdsgruppe af prof. Zerr i det tyske Prion-henvisningscenter ved universitetet i Göttingen, som har en samling af tusindvis af CSF-prøver fra patienter med familiære og sporadiske CJD samt ideelle kontroller med andre degenerative hjernesygdomme.

Undersøgelsen har 2 afsnit:

1. Prospektiv del, hvor vi planlægger at rekruttere 25 patienter med CJD og 25 patienter med andre typer demens fra Sheba Medical Center (SMC). Inden inklusion i undersøgelsen vil en seniorneurolog interviewe patienten og bekræfte, at han fuldt ud forstår formålet med undersøgelsen, og at han er mentalt kvalificeret til at underskrive den informerede samtykkeerklæring (svært demente patienter, som ikke vil være i stand til tilstrækkeligt at overveje deltagelsen i undersøgelsen vil blive udelukket).

   Kognitiv ydeevne vil blive evalueret ved hjælp af mini-mental status undersøgelse og frontal vurdering batteri skalaer.

   Der vil ikke blive indsamlet andre kliniske data udover den kognitive vurdering og dem, der er nødvendige for det kliniske arbejde, til denne undersøgelse.

2. Retrospektiv del, hvor CSF-prøver fra CJD-patienter og patienter med anden type demens vil blive sendt til os fra vores samarbejdspartnere i Tyskland og vil blive analyseret for Thrombin-aktivitet. Vi planlægger at rekruttere til denne del af undersøgelsen 100-200 CJD-patient-CSF-prøver og et samme antal prøver fra aldersmatchede kontroller.

Thrombinaktivitet (for prøver fra begge dele af undersøgelsen) vil blive analyseret som følger: CSF-prøve vil blive anbragt i en sort skål med 96 brønde (10 pr. brønd). Thrombinaktivitet vil blive målt ved et fluorometrisk assay, der kvantificerer spaltningen af ​​det syntetiske peptidsubstrat Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC*** (I-1560, Bachem, Schweiz, 13 molær slutkoncentration). Målinger vil blive udført af Infinite 2000 mikropladelæseren (Tecan, infinite 200, Schweiz) med excitations- og emissionsfiltre på henholdsvis 360±35 og 460±35 nm. CSF-testning for thrombinaktivitet vil blive udført i professor Chapmans laboratorium i Sheba. Dette laboratorium er aktivt engageret i forskning i rollen af ​​thrombin og PAR-1 i sygdomme i nervesystemet og er fuldt udstyret til at udføre de biokemiske eksperimenter og proteinniveauer.

Assayet har potentiale for kommercialisering som en diagnostisk test for CJD. Derudover er der potentiale for at udvikle terapeutiske midler rettet mod overdreven thrombinaktivering.

**SDAT=Senil demens af Alzheimer-typen

***AMC= Amino Methyl Coumarin