Эффективность артесуната-амодиахина и артеметер-люмефантрина при неосложненной малярии в Южном Киву, ДР Конго

3.1 ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ Детей с неосложненной малярией, отвечающих критериям включения, будут включать в исследование (после того, как их родители/опекуны дадут информированное согласие), лечить на месте исследуемыми препаратами и наблюдать за ними в течение 42 дней. Лекарства будут даваться под непосредственным наблюдением либо в клинике, либо дома. Последующее наблюдение должно состоять из фиксированного графика клинических и лабораторных исследований. На основании клинических и лабораторных данных дети будут классифицированы как дети с неэффективной терапией (ранняя или поздняя) или адекватно реагирующие.

Доля случаев, в которых терапевтическая неэффективность in vivo в течение периода наблюдения позволит оценить эффективность схем лечения. Будет проведен анализ полимеразной цепной реакции (ПЦР), чтобы отличить истинное обострение из-за неэффективности лечения от эпизодов повторного заражения. Это предложение соответствует последним рекомендациям ВОЗ по мониторингу противомалярийной эффективности в зонах с высоким, средним или низким уровнем передачи11.

3.2 ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Участком исследования будет зона обслуживания MSF медицинских центров Барака, MSF-OCA Барака, Южное Киву, ДРК.

3.3 ИССЛЕДУЕМАЯ ГРУППА Исследуемая популяция — дети в возрасте от 6 до 59 месяцев с неосложненной малярией, вызванной P. falciparum. Эта возрастная группа была выбрана потому, что она считается наиболее уязвимой и менее склонна к спонтанному излечению от инфекций по сравнению со старшими детьми и взрослыми. В гиперэндемичных районах они подвергаются наибольшему риску смерти от малярии.

3.4 ОПРЕДЕЛЕНИЯ 3.4.1 ОПРЕДЕЛЕНИЕ РОДИТЕЛЯ/ОПРЕДЕЛИТЕЛЯ Родитель/опекун определяется как член семьи в возрасте ≥ 18 лет, который ухаживает за пациентом и может предоставить точную информацию по всем демографическим и медицинским вопросам, связанным с пациентом, и присутствует при время опроса.

3.5 КРИТЕРИИ ВКЛЮЧЕНИЯ И ИСКЛЮЧЕНИЯ

Ребенок будет иметь право на участие в исследовании, если он/она соответствует всем следующим критериям включения:

• Возраст от 6 до 59 месяцев
• Вес ≥ 5 кг
• Подтвержденная на предметном стекле инфекция только Plasmodium falciparum (без смешанных инфекций)
• Плотность бесполых паразитов от 2000 до 200000/мкл крови
• Измеренная подмышечная температура ≥ 37,5°C
• Способность проглатывать пероральные лекарства
• Высокая вероятность соблюдения последующих посещений (проживание в пределах 1 часа ходьбы от ПДН, отсутствие планов предстоящих поездок и т. д.)
• Информированное согласие родителя или опекуна в возрасте не менее 18 лет.

Ребенок будет исключен из участия в исследовании, если он/она соответствует любому из следующих критериев исключения:

• Знаки общей опасности согласно определению ВОЗ (Приложение 5.1.1)
• Признаки тяжелой/осложненной малярии согласно определению ВОЗ (Приложение 5.1.2)
• Тяжелая анемия (гемоглобин < 5 г/дл)
• Известная гиперчувствительность к любому из исследуемых препаратов в анамнезе.
• Тяжелая острая недостаточность питания (соотношение массы тела к росту ниже -3 Z-показателя и/или симметричные отеки, затрагивающие как минимум стопы)
• Сопутствующее лихорадочное заболевание, вызванное причинами, отличными от малярии, которые могут исказить результаты исследования (корь, острая инфекция нижних дыхательных путей, средний отит, тонзиллит, абсцессы, тяжелая диарея с обезвоживанием).
• Получив уже полный курс исследуемого лечения (или одного из видов лечения) за предыдущие 28 дней (по указанию родителя/опекуна). Обратите внимание, что предыдущий неполный прием изучаемых противомалярийных препаратов или предыдущий прием противомалярийных препаратов, не находящихся на рассмотрении, не являются критериями исключения, но подробности любого такого приема должны быть тщательно зарегистрированы.
• История реакций гиперчувствительности или противопоказаний к любым тестируемым лекарствам.

