Biomarcadores em Polirradiculoneuropatias (BIP)

Introdução: As polirradiculoneuropatias desmielinizantes inflamatórias são doenças autoimunes incapacitantes raras que afetam o sistema nervoso periférico. Essas neuropatias podem ser agudas, quando os sinais e sintomas aumentam em menos de 1 mês (síndrome de Guillain-Barré, GBS), ou crônicas, quando as deteriorações continuam por mais de 2 meses desde o início (CIDP). Cerca de metade dos pacientes com GBS apresentam anticorpos anti-gangliosídeos IgG1 ou IgG3. Os gangliosídeos são estruturas glicolipídicas localizadas principalmente nas áreas nodais e paranodais. Em pacientes com CIDP, autoanticorpos IgG4 direcionados contra proteínas nodais (Nfasc-186) ou paranodais (Nfasc-155, CNTN1, Caspr-1) são encontrados em 5 a 10%. Na maioria dos pacientes com GBS e CIDP, o alvo antigênico é desconhecido e os biomarcadores clínicos são criticamente ausentes para ajudar no diagnóstico e na orientação do tratamento. O objetivo do presente estudo é identificar novos biomarcadores em pacientes AIDP e CIDP.

Métodos: Os investigadores conduzem um estudo nacional retrospectivo e prospectivo para identificar novos alvos antigênicos em pacientes com GBS e CIDP. Desde 2015, o Instituto de Neurociências de Montpellier e os Hospitais Universitários de Montpellier coletam dados clínicos, imunológicos, eletrofisiológicos e histológicos de pacientes com GBS e CIDP. Cada paciente cujo soro já foi coletado deu consentimento informado por escrito. GBS e CIDP são diagnosticados de acordo com os critérios atuais. Anticorpos anti-gangliosídeos (por imunodot-blot) e anticorpos anti-Nfasc155, -CNTN1, -Nfasc186 e -Caspr-1 (por ELISA e ensaio de ligação celular) são avaliados em pacientes com GBS e CIDP, respectivamente. Entre os pacientes CIDP com gamapatia monoclonal, aqueles que apresentam anticorpos anti-MAG, aumento de VEGF, amiloidose AL e neurolinfomatose são excluídos. O soro dos pacientes também é testado por coloração imuno-histoquímica em fibras de nervo ciático de camundongo tipo selvagem e GalNacT -/-.

Fenótipos clínicos e eletrofisiológicos são comparados entre pacientes com imunomarcação positiva e negativa. Localização da coloração (i.e. nódulo de Ranvier, região paranodal e/ou bainha de mielina) como subclasse e isotipo do autoanticorpo são especificados.

A busca por um novo alvo antigênico é realizada em pacientes com GBS e CIDP que são i) soronegativos para antigangliosídeo e anticorpos anti-Nfasc155, -CNTN1, -Nfasc186 e -Caspr-1, e apresentando ii) imunomarcação positiva em wild- type e fibras do nervo ciático de camundongo GalNacT-/-. Em seguida, os soros desses pacientes selecionados são incubados com células neuronais e gliais em cultura (gânglios espinhais dorsais, motoneurônios, células de Schwann, oligodendrócitos e neurônios neocorticais). No caso de positividade contra cultura celular, é realizada imunoprecipitação e o complexo antígeno/anticorpo é separado em gel SDS-PAGE 4-12% e as bandas eletroforéticas são analisadas por espectrometria de massas.

O objetivo deste estudo é identificar novos alvos antigênicos em pacientes GBS e CIDP soronegativos que apresentam imunorreatividade. O conhecimento desses novos alvos pode melhorar nossas ferramentas de diagnóstico e ajudar a desenvolver terapias direcionadas.