Biomarkery u polyradikuloneuropatií (BIP)

Východiska: Zánětlivé demyelinizační polyradikuloneuropatie jsou vzácná invalidizující autoimunitní onemocnění postihující periferní nervový systém. Tyto neuropatie mohou být akutní, kdy se příznaky a symptomy zvyšují za méně než 1 měsíc (Guillain-Barrého syndrom, GBS), nebo chronické, kdy zhoršování pokračuje déle než 2 měsíce od začátku (CIDP). Přibližně polovina pacientů s GBS má protilátky IgG1 nebo IgG3 proti gangliosidům. Gangliosidy jsou glykolipidové struktury lokalizované hlavně v oblasti uzlin a paranod. U pacientů s CIDP se autoprotilátky IgG4 namířené proti nodálním (Nfasc-186) nebo paranodálním (Nfasc-155, CNTN1, Caspr-1) proteinům nacházejí v 5 až 10 %. U většiny pacientů s GBS a CIDP je antigenní cíl neznámý a klinické biomarkery kriticky chybí, aby pomohly při diagnostice a orientaci v léčbě. Cílem této studie je identifikovat nové biomarkery u pacientů s AIDP a CIDP.

Metody: Výzkumníci provádějí národní retrospektivní a prospektivní studii k identifikaci nových antigenních cílů u pacientů s GBS a CIDP. Od roku 2015 Institut pro neurovědy v Montpellier a Univerzitní nemocnice v Montpellier shromažďují klinická, imunologická, elektrofyziologická a histologická data pacientů s GBS a CIDP. Každý pacient, jehož sérum již bylo odebráno, dal písemný informovaný souhlas. GBS a CIDP jsou diagnostikovány podle aktuálních kritérií. Anti-gangliosidové protilátky (imunodot-blot) a anti-Nfasc155, -CNTN1, -Nfasc186 a -Caspr-1 protilátky (pomocí ELISA a testu buněčné vazby) jsou hodnoceny u pacientů s GBS a CIDP, v daném pořadí. Mezi pacienty s CIDP s monoklonální gamapatií jsou vyloučeni pacienti s anti-MAG protilátkami, zvýšením VEGF, AL amyloidózou a neurolymfomatózou. Sérum pacientů je také testováno imunohistochemickým barvením na myších ischiatických nervových vláknech divokého typu a GalNacT -/- myší.

Klinické a elektrofyziologické fenotypy jsou srovnávány mezi pacienty s pozitivním a negativním imunobarvením. Lokalizace zabarvení (tj. uzel Ranvier, paranodální oblast a/nebo myelinová pochva) jako podtřída a izotyp autoprotilátky.

Hledání nového antigenního cíle se provádí u pacientů s GBS a CIDP, kteří jsou i) séronegativy pro antigangliosidové a anti-Nfasc155, -CNTN1, -Nfasc186 a -Caspr-1 protilátky a vykazující ii) pozitivní imunobarvení na divoké- typu a GalNacT-/- myší sedacích nervových vláken. Poté jsou séra těchto vybraných pacientů inkubována s neuronovými a gliovými buňkami v kultuře (spinální dorzální ganglia, motoneurony, Schwannovy buňky, oligodendrocyty a neokortikální neurony). V případě pozitivity proti buněčné kultuře se provede imunoprecipitace a komplex antigen/protilátka se oddělí na SDS-PAGE 4-12% gelu a elektroforetické pásy se analyzují hmotnostní spektrometrií.

Cílem této studie je identifikovat nové antigenní cíle u séronegativních pacientů s GBS a CIDP vykazujících imunoreaktivitu. Znalost těchto nových cílů může zlepšit naše diagnostické nástroje a mohla by pomoci vyvinout cílené terapie.