3.6 ОБЪЕМ ВЫБОРКИ Недавние исследования определили, что 42-дневный риск рецидива паразитемии из-за рецидива (неэффективности лечения) у детей составляет от 0,9 до 6% при терапии Коартемом®14;17;21;22. Таким образом, на основе консервативно оцененного риска рецидива паразитемии (из-за рецидива, с поправкой на ПЦР) в 5%, мы подсчитали, что для выявления разницы в риске рецидива паразитемии между группами лечения без лечения потребуется 120 пациентов в группе лечения. более 7% (односторонняя ошибка I типа 5%, мощность 80%)23.

Предполагая, что повторные инфекции, неопределенные результаты ПЦР или потеря для последующего наблюдения происходят в 20% образцов, общий расчетный размер выборки этого исследования составит 288 детей в возрасте 6-59 месяцев (144 в каждой группе).

3.7 РАСПИСАНИЕ ОЦЕНОК День 0 — это день скрининга с клинической оценкой, первоначальным мазком крови на малярию, первым измерением гемоглобина, забором капиллярной крови перед лечением для ПЦР, регистрацией и введением первой дозы исследуемых препаратов. В день 1 и день 2 лечение будет продолжено, и дети будут повторно обследованы в клинике MSF.

Дети вернутся в клинику в следующие обязательные дни: 3, 7, 14, 21, 28, 35 и 42 день. При каждом плановом посещении будет проводиться клинический осмотр и мазок крови. Для поощрения посещения клиники будут предлагаться небольшие поощрения, такие как мыло, одеяла и возмещение транспортных расходов. Все дети, включенные в исследование, получают надкроватную сетку, обработанную инсектицидом длительного действия.

Если детям приходится возвращаться в клинику для внеплановых посещений, каждый раз клинические и лабораторные исследования будут проводиться по мере необходимости. В случае неэффективности лечения в любой день после 7-го дня будет взят образец капиллярной крови для ПЦР.

3.8 КОНЕЧНЫЕ ТОЧКИ ИССЛЕДОВАНИЯ Конечной точкой исследования является момент, когда пациент больше не будет находиться под наблюдением в контексте исследования эффективности. Достоверные конечные точки исследования включают неэффективность лечения, завершение периода наблюдения без неэффективности лечения, выбывание из наблюдения, выход из исследования (добровольный и недобровольный) и нарушение протокола11.

3.8.1 РАННЯЯ НЕУДАЧА ЛЕЧЕНИЯ (ETF)

• Развитие опасных признаков или тяжелой формы малярии на 1-й, 2-й или 3-й день при наличии паразитемии, или
• Паразитемия на 2-й день выше, чем на 0-й день, независимо от подмышечной температуры, или
• Паразитемия на 3-й день с подмышечной температурой ≥ 37,5°C или
• Паразитемия на 3-й день ≥ 25% от 0-го дня независимо от подмышечной температуры.

3.8.2 ПОЗДНЯЯ КЛИНИЧЕСКАЯ НЕДОСТАТОЧНОСТЬ (LCF)

