Биомаркеры при полирадикулонейропатиях (BIP)

Актуальность: Воспалительные демиелинизирующие полирадикулонейропатии являются редкими инвалидизирующими аутоиммунными заболеваниями, поражающими периферическую нервную систему. Эти невропатии могут быть острыми, когда признаки и симптомы появляются менее чем через 1 месяц (синдром Гийена-Барре, СГБ), или хроническими, когда ухудшение продолжается более 2 месяцев с момента начала заболевания (CIDP). Около половины пациентов с СГБ имеют антитела IgG1 или IgG3 к ганглиозидам. Ганглиозиды представляют собой гликолипидные структуры, преимущественно локализующиеся в узлах и параузлах. У больных ХВДП аутоантитела IgG4, направленные против узловых (Nfasc-186) или паранодальных (Nfasc-155, CNTN1, Caspr-1) белков, обнаруживаются у 5–10 %. У большинства пациентов с СГБ и ХВДП антигенная мишень неизвестна, а клинических биомаркеров катастрофически не хватает, чтобы помочь в диагностике и назначении лечения. Целью настоящего исследования является выявление новых биомаркеров у пациентов с ОВДП и ХВДП.

Методы. Исследователи проводят национальное ретроспективное и проспективное исследование для выявления новых антигенных мишеней у пациентов с СГБ и ХВДП. С 2015 года Институт неврологии Монпелье и университетские больницы Монпелье собирают клинические, иммунологические, электрофизиологические и гистологические данные пациентов с СГБ и ХВДП. Каждый пациент, у которого уже была собрана сыворотка, дал письменное информированное согласие. СГБ и ХВДП диагностируются в соответствии с современными критериями. Антитела к ганглиозидам (с помощью иммунодот-блоттинга) и антитела к Nfasc155, -CNTN1, -Nfasc186 и -Caspr-1 (с помощью ИФА и анализа связывания клеток) оценивают у пациентов с СГБ и ХВДП соответственно. Среди пациентов с ХВДП с моноклональной гаммапатией исключены пациенты с анти-MAG-антителами, повышением уровня VEGF, AL-амилоидозом и нейролимфоматозом. Сыворотку пациентов также тестируют с помощью иммуногистохимического окрашивания волокон седалищного нерва мыши дикого типа и GalNacT-/-.

Клинические и электрофизиологические фенотипы сравнивают между пациентами с положительным и отрицательным иммуноокрашиванием. Локализация окрашивания (т. узла Ранвье, паранодальной области и/или миелиновой оболочки) в качестве подкласса и изотипа аутоантител.

Поиск новой антигенной мишени проводят у пациентов с СГБ и ХВДП, которые являются i) серонегативными по антиганглиозидным и анти-Nfasc155, -CNTN1, -Nfasc186 и -Caspr-1 антителам и демонстрируют ii) положительное иммуноокрашивание на диких типа и GalNacT-/- волокна седалищного нерва мыши. Затем сыворотки этих отобранных пациентов инкубируют с нейрональными и глиальными клетками в культуре (спинальные дорсальные ганглии, мотонейроны, шванновские клетки, олигодендроциты и нейроны неокортекса). В случае положительного результата против клеточной культуры проводят иммунопреципитацию и комплекс антиген/антитело разделяют на SDS-PAGE 4-12% геле и электрофоретические полосы анализируют масс-спектрометрией.

Целью данного исследования является выявление новых антигенных мишеней у серонегативных пациентов с СГБ и ХВДП, проявляющих иммунореактивность. Знание этих новых целей может улучшить наши диагностические инструменты и помочь разработать таргетные методы лечения.