Hyytymisreitin rooli synapsissa prionisairauksissa

Aiomme kerätä aivo-selkäydinnestenäytteitä trombiiniaktiivisuusmääritystä varten testataksemme, onko aivo-selkäydinnesteen trombiiniaktiivisuudessa eroa CJD-potilaiden (Creutzfeldt-Jakobin tauti) ja ei-CJD-potilaiden välillä. CSF-näytteet saadaan kahdesta lähteestä 1. Potilaat, joilla on familiaalinen tai satunnainen CJD ja vertailupotilaat, joilla on muita hermostoa rappeuttavia sairauksia (esim. SDAT**, NPH), joka arvioidaan Sheba Medical Centerissä 2. Professori Zerrin yhteistyöryhmästämme Gottingenin yliopiston saksalaisesta prionilähetyskeskuksesta, jolla on tuhansia aivo-selkäydinnesteen näytteitä familiaalisista ja satunnaisista potilaista. CJD sekä ihanteelliset kontrollit muiden rappeuttavien aivosairauksien kanssa.

Tutkimuksessa on 2 osaa:

1. Tuleva osa, johon aiomme rekrytoida 25 CJD-potilasta ja 25 muuntyyppistä dementiapotilasta Sheba Medical Centeristä (SMC). Ennen tutkimukseen ottamista vanhempi neurologi haastattelee potilasta ja varmistaa, että hän ymmärtää täysin tutkimuksen tavoitteet ja että hän on henkisesti pätevä allekirjoittamaan tietoisen suostumuslomakkeen (vakavasti dementoituneet potilaat, jotka eivät pysty riittävästi harkitsemaan osallistumista tutkimuksessa jätetään pois).

   Kognitiivinen suorituskyky arvioidaan käyttämällä Mini-mental Status Examination- ja Frontal Assessment Battery -asteikkoja.

   Mitään muuta kliinistä dataa kuin kognitiivista arviointia ja kliiniseen selvitykseen tarvittavaa tietoa ei kerätä erityisesti tätä tutkimusta varten.

2. Retrospektiivinen osa, jossa CJD-potilaiden ja muuntyyppisten dementiapotilaiden CSF-näytteet lähetetään meille saksalaisilta yhteistyökumppaneiltamme ja niistä määritetään trombiiniaktiivisuus. Aiomme rekrytoida tähän tutkimuksen osaan 100–200 CJD-potilaan CSF-näytettä ja saman määrän näytteitä ikäsovitetuista kontrolleista.

Trombiiniaktiivisuus (tutkimuksen molemmista osista peräisin oleville näytteille) määritetään seuraavasti: CSF-näyte laitetaan mustaan ​​96-kuoppaiseen maljaan (10 kuoppaa kohti). Trombiiniaktiivisuus mitataan fluorometrisellä määrityksellä, joka kvantifioi synteettisen peptidisubstraatin Boc-Asp(OBzl)-Pro-Arg-AMC*** (I-1560, Bachem, Sveitsi, 13 molaarinen lopullinen pitoisuus) pilkkoutumisen. Mittaukset suoritetaan Infinite 2000 -mikrolevylukijalla (Tecan, infinite 200, Sveitsi), jonka viritys- ja emissiosuodattimet ovat vastaavasti 360±35 ja 460±35 nm. Trombiiniaktiivisuuden CSF-testit suoritetaan professori Chapmanin laboratoriossa Shebassa. Tämä laboratorio tutkii aktiivisesti trombiinin ja PAR-1:n roolia hermoston sairauksissa ja on täysin varustettu biokemiallisten ja proteiinitasojen kokeiden suorittamiseen.

Määrityksellä on potentiaalia kaupallistaa CJD:n diagnostisena testinä. Lisäksi on mahdollista kehittää terapeuttisia aineita, jotka kohdistuvat liialliseen trombiiniaktivaatioon.

**SDAT = Alzheimer-tyypin seniilidementia

***AMC = aminometyylikumariini