• Развитие опасных признаков или тяжелой формы малярии в любой день с 4-го по 42-й день при наличии паразитемии (без предварительного соответствия какому-либо критерию ETF), или
• Наличие паразитемии и подмышечной температуры ≥ 37,5°C в любой день с 4-го по 42-й день (без предварительного соответствия какому-либо критерию ETF) 3.8.3 ПОЗДНЯЯ ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКАЯ НЕУДАЧА (ПНП)
• Наличие паразитемии и подмышечной температуры < 37,5°C в любой день с 7-го по 42-й день (без предварительного соответствия какому-либо критерию ETF или LCF) 3.8.4 АДЕКВАТНЫЙ КЛИНИЧЕСКИЙ И ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКИЙ ОТВЕТ (ACPR)
• Отсутствие паразитемии на 42-й день независимо от температуры в подмышечной впадине (без предварительного соответствия любому из критериев ETF, LCF или LPF) 3.8.5 НЕАНАЛИЗИРУЕМЫЕ КОНЕЧНЫЕ ТОЧКИ Конечная точка пациента не подлежит анализу, если он/она соответствует любому из следующих критериев после регистрации В исследовании. В исследованиях не меньшей эффективности анализ намерения лечить (ITT) часто увеличивает риск ложного заявления о не меньшей эффективности (ошибка типа I), поэтому здесь он не проводится24.

3.8.5.1 Нарушение протокола:

• Невыполнение полного курса исследуемого лечения, кроме случаев рвоты,
• Ошибочное зачисление пациента (не все критерии включения/исключения соблюдены),
• Прием любых противомалярийных препаратов или антибиотиков с противомалярийной активностью (котримоксазол, тетрациклин, за исключением глазной мази, доксициклин, эритромицин, клиндамицин, азитромицин), принимаемые третьим лицом или путем самолечения,
• Неправильная классификация конечной точки пациента (из-за лабораторной или клинической ошибки), ведущая к необоснованному назначению неотложной терапии,
• LCF или LPF с отсутствующим или неопределенным результатом ПЦР. 3.8.5.2 Отзыв:
• Тяжелая малярия, возникшая в день 0 после регистрации,
• Обнаружение (смешанной или моно-) инфекции видами, отличными от falciparum,
• Рвота любой исследуемой дозой более одного раза,
• Побочные эффекты исследуемого препарата настолько серьезны, что требуют прекращения лечения,
• Госпитализация по причине, отличной от малярии, что делает невозможным нормальное последующее наблюдение.
• Отзыв согласия

3.8.6 КОНЕЧНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ БЕЗОПАСНОСТИ Возникновение любого неблагоприятного события будет задокументировано. Всех пациентов будут регулярно спрашивать о предыдущих симптомах и о симптомах, появившихся после предыдущего контрольного визита. При наличии клинических показаний пациенты будут обследованы и пролечены соответствующим образом. Все серьезные нежелательные явления будут регистрироваться в форме истории болезни.

3.9 ИЗУЧЕНИЕ ЛЕЧЕНИЯ 3.9.1 ИСПЫТАННЫЕ СХЕМЫ

• Комбинация артесуната и амодиахина с фиксированной дозой, ASAQ FDC (артесунат-амодиахин Winthrop® Sanofi Aventis), принимаемая по 1 таблетке в день в течение 3 дней:

  • Артесунат 25 мг / амодиахин 67,5 мг: у детей от 5 до 8,9 кг.
  • Артесунат 50 мг / амодиахин 135 мг: 1 таблетка в день для детей от 9 до 17,9 кг.
  • Артесунат 100 мг / амодиахин 270 мг: 1 таблетка в день для детей от 18 до 34,9 кг.

• Артеметер 20 мг / люмефантрин 120 мг в таблетках (Coartem®, Novartis), принимаемых в виде шести доз два раза в день в течение трех дней:

  • 1 таб/доза для детей от 5 до 14,9 кг (всего 6 таб.)
  • 2 таблетки/доза для детей от 15 до 24,9 кг (всего 12 таблеток)
  • 2 таб/доза для веса 15-24,9 кг (всего 12 вкладок)
  • 3 таб/доза для веса 25-34,9 кг (всего 18 таблеток) Вторая доза Coartem® будет введена через 8 часов (ч) после первой дозы, введенной при зачислении. Следующие дозы будут вводиться через 24 часа, 36 часов, 48 часов и 60 часов после первой дозы. Пациентам дадут стакан молока или жирной пищи или порекомендуют кормить грудью перед приемом каждой дозы.

Исследуемые препараты будут из одной партии. Все исследуемые дозы будут контролироваться. Пациенты будут находиться под непосредственным наблюдением после приема в течение 30 минут. При возникновении рвоты вводят повторную дозу. Если повторная доза также вызывает рвоту, ребенок будет исключен из исследования и будет начато экстренное лечение.

