Biomarcatori nelle poliradicoloneuropatie (BIP)

Background: Le poliradicoloneuropatie infiammatorie demielinizzanti sono rare malattie autoimmuni invalidanti che colpiscono il sistema nervoso periferico. Queste neuropatie possono essere acute, quando segni e sintomi aumentano in meno di 1 mese (sindrome di Guillain-Barré, GBS), o croniche, quando i peggioramenti continuano per più di 2 mesi dall'esordio (CIDP). Circa la metà dei pazienti con GBS presenta anticorpi anti-gangliosidi IgG1 o IgG3. I gangliosidi sono strutture glicolipidiche localizzate principalmente nelle aree dei nodi e dei paranodi. Nei pazienti con CIDP, gli autoanticorpi IgG4 diretti contro le proteine ​​nodali (Nfasc-186) o paranodali (Nfasc-155, CNTN1, Caspr-1) si trovano nel 5-10%. Nella maggior parte dei pazienti con GBS e CIDP, il bersaglio antigenico è sconosciuto e i biomarcatori clinici sono gravemente carenti per aiutare la diagnosi e l'orientamento al trattamento. Lo scopo del presente studio è identificare nuovi biomarcatori nei pazienti con AIDP e CIDP.

Metodi: i ricercatori conducono uno studio nazionale retrospettivo e prospettico per identificare nuovi bersagli antigenici nei pazienti GBS e CIDP. Dal 2015, l'Istituto di Neuroscienze di Montpellier e gli Ospedali Universitari di Montpellier raccolgono dati clinici, immunologici, elettrofisiologici e istologici di pazienti GBS e CIDP. Ogni paziente il cui siero è già stato raccolto ha dato il consenso informato scritto. GBS e CIDP sono diagnosticati secondo i criteri attuali. Gli anticorpi anti-gangliosidi (mediante immunodot-blot) e gli anticorpi anti-Nfasc155, -CNTN1, -Nfasc186 e -Caspr-1 (mediante ELISA e saggio di legame cellulare) sono valutati rispettivamente nei pazienti con GBS e CIDP. Tra i pazienti CIDP con gammapatia monoclonale, sono esclusi quelli che presentano anticorpi anti-MAG, VEGF in aumento, amiloidosi AL e neurolinfomatosi. Il siero dei pazienti viene anche testato mediante colorazione immunoistochimica su fibre del nervo sciatico wild-type e GalNacT -/- di topo.

I fenotipi clinici ed elettrofisiologici vengono confrontati tra pazienti con immunocolorazione positiva e negativa. Localizzazione della colorazione (es. nodo di Ranvier, regione paranodale e/o guaina mielinica) come sottoclasse e isotipo dell'autoanticorpo.

La ricerca di un nuovo bersaglio antigenico viene eseguita in pazienti GBS e CIDP che sono i) sieronegativi per anticorpi antiganglioside e anti-Nfasc155, -CNTN1, -Nfasc186 e -Caspr-1, e che presentano ii) un'immunocolorazione postiva su wild- tipo e fibre del nervo sciatico di topo GalNacT-/-. Quindi, i sieri di questi pazienti selezionati vengono incubati con cellule neuronali e gliali in coltura (gangli dorsali spinali, motoneuroni, cellule di Schwann, oligodendrociti e neuroni neocorticali). In caso di positività contro coltura cellulare si esegue una immunoprecipitazione e si separa il complesso antigene/anticorpo su gel SDS-PAGE 4-12% e si analizzano le bande elettroforetiche mediante spettrometria di massa.

Lo scopo di questo studio è identificare nuovi bersagli antigenici in pazienti sieronegativi per GBS e CIDP che mostrano immunoreattività. La conoscenza di questi nuovi bersagli può migliorare i nostri strumenti diagnostici e potrebbe aiutare a sviluppare terapie mirate.