Biomarkery w poliradikuloneuropatii (BIP)

Wstęp: Zapalne poliradikuloneuropatie demielinizacyjne są rzadkimi chorobami autoimmunologicznymi powodującymi niesprawność obwodowego układu nerwowego. Te neuropatie mogą być ostre, gdy objawy przedmiotowe i podmiotowe nasilają się w czasie krótszym niż 1 miesiąc (zespół Guillain-Barré, GBS) lub przewlekłe, gdy pogorszenie trwa dłużej niż 2 miesiące od początku (CIDP). Około połowa pacjentów z GBS ma przeciwciała IgG1 lub IgG3 przeciwko gangliozydom. Gangliozydy są strukturami glikolipidowymi zlokalizowanymi głównie w okolicy węzłów i paranod. U pacjentów z CIDP autoprzeciwciała IgG4 skierowane przeciwko białkom węzłowym (Nfasc-186) lub paranodalnym (Nfasc-155, CNTN1, Caspr-1) stwierdza się u 5 do 10%. U większości pacjentów z GBS i CIDP cel antygenowy jest nieznany, a biomarkerów klinicznych bardzo brakuje, aby pomóc w postawieniu diagnozy i ukierunkowaniu leczenia. Celem niniejszej pracy jest identyfikacja nowych biomarkerów u pacjentów z AIDP i CIDP.

Metody: Badacze przeprowadzają krajowe badanie retrospektywne i prospektywne w celu zidentyfikowania nowych celów antygenowych u pacjentów z GBS i CIDP. Od 2015 roku Institute for Neurosciences of Montpellier i University Hospitals of Montpellier zbierają dane kliniczne, immunologiczne, elektrofizjologiczne i histologiczne pacjentów z GBS i CIDP. Każdy pacjent, u którego już pobrano surowicę, wyraził pisemną świadomą zgodę. GBS i CIDP są rozpoznawane zgodnie z obowiązującymi kryteriami. Przeciwciała przeciw gangliozydom (metodą immunodot-blot) i przeciwciała anty-Nfasc155, -CNTN1, -Nfasc186 i -Caspr-1 (metodą ELISA i testem wiązania komórek) ocenia się odpowiednio u pacjentów z GBS i CIDP. Wśród pacjentów z CIDP z gammapatią monoklonalną wyklucza się pacjentów z przeciwciałami anty-MAG, zwiększonym VEGF, amyloidozą AL i neurolymphomatozą. Surowicę pacjentów bada się również przez barwienie immunohistochemiczne włókien nerwu kulszowego myszy typu dzikiego i GalNacT-/-.

Porównuje się fenotypy kliniczne i elektrofizjologiczne między pacjentami z pozytywnym i negatywnym odczynem immunologicznym. Lokalizacja barwienia (tj. węzeł Ranviera, region przywęzłowy i/lub otoczka mielinowa) jako podklasę i izotyp autoprzeciwciała.

Poszukiwanie nowego celu antygenowego przeprowadza się u pacjentów z GBS i CIDP, którzy są i) seronegatywni w kierunku przeciwciał antygangliozydowych i anty-Nfasc155, -CNTN1, -Nfasc186 i -Caspr-1, a także mają ii) dodatnie barwienie immunologiczne na dzikich typ i GalNacT-/- włókna nerwu kulszowego myszy. Następnie surowice tych wybranych pacjentów inkubuje się z hodowlą komórek nerwowych i glejowych (zwojów rdzeniowych grzbietowych, neuronów ruchowych, komórek Schwanna, oligodendrocytów i neuronów kory nowej). W przypadku pozytywnego wyniku w stosunku do hodowli komórkowej przeprowadza się immunoprecypitację i rozdziela kompleks antygen/przeciwciało na 4-12% żelu SDS-PAGE i analizuje prążki elektroforetyczne za pomocą spektrometrii mas.

Celem tego badania jest identyfikacja nowych celów antygenowych u seronegatywnych pacjentów z GBS i CIDP wykazujących immunoreaktywność. Znajomość tych nowych celów może udoskonalić nasze narzędzia diagnostyczne i pomóc w opracowaniu terapii celowanych.