Для введения вечерних доз Coartem® посетитель на дому/сельский медицинский работник приедет к пациенту домой через 8, 32 и 56 часов после приема первой дозы. Таким образом, набор в это исследование будет осуществляться только в OPD до 12:00. 3.9.2 СОПУТСТВУЮЩЕЕ ЛЕЧЕНИЕ Лихорадку выше 38°C можно лечить парацетамолом или ацетаминофеном, одна доза 20 мг/кг парацетамола, а затем 15 мг/кг с интервалом от 4 до 6 часов для домашнего лечения. Прохладное обтирание можно использовать для снижения температуры перед приемом лекарств.

Нежелательные явления, требующие лечения, можно лечить в соответствии с местной практикой. Если есть клинические показания для приема каких-либо дополнительных лекарств в ходе исследования, включая лекарства, назначаемые для лечения нежелательных явлений, связанных с исследуемым лекарством, название лекарства, дозировка, дата и время введения должны быть записаны на бланк отчета по делу. Дополнительные назначения могут быть даны при включении или во время последующего наблюдения по поводу состояний, отличных от малярии, хотя антибиотики с противомалярийной активностью (котримоксазол, тетрациклин, за исключением глазной мази, доксициклин, эритромицин, клиндамицин, азитромицин) не будут назначаться, если нет столь же эффективного альтернативы доступны. Любые такие предписания будут тщательно отмечены.

Следует избегать использования растительных лекарственных средств во время исследования, а участников следует поощрять возвращаться в место исследования для лечения, если они плохо себя чувствуют. Если во время исследования принимались какие-либо растительные лекарственные средства, это должно быть отражено в форме истории болезни в разделе «Прием исследуемого препарата».

Гематиники (такие как сульфат железа и фолиевая кислота) будут назначены для облегчения анемии в соответствии с ВОЗ25, если это необходимо.

3.9.3 СПАСАТЕЛЬНАЯ ЛЕЧЕНИЕ

Спасательное лечение малярии должно быть начато немедленно в соответствии с рекомендациями ВОЗ25 в следующих случаях:

• Прогрессирование до тяжелой формы малярии на 0-й день после регистрации
• Рвота любой исследуемой дозой более одного раза
• Ранняя неудача лечения
• Поздняя клиническая неудача
• Поздняя паразитологическая неудача
• Обнаружение во время последующего наблюдения не-P. falciparum (смешанная или моно-) инфекция, независимо от лихорадки. Спасательная терапия должна состоять из шести доз Коартема® в течение 3 дней для детей, получавших АСК в качестве исследуемого лечения, или АСК для детей, получавших Коартем® в качестве исследуемого лечения. .
• В случаях тяжелой малярии неотложной терапией будет внутривенное введение артесуната в дозе 2,4 мг/кг в 0, 12 и 24 часа, затем каждые 24 часа, пока пациент не сможет принимать пероральную терапию (за этим последуют 3 дня полного курс АКТ) Виды, не относящиеся к falciparum, обнаруженные во время последующего наблюдения, следует лечить хлорохином в течение 3 дней в случае заражения P. vivax или P. ovale.

Как только начато спасательное лечение, обычное последующее наблюдение за пациентом прекращается по мере достижения конечной точки. Тем не менее, пациентов, получающих неотложную терапию, попросят вернуться в исследовательскую клинику хотя бы один раз, чтобы исследовательская группа могла проверить, было ли лечение эффективным.

3.10 ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ 3.10.1 СКРИНИНГ И УЧЕТ (ДЕНЬ 0) Все дети в возрасте от 6 до 59 месяцев, поступившие в клинику Baraka Health с лихорадкой или лихорадкой в ​​анамнезе и положительным результатом ДЭТ и без признаков опасности (Приложение 5.1.1). будут отправлены в исследовательскую клинику для скрининга.

Всем пациентам, входящим в процесс скрининга, будет присвоен последовательный номер скрининга. Форма скрининга (Приложение 5.2) будет использоваться для записи общей информации и клинических наблюдений каждого пациента, проходящего скрининг. Каждый пациент будет повторно оцениваться на наличие признаков опасности и признаков тяжелой малярии. Затем окружность средней части плеча (MUAC) будет использоваться в качестве инструмента скрининга недоедания. Будет проведена первоначальная клиническая оценка, включая критерии включения и исключения, предыдущую историю лечения (включая прием любых противомалярийных препаратов), клиническое обследование и вес для роста у детей с MUAC.

Будут приняты меры для выявления ранних признаков лихорадочных заболеваний, кроме малярии, поскольку их наличие потребует исключения из исследования. Эти пациенты не будут включены в исследование, но их следует лечить как от малярии (если у них есть паразитемия), так и от другой инфекции, в зависимости от обстоятельств.

Если пациент соответствует клиническим критериям включения, он/она будет обследован на наличие критериев включения крови (стр. Моноинфекция Falciparum, плотность паразитов и уровень гемоглобина). Толстый и тонкий мазки малярии берутся на одном и том же предметном стекле в двух экземплярах, и один мазок окрашивается. При этом будет взят образец капиллярной крови на Fast Technology for Analysis (нуклеиновых кислот) или FTA Cards для ПЦР-анализа. Пациент будет ждать результата толстого мазка.

Если все критерии включения соблюдены, пациенту будет предложено включиться в исследование. Цель исследования будет объяснена родителю/опекуну, которому должно быть не менее 18 лет, и будет запрошено письменное информированное согласие (Приложение 5.4). Все родители/опекуны получат информационный лист, содержащий цель исследования и контактные данные исследовательской группы (Приложение 0).

Если родитель/опекун соглашается включить ребенка в исследование, ребенку будет присвоен уникальный идентификационный номер пациента и браслет с идентификационным номером. Административные данные будут записаны (имя ребенка и родителя/опекуна, пол, возраст, адрес и указания) в регистрационной форме (Приложение 5.5). График приема будет четко объяснен, и будет выдана карта последующего наблюдения с уникальным идентификационным номером пациента.

Перед началом исследования каждому уникальному идентификационному номеру пациента будет присвоена схема лечения, и эта информация будет содержаться в запечатанных конвертах. Первая доза исследуемого препарата будет выдана в поликлинике (для детей, которые не могут глотать, таблетки Коартем® будут растворены, а таблетки ASAQ измельчены в минимальном количестве воды и выданы с помощью шприца или пипетки). Потребление будет наблюдаться в течение 30 минут. Если у ребенка рвота, перед попыткой повторной дозы следует соблюдать 15-минутный период отдыха. Любые сопутствующие рецепты будут собираться в назначенной аптеке, и будут приняты меры к тому, чтобы инструкции по домашнему лечению были понятны родителю/опекуну.

Перед отправкой домой родителю/опекуну пациента будет неоднократно рекомендовано вернуть его/ее в исследовательскую клинику в любое время, если симптомы сохраняются или ухудшаются.

Для введения вечерних доз Coartem® посетитель на дому/сельский медицинский работник приедет к пациенту домой через 8, 32 и 56 часов после приема первой дозы. Таким образом, набор в это исследование будет происходить только в OPD до 12 часов дня.

3.10.2 ПОСЛЕДУЮЩИЕ НАБЛЮДЕНИЯ (ДЕНЬ 1 ДО ДНЯ 42) В дни 1 и 2 лечение исследуемым лекарственным средством продолжают; четвертая (день 1) и шестая (день 2) дозы Coartem® будут вводиться на дому, как описано выше, посетителем на дому. Однако все пациенты вернутся в клинику MSF для клинического обследования (включая измерение подмышечной температуры) и паразитологического исследования на предмет малярии. Все ASAQ и 3-я и 5-я дозы Coartem® будут наблюдаться во время этих визитов в клинику.

В дни 3, 7, 14, 21, 28, 35 и 42 все пациенты вернутся в клинику MSF для клинического обследования (включая температуру в подмышечной впадине) и исследования мазка крови.

Если наблюдается неэффективность лечения (ETF, LCF или LPF), будет начато спасательное лечение. Для LCF или LPF, возникающих после 7-го дня (поскольку, если есть повторное заражение, оно не приведет к клиническим симптомам до 7-го дня, поэтому мы можем предположить, что это рецидив), будет взят второй образец крови на карты FTA для ПЦР-анализа.

В случае незапланированных посещений пациентов будет проведена клиническая оценка и может быть взят предмет на предмет малярии (и образец крови для ПЦР в случае неэффективности лечения), если есть признаки и симптомы возможной малярии.

Перед отправкой домой после каждого визита родителям/опекунам будет рекомендовано в любое время привести пациента в клинику MSF в случае какого-либо заболевания. В случае возникновения чрезвычайной ситуации в нерабочее время родителям/опекунам будет рекомендовано взять с собой визитную карточку и проинформировать персонал службы экстренной помощи о включении их ребенка в исследование.

Персоналу службы экстренной помощи будут даны инструкции сообщить всю информацию о происшествии координатору исследования на следующее утро.

Попытки отследить детей, которые не явились для запланированных посещений, будут немедленно предприняты патронажным работником, чтобы свести к минимуму потери для последующего наблюдения.

Пациенты, которые не вернутся в 1-й и 2-й дни и пропустят одну дозу лечения, будут исключены из исследования. После 3-го дня пациенты, которые не вернулись на 7-й день, но присутствуют на 6-й или 8-й день (аналогично дни 13/15, дни 20/22, дни 27/29, дни 34/36 и дни 41/43), все еще могут быть включены в анализ.

3.10.3 МЕТОДЫ ИЗМЕРЕНИЙ

• Вес измеряется с точностью до 100 г на подвесных весах (Salter), правильно откалиброванных, при этом на ребенке остается только нижнее белье.
• Рост будет измеряться на деревянной доске, попросив ребенка встать, если он / она > 85 см, или уложив ребенка горизонтально, если он / она < 85 см.
• MUAC измеряется на левой руке посередине между локтем и плечом и записывается с точностью до миллиметра.
• Отек оценивают по 3-секундному давлению большого пальца на тыльную поверхность обеих стоп.
• Подмышечную температуру будут измерять калиброванным цифровым термометром, отградуированным в градусах Цельсия, с точностью до 0,1°C. Если результат

3.11 ЛАБОРАТОРНЫЕ МЕТОДЫ 3.11.1 МАЛЯРИАЦИОННЫЕ СТЕКЛА

Толстый и тонкий мазки готовят на одном и том же предметном стекле и окрашивают в 10% растворе Гимза (pH 7,2) в течение 10-15 минут. Все мазки должны быть прочитаны до 100 полей, прежде чем их можно будет признать отрицательными. Вид будет подтвержден на тонком мазке. Количественное определение бесполой паразитемии P. falciparum в толстом мазке будет проводиться в соответствии с протоколом ВОЗ26. Паразиты будут подсчитываться относительно не менее 200 лейкоцитов/лейкоцитов (WBC), а плотность паразитов (выраженная в паразитах на мкл крови) будет рассчитываться при нормальном уровне 8000 WBC/мкл:

Плотность паразитов (/мкл) = количество подсчитанных паразитов x 8000 / количество подсчитанных лейкоцитов. Если 500 паразитов подсчитаны до достижения 200 лейкоцитов, подсчет будет остановлен в конце этого поля, и паразитемия будет рассчитана по приведенной выше формуле. Если после 200 лейкоцитов будет подсчитано менее 10 паразитов, подсчет будет расширен до 500 лейкоцитов.

Наличие или отсутствие гаметоцитов P. falciparum не влияет на классификацию конечной точки, но будет тщательно и систематически регистрироваться. Если мазок содержит гаметоциты, но не содержит трофозоитов (бесполых паразитов), он считается отрицательным.

Два квалифицированных микроскописта будут независимо считывать все слайды, а плотность паразитов будет рассчитана путем усреднения двух подсчетов. Мазки крови с противоречивыми результатами (различия между двумя микроскопистами в видовом диагнозе, в плотности паразитов > 50% или в присутствии паразитов) будут повторно исследованы третьим, независимым микроскопом, и плотность паразитов будет рассчитана путем усреднения двух результатов. ближайшие подсчеты.

Все мазки крови будут уничтожены после завершения анализа данных. 3.11.2 ИЗМЕРЕНИЕ ГЕМОГЛОБИНА Анализатор HemoCue B-Haemoglobin (Ангельхольм, Швеция) будет использоваться для измерения гемоглобина в день 0 или в любой другой день, если это клинически оправдано.

3.11.3 ПЦР-ГЕНОТИПИРОВАНИЕ Анализ ПЦР-генотипирования будет проводиться для того, чтобы отличить истинное рецидивирование (тот же штамм паразита) от вновь приобретенной инфекции (другой штамм паразита). Образцы капиллярной крови для ПЦР будут собираться у всех пациентов при включении в исследование и во время последующего наблюдения в случае LCF или LPF после 7-го дня.

2-3 капли капиллярной крови будут собираться на карты FTA, храниться индивидуально в пакетах с застежкой-молнией с осушителем и храниться вдали от влаги, чрезмерного тепла и света.

Генотипирование будет проводиться в отделении медицинской микробиологии Академического медицинского центра (Амстердам, Нидерланды) под руководством профессора доктора Тома ван Гула. Будет подписано соглашение о передаче материалов. Процедура генотипирования будет основана на сравнении генотипа с двумя локусами, полученного в результате экспрессии аллелей генов P. falciparum MSP-1 и MSP-2 в образцах до (зачисление) и после лечения (неудача)27. Пары до и после лечения с одинаковым генотипом будут классифицироваться как рецидив (истинная неудача), а пары с другим генотипом будут классифицироваться как повторное инфицирование.

3.11.4 КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ДИАГНОСТИКИ МАЛЯРИИ Перед началом исследования будут установлены правильные лабораторные процедуры, такие как техника окрашивания, время окрашивания, разведение и представление данных. Будет проведено слепое повторное чтение обычных слайдов малярии (из которых не менее 20 будут положительными) и рассмотрены несоответствия.

В конце исследования предусматривается внешний контроль качества с участием эталонной паразитологической лаборатории на случайной выборке из 20 положительных мазков, собранных в период с 0 по 42 день.

3.11.5 МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МАРКЕРЫ УСТОЙЧИВОСТИ К ПРОТИВОМАЛЯРИАЛЬНЫМ ЛЕКАРСТВЕННЫМ СРЕДСТВАМ В настоящее время не существует четких молекулярных маркеров, связанных со снижением восприимчивости к АКТ. Поэтому мы не планируем в данный момент изучать молекулярные маркеры резистентности к АКТ. Однако была идентифицирована область хромосомы 13 в геноме P. falciparum, которая связана со снижением скорости элиминации паразитов в ответ на АКТ28. Если предполагаемые маркеры устойчивости к артемизинину будут выявлены в течение следующих 5 лет, карты FTA из этого исследования должны быть предоставлены во Всемирную сеть противомалярийной устойчивости (WWARN) для анализа. Разрешение на хранение карточек FTA при температуре -70⁰C в Амстердамском медицинском центре, Нидерланды, в течение 5 лет после окончания исследования и их использование для определения молекулярных маркеров резистентности будет запрошено в формах информированного согласия.

3.12 АНАЛИЗ ДАННЫХ 3.12.1 УПРАВЛЕНИЕ ДАННЫМИ Все регистрационные формы (CRF) ежедневно дважды вводятся с использованием программного обеспечения EpiData 3.1 (Оденсе, Дания), объединяются (с проверкой несоответствий) и анализируются с использованием статистического программного обеспечения Stata (Stata Corporation, США). . Промежуточный анализ ранней неудачи лечения будет проведен после того, как все участники достигнут 3-го дня и будут доступны результаты их мазка крови. Это делается для того, чтобы на ранней стадии оценить, следует ли отвергать гипотезу не меньшей эффективности в отношении ранней неэффективности лечения. По окончании анализа исследования все ИРК и другие исходные данные (формы согласия, лабораторные журналы, формы скрининга и т. д.) будут надежно храниться на уровне столицы. Данные также будут переданы в базу данных WWARN для международного мониторинга устойчивости к противомалярийным препаратам. Копия CRF также будет храниться не менее 5 лет в MSF-OCA в Амстердаме. Главный исследователь несет ответственность за хранение всех форм скрининга, формы отчета о болезни и заполненного списка идентификационных кодов субъекта в надежном месте.

3.12.2 ПЛАН АНАЛИЗА

• Описание исследования: количество пациентов, прошедших скрининг, количество пациентов с инфекцией P. falciparum, количество пациентов, инфицированных другими видами Plasmodium, количество исключенных пациентов (и, если возможно, причины неприемлемости), количество включенных, рандомизированные и поддающиеся анализу пациенты
• Достоверность исследования: результаты внутреннего и внешнего лабораторного контроля качества, % от общего числа пациентов, не поддающихся анализу, и % от общего числа пациентов, не поддающихся анализу, и % выбытия для последующего наблюдения.
• Характеристики включенных пациентов: возраст, пол, соотношение массы тела к росту, предыдущий прием противомалярийных препаратов, температура в подмышечной впадине, плотность паразитов, носительство гаметоцитов, гемоглобин. Для проверки адекватности рандомизации будет проведен критерий хи-квадрат.
• Описание конечных точек исследования: количество ETF, LCF, LPF и ACPR на 42-й день. Аналогичные исходы будут оцениваться на 28-й день для сравнения с эффективностью на 42-й день.
• Нежелательные явления: доля нежелательных явлений и серьезных нежелательных явлений у всех пациентов, включенных в исследование для каждого препарата;
• ПЦР-генотипический анализ: количество проанализированных образцов, количество эпизодов рецидива и повторного заражения, количество смешанных и неопределенных результатов
• Оценки эффективности: Методы анализа выживаемости Каплана-Мейера будут использоваться с корректировкой генотипа и без нее. Пациенты, исключенные из исследования, потерянные для последующего наблюдения или имеющие повторное инфицирование, исключаются из анализа в этот день. Пациенты с рецидивом паразитемии, но с отсутствующими или неопределенными результатами ПЦР должны быть подвергнуты цензуре во время последнего визита, когда мазок на малярию оказался отрицательным (поскольку известно, что пациент был «излечен» в этот момент).
• Анализ данных: анализ по протоколу с последующим анализом выживаемости с использованием метода Каплана-Мейера. В дополнение к причинам исключения, перечисленным выше, пациенты будут считаться исключенными из анализа, если результаты ПЦР не поддаются классификации или если результаты ПЦР указывают на то, что неудача связана с повторным заражением P. vivax. P. malariae или P. ovale. Кумулятивная частота успешных и неудачных попыток на 28/42 день, без поправки ПЦР и с поправкой на ПЦР для каждого препарата; и будет рассчитана доля ранней неудачи лечения, поздней клинической неудачи, поздней паразитологической неудачи и адекватного клинического и паразитологического ответа на 28/42 день, с 95% доверительными интервалами, без поправки ПЦР и с поправкой на ПЦР 3.12.3 ОТЧЕТ ОБ ИССЛЕДОВАНИИ В конце исследования главный исследователь представит отчет об исследовании и его основных результатах. Этот отчет будет передан Национальной программе борьбы с малярией и Министерству здравоохранения.

Результаты исследования будут представлены на соответствующих научных встречах и, возможно, опубликованы в рецензируемом журнале. Данные также будут переданы в базу данных WWARN для международного мониторинга устойчивости к противомалярийным препаратам.

Результаты исследования будут доведены до лидеров сообщества и на встречах с пациентами. Результаты будут отображаться на непрофессиональном языке в поликлинике.